代谢调节剂在肿瘤微环境中的表达以改善肿瘤的治疗制造技术

表达一种或多种代谢调节蛋白诸如脂肪因子(例如瘦素或趋化素)、胰岛素和/或IGF‑1的重组溶瘤病毒(OV)，及其用于治疗癌症的方法，例如在免疫疗法抗癌治疗中。在一些示例中，此类重组OV和方法增加了T细胞向肿瘤或肿瘤微环境中的浸润。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】代谢调节剂在肿瘤微环境中的表达以改善肿瘤的治疗相关申请的交叉引用本申请要求于2018年1月26日提交的美国临时申请第62/622,547号的优先权，其全部内容通过引用并入此文。
本公开提供了表达一种或多种代谢调节蛋白例如瘦素的重组溶瘤病毒(OV)，包括该重组溶瘤病毒的试剂盒，及其用于治疗癌症的方法。
技术介绍
免疫疗法作为一种癌症治疗方法的成功已导致了癌症研究和临床实践的重大转变，主要集中于理解和调节肿瘤部位的免疫活性。但是，单试剂免疫疗法的现实是大多数患者将不会经历长期的持久获益。这种抗药性可能由于多种原因而发生，但一个原因是未能将T细胞募集到肿瘤以及其他更主要的免疫抑制机制，其限制了肿瘤微环境中的T细胞功能(Sharma等，Cell2017；168(4):707-23)。因此，需要可以克服这些耐药机制的新的治疗方式。瘦素是一种典型的脂肪因子(adipokine)，具有强大的代谢重编程功能，例如促进葡萄糖和脂肪氧化以及线粒体的生物发生。然而，迄今为止，瘦素在免疫方面的研究尚未在治疗中得以确认，更不用说在癌症治疗的背景下。
技术实现思路
本文提供了由溶瘤痘苗病毒诱导的侵袭性黑素瘤的浸润。显示溶瘤病毒促进强大的肿瘤浸润物的浸润，但部分由于代谢不足，最终无法有效促进完全应答。在本公开的一些实施方案中，证明了瘦素作为通过促进肿瘤浸润T细胞的代谢重编程来克服观察到的代谢不足的工具的实用性。使用其中瘦素在肿瘤微环境中局部升高的新型黑素瘤模型，观察到与代谢重编程有关的有效的T细胞活化和肿瘤控制。此外，所使用的痘苗病毒被工程化以遗传表达瘦素并将其递送至肿瘤微环境。与野生型病毒相比，该疗法产生完全的治疗应答。表达瘦素的痘苗病毒同时裂解肿瘤细胞，从而刺激新的T细胞浸润，同时还通过瘦素的局部分泌在代谢上支持了该浸润的活性。在一些实施方案中，本文提供了重组溶瘤病毒(oncolyticvirus,OV)，其可以包括可编码一种或多种蛋白的核酸分子，该蛋白能够诱导T细胞代谢重编程，例如导致肿瘤中T细胞的浸润增强，或者能够在肿瘤微环境中调节抗肿瘤免疫应答。例如，在一些情况下，OV可以包含一种或多种核酸分子，其可以编码一种或多种代谢调节蛋白(例如，激素诸如脂肪因子(例如瘦素、脂联素、阿珀林(apelin)、趋化素(chemerin)、白介素6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)、视黄醇结合蛋白4(RBP4)、肿瘤坏死因子-α(TNFα)、内脂素(visfatin)、网膜素(omentin)、vaspin、颗粒蛋白前体(progranulin)或CTRP-4)，胰岛素和/或胰岛素样生长因子1(IGF-1))。在一些示例中，核酸可以可操作地连接至启动子。OV的例子包括单纯疱疹病毒(HSV)(例如T-VEC)、痘苗病毒(例如西部保留地株(WestReservestrain))、腺病毒、痘病毒、呼肠孤病毒(reovirus)、脊髓灰质炎病毒(poliovirus)、柯萨奇病毒、麻疹病毒、水疱性口炎病毒(vesicularstomatitisvirus,VSV)、塞内卡山谷病毒(Senecavalleyvirus)、ECHO病毒、新城疫病毒、鸡贫血病毒或细小病毒(parovirus)。在一些示例中，重组OV表达与SEQIDNO:2、4、6或8具有至少80％、至少90％或至少95％序列同一性的重组蛋白。在一些示例中，重组OV包括编码与SEQIDNO:1、3、5或7具有至少80％、至少90％或至少95％的序列同一性的代谢调节蛋白的核酸分子。在一些示例中，由重组OV表达的一种或多种代谢调节蛋白是融合蛋白的部分，例如包括两个部分的融合蛋白，(1)代谢调节蛋白和(2)第二蛋白(例如细胞因子)(例如IL-2或IL-15)、趋化因子、干扰素、白介素、淋巴因子和/或肿瘤坏死因子)。在一个示例中，融合蛋白在其N端具有代谢调节蛋白，并且在其C端具有细胞因子。在一些示例中，融合蛋白的两个部分通过接头(例如GSG肽)连接。在一个具体的示例中，重组OV表达融合蛋白，其包括瘦素-接头-IL-2、瘦素-IL-2、瘦素-接头-IL-15或瘦素-IL-15。还提供了治疗受试者的肿瘤，增加T细胞向肿瘤或肿瘤微环境或两者的浸润的方法。在一些示例中，此类方法包括向受试者施用治疗有效量的一种或多种本文公开的重组OV，从而治疗肿瘤。在一些示例中，这样的方法包括向受试者施用治疗有效量的一种或多种代谢调节蛋白(例如瘦素、胰岛素、趋化素和/或胰岛素样生长因子1)或编码该蛋白的核酸分子，从而治疗肿瘤。在一些示例中，肿瘤是癌症，例如肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、胰腺癌、皮肤癌、结肠癌、头颈癌、肾癌、子宫颈癌或卵巢癌。在具体的示例中，癌症是黑色素瘤。在具体的示例中，癌症是乳腺癌。这样的方法可以进一步包括施用治疗有效量的一种或多种其他治疗，例如其他抗癌剂，例如化学疗法、放射疗法、生物剂、手术或其组合。在一个示例中，抗癌剂包括一种或多种免疫调节剂，例如PD-1的拮抗剂、PD-L1的拮抗剂、CTLA4拮抗剂和T细胞激动剂(例如4-1BB的激动剂、OX40的激动剂、糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子(TNF)受体(GITR)的激动剂)，或其组合。在一个示例中，抗癌剂包括T细胞激动剂，例如4-1BB的激动剂、OX40的激动剂或GITR的激动剂(例如对免疫检查点蛋白具有特异性的单克隆抗体(mAb)，例如上面所列蛋白之一，这些蛋白之一的配体或这些蛋白之一的适体)。还提供了试剂盒和组合物，其可以包括(1)本文提供的一种或多种重组OV，和(2)一种或多种免疫调节剂(例如免疫检查点抑制剂)，例如PD-1的拮抗剂、PD-L1拮抗剂、CTLA4拮抗剂和T细胞激动剂(例如4-1BB激动剂、OX40激动剂或GITR激动剂)。试剂盒的组分可以放在单独的容器中。在一些示例中，试剂盒包括(1)本文提供的一种或多种重组OV，和(2)T细胞激动剂(例如4-1BB的激动剂、OX40的激动剂、GITR的激动剂或其组合)。在一些示例中，所述组合物包含(1)本文提供的一种或多种重组OV，和(2)一种或多种T细胞激动剂(例如4-1BB的激动剂、OX40的激动剂或GITR的激动剂)。这样的组合物可以进一步包含药学上可接受的载体。在一些示例中，例如将组合物冻干。在一些示例中，例如组合物存在于诸如玻璃或塑料容器的容器中。根据下面的详细描述，本公开的前述和其他目的和特征将变得更加显而易见，下面的详细描述参照附图进行。附图说明图1A-1C.从Ptenf/fBrafLSL-V600ETyrCre.ERT2小鼠产生克隆24，以及从带有CL24lep或CL24潮霉素的小鼠中耗尽CD8+T细胞。(A)C57BL/6J小鼠来自注射CL24的小鼠。来自LN和TIL的CD8+T细胞的代表性流式细胞图和列表流式细胞术数据。(B)C57BL/6J小鼠来自注射CL24的小鼠。然后每隔一天用抗PD1治疗肿瘤并监测肿瘤生长。LN和TIL中CD8和CD4染色的代表性流式细胞图。(C)每隔本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.重组溶瘤病毒，包括：/n编码一种或多种代谢调节蛋白的核酸分子。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180126 US 62/622,5471.重组溶瘤病毒，包括：
编码一种或多种代谢调节蛋白的核酸分子。


2.根据权利要求1所述的重组溶瘤病毒，其中所述核酸可操作地连接至启动子。


3.根据权利要求1或2所述的重组溶瘤病毒，其中所述溶瘤病毒是单纯疱疹病毒(HSV)、痘苗病毒、腺病毒、痘病毒、呼肠孤病毒、脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒、麻疹病毒、水疱性口炎病毒(VSV)、塞内卡山谷病毒、ECHO病毒、新城疫病毒、鸡贫血病毒或细小病毒。


4.根据权利要求1至3中任一项所述的重组溶瘤病毒，其中所述溶瘤病毒是单纯疱疹病毒(HSV)、痘病毒或痘苗病毒。


5.根据权利要求4所述的重组溶瘤病毒，其中所述溶瘤病毒是HSV。


6.根据权利要求5所述的重组溶瘤病毒，其中所述HSV是talimogenelaherparepvec(T-VEC)。


7.根据权利要求4所述的重组溶瘤病毒，其中所述溶瘤病毒是痘病毒。


8.根据权利要求7所述的重组溶瘤病毒，其中所述痘病毒是痘苗病毒。


9.根据权利要求8所述的重组溶瘤病毒，其中所述痘苗病毒是西部保留地株痘苗病毒。


10.根据权利要求1至9中任一项所述的重组溶瘤病毒，其中所述一种或多种代谢调节蛋白包括脂肪因子、胰岛素、胰岛素样生长因子1或其任意组合。


11.根据权利要求10所述的重组溶瘤病毒，其中所述脂肪因子是瘦素、脂联素、阿珀林、趋化素、白介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)、视黄醇结合蛋白4(RBP4)、肿瘤坏死因子-α(TNFα)、内脂素、网膜素、vaspin、颗粒蛋白前体或CTRP-4。


12.根据权利要求11所述的重组溶瘤病毒，其中所述脂肪因子是瘦素。


13.根据权利要求8至12中任一项所述的重组溶瘤病毒，其中所述溶瘤病毒是痘苗病毒，并且所述一种或多种代谢调节蛋白包括瘦素。


14.根据权利要求1至13中任一项所述的重组溶瘤病毒，其中所述一种或多种代谢调节蛋白包括融合蛋白，其中所述融合蛋白包括第一蛋白和第二蛋白，其中所述第一蛋白包括一种或多种代谢调节蛋白中的一种。


15.根据权利要求14所述的重组溶瘤病毒，其中所述第二蛋白是细胞因子、趋化因子、干扰素、白介素、淋巴因子和/或肿瘤坏死因子。


16.根据权利要求14或15所述的重组溶瘤病毒，其中所述第二蛋白是细胞因子。


17.根据权利要求15或16所述的重组溶瘤病毒，其中所述细胞因子是IL-1、IL-2、IL-17、IL-18、TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、IL-4、IL-10、IL-13、IL-7、IL-9、IL-15、IL-21、TNFα、IFN-γ或其任意组合。


18.根据权利要求14至17中任一项所述的重组溶瘤病毒，其中所述第一蛋白是瘦素、胰岛素、趋化素或胰岛素样生长因子1，并且所述第二蛋白是白介素(IL)-2或IL-15。


19.根据权利要求14至18中任一项所述的重组溶瘤病毒，其中所述融合蛋白包括所述第一蛋白与所述第二蛋白之间的接头。


20.根据权利要求19所述的重组溶瘤病毒，其中所述溶瘤病毒是痘苗病毒，所述第一蛋白是N端瘦素，所述第二蛋白是C端IL-2或IL-15，并且其中所述第一蛋白和所述第二蛋白通过所述接...

【专利技术属性】
技术研发人员：G·M·德尔戈夫，D·里瓦德内拉，P·萨姆帕思，S·H·索恩，
申请(专利权)人：联邦高等教育系统匹兹堡大学，
类型：发明
国别省市：美国;US