抗α突触核蛋白抗体制造技术

本发明专利技术涉及结合α突触核蛋白的抗体及其片段，其能够结合作为单体和呈原纤维形式的α突触核蛋白和预防由α突触核蛋白原纤维诱导的α突触核蛋白聚集。本发明专利技术的抗体用于治疗α突触核蛋白病，包括帕金森氏病。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗α突触核蛋白抗体专利
本专利技术涉及抗α突触核蛋白抗体和使用所述抗α突触核蛋白抗体治疗突触核蛋白病的方法。具体地，本专利技术涉及抗人α突触核蛋白抗体及其在治疗帕金森氏病中的用途。专利技术背景α突触核蛋白是根本上呈不同形式存在的140个氨基酸长的可溶性小蛋白质。α突触核蛋白主要发现于突触前神经末梢并且尽管其准确功能尚未可知，但研究人员认为其在多个神经退化性过程中起中心作用。过去15年，已证实α突触核蛋白在所有形式的帕金森氏病的发病机制中起重要作用。α突触核蛋白基因的基因突变或基因倍增引起家族性早期发作帕金森氏病(PD)。有趣地，在基因座倍增家族中，病原作用明显依赖于基因剂量。基因二倍化引起相对早期发作形式的PD(约47岁)，其具有正常病程，而基因三倍化与极早发作年龄(约33岁)和极快速的病程相关。在帕金森氏病的所有形式中，α突触核蛋白是路易体的主要成分(疾病的关键病理标志)。路易体病变在病程期间扩大，并且提出α突触核蛋白充当阮病毒样蛋白，其异常折叠以形成有毒寡聚物和聚集体，其可从受影响的神经元扩散至不受影响的神经元(OlanowC.W等人.MovementDisorders,Vol28,No.1,2013)。当前存在的治疗无法终止疾病扩散并且仅辅助治疗与运动神经元依赖性活动的进行性损失相关的症状。在2014年，TranH.T.等人(TranH.T.等人,CellReports7,2054-2065,June26,2014)证实，向先前纹状体内注射α突触核蛋白预成型原纤维的小鼠腹膜内施用异常折叠的α突触核蛋白的单克隆抗体减少路易体病变、改善黑质多巴胺能神经元损失和改善运动损伤。因此，仍需要可在PD及其他突触核蛋白病中发挥治疗效果的被动免疫治疗。专利技术概述本专利技术通过提供根据以下实施方案的抗α突触核蛋白抗体解决以上确认的需求。实施方案1：一种与α突触核蛋白结合的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段包含：a.轻链可变区，其包含选自SEQIDNO:1的CDR-L1；根据SEQIDNO:2的CDR-L2和根据SEQIDNO:3的CDR-L3；和b.重链可变区，其包含根据SEQIDNO:4的CDR-H1；选自SEQIDNO:5的CDR-H2和选自SEQIDNO:6的CDR-H3。实施方案2：根据实施方案1的抗体或其抗原结合片段，其中参考SEQIDNO:3在位置6处的氨基酸残基甘氨酸(Gly；G)被丙氨酸(Ala；A)置换。实施方案3：根据实施方案1或2的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段结合参考SEQIDNO:8在位置113与129之间的α突触核蛋白的两个或更多个氨基酸残基，其中该抗体或其抗原结合片段至少结合氨基酸残基D119、N122和Y125。实施方案4：根据前述实施方案中任一项的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段防止由α突触核蛋白原纤维诱导的α突触核蛋白聚集。实施方案5：根据前述实施方案中任一项的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段能够结合作为单体和呈原纤维形式的α突触核蛋白。实施方案6：根据前述实施方案中任一项的抗体或其抗原结合片段，其对呈原纤维形式的α突触核蛋白的结合亲和力高于对呈单体形式的α突触核蛋白的结合亲和力，其中对单体α突触核蛋白的解离常数(KD)比对呈原纤维形式的α突触核蛋白高至少10倍。实施方案7：根据前述实施方案中任一项的抗体或其抗原结合片段，其对呈原纤维形式的α突触核蛋白的(KD)为60pM或更小。实施方案8：根据前述实施方案中任一项的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体是嵌合、人源化或人抗体。实施方案9：根据前述实施方案中任一项的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体是全长抗体。实施方案10：根据实施方案9的抗体或其抗原结合片段，其中该全长抗体选自IgG1、IgG4或IgG4P。实施方案11：根据前述实施方案中任一项的抗体或其抗原结合片段，其中该抗原结合片段选自Fab、Fab’、F(ab’)2、scFv、dAb或VHH。实施方案12：根据前述实施方案中任一项的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其片段包含：a.根据SEQIDNO:13的轻链可变区和选自SEQIDNO:25的重链可变区；或b.根据SEQIDNO:17的轻链可变区和选自SEQIDNO:25的重链可变区；或c.根据SEQIDNO:21的轻链可变区和选自SEQIDNO:25的重链可变区。实施方案13：根据实施方案1至11中任一项的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其片段包含：a.根据SEQIDNO:14的轻链和根据SEQIDNO:26的重链；或b.根据SEQIDNO:18的轻链和根据SEQIDNO:26的重链；或c.根据SEQIDNO:22的轻链和根据SEQIDNO:26的重链。实施方案14：一种经分离的多核苷酸，其编码根据实施方案1至13中任一项的抗体或其抗原结合片段。实施方案15：根据实施方案14的经分离的多核苷酸，其中该多核苷酸编码：a.轻链可变区，其中所述多核苷酸：i.与SEQIDNO:15、19或23至少90％相同；或ii.包含SEQIDNO:15或19或23；或iii.基本上由SEQIDNO:15、19或23组成；或b.重链可变区，其中所述多核苷酸：i.与SEQIDNO:27至少90％相同；或ii.包含SEQIDNO:27；或iii.基本上由SEQIDNO:27组成；或c.轻链，其中所述多核苷酸：i.与SEQIDNO:16、20或24至少90％相同；或ii.包含SEQIDNO:16、20或24；或iii.基本上由SEQIDNO:16、20或24组成；d.重链，其中所述多核苷酸：i.与SEQIDNO:28至少90％相同；或ii.包含SEQIDNO:28；或iii.基本上由SEQIDNO:28组成。实施方案16：一种克隆或表达载体，其包含一种或多种根据实施方案14或15中任一项的多核苷酸。实施方案17：一种宿主细胞，其包含：a.一种或多种根据实施方案14或15中任一项的多核苷酸或b.一种或多种根据实施方案16的表达载体。实施方案18：一种用于产生根据实施方案1至13中任一项的抗体或其抗原结合片段的方法，其包括在产生该抗体或其抗原结合片段的合适条件下培养根据实施方案17的宿主细胞和分离该抗体或其抗原结合片段。实施方案19：一种药物组合物，其包含根据实施方案1至13中任一项的抗体或其抗原结合片段和一种或多种药学上可接受的载剂、赋形剂或稀释剂，其中该药物组合物包含一种或多种另外的活性成分。实施方本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种与α突触核蛋白结合的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段包含：/na.轻链可变区，其包含选自SEQ ID NO:1的CDR-L1；根据SEQ ID NO:2的CDR-L2和根据SEQ ID NO:3的CDR-L3；和/nb.重链可变区，其包含根据SEQ ID NO:4的CDR-H1；选自SEQ ID NO:5的CDR-H2和选自SEQ ID NO:6的CDR-H3。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171215 GB 1720970.11.一种与α突触核蛋白结合的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段包含：
a.轻链可变区，其包含选自SEQIDNO:1的CDR-L1；根据SEQIDNO:2的CDR-L2和根据SEQIDNO:3的CDR-L3；和
b.重链可变区，其包含根据SEQIDNO:4的CDR-H1；选自SEQIDNO:5的CDR-H2和选自SEQIDNO:6的CDR-H3。


2.权利要求1的抗体或其抗原结合片段，其中参考SEQIDNO:3在位置6处的氨基酸残基甘氨酸(Gly；G)被丙氨酸(Ala；A)置换。


3.权利要求1或权利要求2的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合参考SEQIDNO:8在位置113与129之间的α突触核蛋白的两个或更多个氨基酸残基，其中所述抗体或其抗原结合片段至少结合参考SEQIDNO:8的氨基酸残基D119、N122和Y125。


4.前述权利要求中任一项的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段防止由α突触核蛋白原纤维诱导的α突触核蛋白聚集。


5.前述权利要求中任一项的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段能够结合作为单体和呈原纤维形式的α突触核蛋白。


6.前述权利要求中任一项的抗体或其抗原结合片段，其对呈原纤维形式的α突触核蛋白的结合亲和力高于对作为单体的α突触核蛋白的结合亲和力，其中对单体α突触核蛋白的解离常数(KD)比对呈原纤维形式的α突触核蛋白高至少10倍。


7.前述权利要求中任一项的抗体或其抗原结合片段，其对呈原纤维形式的α突触核蛋白的(KD)为60pM或更小。


8.前述权利要求中任一项的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是嵌合、人源化或人抗体。


9.前述权利要求中任一项的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是全长抗体。


10.权利要求9的抗体或其抗原结合片段，其中所述全长抗体选自IgG1、IgG4或IgG4P。


11.前述权利要求中任一项的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗原结合片段选自Fab、Fab’、F(ab’)2、scFv、dAb或VHH。


12.前述权利要求中任一项的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段包含：
a.根据SEQIDNO:13的轻链可变区和选自SEQIDNO:25的重链可变区；或
b.根据SEQIDNO:17的轻链可变区和选自SEQIDNO:25的重链可变区；或
c.根据SEQIDNO:21的轻链可变区和选自SEQIDNO:25的重链可变区。


13.权利要求1至11中任一项的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段包含：
a.根据SEQIDNO:14的轻链和根据SEQIDNO:26的重链；或
b.根据SEQIDNO:18的轻链和根据SEQIDNO:26的重链；或
c.根据SEQIDNO:22的轻链和根据SEQIDNO:26的重链。


14.一种经分离的多核苷酸，其编码权利要求1至13中任一项的抗体或其抗原结合片段。


15.权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：P·道内，K·L·泰森，M·克里挨克，L·德里希特尔维德，D·J·莱特伍德，D·J·麦克米兰，P·C·艾略特，T·S·贝克，
申请(专利权)人：UCB生物制药有限责任公司，
类型：发明
国别省市：比利时;BE