抗c-MET抗体及其在治疗癌症中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种特异性结合c‑Met蛋白sema结构域的抗体及其抗癌用途，所述抗体能够以较高的亲和力结合c‑Met蛋白，能够抑制肿瘤生长，用于预防或治疗癌症，有着广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
抗c-MET抗体及其在治疗癌症中的应用
本专利技术涉及生物医药领域，具体的涉及抗c-MET抗体及其在治疗非小细胞肺癌、胃癌、肝癌等癌症中的应用。
技术介绍
c-Met是原癌基因c-Met编码的一种酪氨酸激酶受体，位于细胞膜表面，是肝细胞生长因子/生长因子(Hepmocytegrowthfactor/ScatterNcmr，HGF/SF)在体内唯一的受体。c-Met受体在体内以无活性的单体形式被合成，在弗林蛋白酶的作用下水解成有活性的双链结构。成熟的c-Met受体是由一个140kDa的跨膜片段β链和一个50kDa的胞外片段α链组成，这两个亚基由二硫键连接形成一个185kDa的异二聚体复合物。c-Met由胞外区、跨膜区和胞内区组成。其中c-Met胞外区由完整的α链和β链的胞外部分组成，其包含由N端的sema结构域，PSI结构域和4个IPT结构域；其中sema结构域与HGF/SF结合和c-Met二聚化激活有关。c-Met与HGF/SF结合后触发c-Met二聚化，使c-Met胞浆内酪氨酸残基发生自身磷酸化，进而引起Gabl蛋白、类固醇激素受体辅激活子(steroidreceptorcoactivator，SRC)、生长因子受体结合蛋白2(growtllf.actorreceptor-bollIldpmteill2，GRB2)及磷脂酶C等各种胞质内蛋白发生磷酸化。其中Gabl蛋白发生磷酸化的能够聚集更多的酶，如磷脂酰肌醇脂.3激酶(phosphatidylonositol3一l(inase，P13K)、Src癌基因家族同源区一2(SrcHomologyRegion一2，SHP2)等，这些酶共同激活位于下游的P13K—AKT和RAS—MAPK信号通路，继而二者通过转录因子NF-κB和ETS家族影响表达其他基因和调控细胞周期；类固醇激素受体辅激活子激酶具有PTK活性，主要对细胞的生长、运动、粘附和信号转导中起着关键的调控作用，为肿瘤细胞发生浸润和转移提供了有利的条件；编码的Src癌基因家族同源区-2的基因发生突变也和肿瘤的发生发展密切相关。在正常生理情况下，HGF/SF由间质细胞分泌，而c-Met表达于上皮细胞表面，两者是由不同的细胞层产生的，两者之间的结合对机体维持正常的生理功能起重要作用并受到机体严密的调控。在肿瘤发生、发展及转移的情况下，HGF/SF-c-Met异常分泌和(或)激活，表达c-Met受体的细胞暴露于HGF/SF的环境中，可以诱导包括细胞再生、迁移、侵袭、分支血管形成等多种反应。c-Met信号通路与肿瘤的发生、发展、肿瘤血管的生成以及转移密切相关，因此它可能是肿瘤治疗的一个潜在靶点。现有技术中也有一些公开的c-Met抗体，如DO-24、DN-30或5D5，它们虽能够结合c-Met，但并不能抑制C-MET二聚化，甚至其二价抗体作为激动剂诱导c-Met的二聚化，进而激活下游信号通路。还有一些CN103030695、CN105452297B、CIN107001471A抗体虽然能起到拮抗剂作用，但对c-Met的亲和力并不十分理想。
技术实现思路
基于上述发现，本专利技术的首要目的在于提供一种针对c-Met蛋白sema结构域的抗体，该抗体即能够以较高的亲和力结合c-Met，又能作为c-Met拮抗剂，发挥抗肿瘤作用。以解决现有c-Met抗体亲和力低或作为激动剂激活c-Met信号通路的缺点。本专利技术提供以下技术方案：一种人源化抗c-Met抗体，由重链和轻链组成，重链和轻链分别包括可变区和恒定区，其中重链可变区选自SEQIDNO:1，轻链可变区选自SEQIDNO:2。本专利技术所述c-Met抗体重轻链可变区各有3个互补决定区(CDR)。所述c-Met抗体的重链可变区3个CDR序列分别为SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5；轻链可变区3个CDR序列分别为SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8。本专利技术所述c-Met抗体的重链和轻链进一步包含恒定区，所述抗体轻链恒定区进一步包含人源κ、λ链序列。所述抗体重链恒定区进一步包含人源IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgD、IgA、IgE或IgM。在一些实施方案中，所述抗体特异性结合c-Met蛋白sema结构域，抑制c-Met下游信号通路激活，预防或改善癌症的发展或转移。在一些实施方案中，所述c-Met抗体能够拮抗c-Met活性，其中拮抗作用导致选自下列的至少一种活性：细胞增殖的抑制，细胞存活的抑制，转移的抑制和/或HGF结合的抑制。在一些实施方案中，可以将本专利技术c-Met抗体拮抗剂用于治疗癌症，特别是肺癌、肝癌、胃癌。本专利技术提供一种治疗癌症的方法，其特征在于：使用本专利技术所述的抗c-Met抗体，所述癌症优选为肺癌、肝癌、胃癌。本专利技术所述的c-Met抗体可应用于制备治疗和/或预防癌症的药物中，优选为治疗肺癌、肝癌、胃癌的药物。本文所用术语“抗体”指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即含有特异性结合抗原的抗原结合位点的分子，涵盖全长抗体(例如，IgG1或IgG4抗体)、其各种功能性片段(例如可仅包含抗原结合部分，如Fab、Fab′、F(ab′)2)。抗体的实例包括但不限于多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv或ScFv片段等。本文所用术语“单克隆抗体”通常是指一群基本同源的抗体的抗体，即包含该群的各个抗体除了可能的以微量存在的天然发生的突变之外是相同的。单克隆抗体是高度克隆抗体制备物相反，每个单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇修饰语"单克隆"不是被解释为需要通过任何特殊方法产生抗体。例如，所述单克隆抗体可以通过杂交瘤技术制备或者通过使用重组DNA方法在细菌、真核动物或植物细胞中产生单克隆抗体也可以得自噬菌体抗体文库。“Fab片段”由一条轻链和一条重链的CH1及可变区组成。Fab分子的重链不能与另一个重链分子形成二硫键。“Fab′片段”含有一条轻链和一条重链的VH结构域和CH1结构域以及CH1和CH2结构域之间的恒定区部分，由此可在两个Fab′片段的两条重链之间形成链间二硫键以形成F(ab′)2分子。“F(ab′)2片段”含有两条轻链和两条重链的VH结构域和CH1结构域以及CH1和CH2结构域之间的恒定区部分，由此在两条重链间形成链间二硫键。因此，F(ab′)2片段由通过两条重链间的二硫键保持在一起的两个Fab′片段组成。“Fv区”包含来自重链和轻链二者的可变区，但缺少恒定区。“单链Fv抗体”或“ScFv抗体”，是指包含抗体的VH和VL结构域的抗体片段，其中这些结构域存在于单个多肽链中。本文所用术语“超变区”或“CDR区”或“互补决定区”，是指负责抗原结合的抗体氨基酸残基。CDR区序列可以由Kabat、Chothia方法来定义或本领域熟知的任何CDR区序列确定方法而鉴定的可变区内的氨基酸残基。本专利技术所用的方法可利用或根据这些方法中的任一种所定义的CDR，包括但不限于Kabat定义、Chothia定义中的任一者来本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗c-Met抗体，其特征在于：所述抗体的重链可变区3个CDR序列分别为SEQ IDNO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5；轻链可变区3个CDR序列分别为SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗c-Met抗体，其特征在于：所述抗体的重链可变区3个CDR序列分别为SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5；轻链可变区3个CDR序列分别为SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8。


2.根据权利要求1所述的抗c-Met抗体，其特征在于：所述抗体的重链可变区序列如SEQIDNO:1所示，轻链可变区序列如SEQIDNO:2所示。

【专利技术属性】
技术研发人员：刘欢，戴伟利，
申请(专利权)人：北京广未生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11