一种慢病毒、重组间充质干细胞及其构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种慢病毒、重组间充质干细胞及其构建方法和应用，慢病毒载体，是过表达TGF‑β1的慢病毒载体，能够感染人间充质干细胞并建立的稳定表达细胞系，其感染效率高；重组间充质干细胞，重组间充质干细胞通过慢病毒感染间充质干细胞得到，为经过表达TGF‑β1的慢病毒载体所感染，感染后能够建立的稳定表达细胞系；重组间充质干细胞的应用，培养重组间充质干细胞并得到外泌体，本发明专利技术中得到的外泌体，具有DNA损伤、促进细胞增殖、损伤修复的作用，抑制细胞衰老，在皮肤疾病与再生修复领域具有广阔的用途。

【技术实现步骤摘要】
一种慢病毒、重组间充质干细胞及其构建方法和应用
本专利技术涉及一种慢病毒、重组间充质干细胞及其构建方法和应用，属于基因工程

技术介绍
基因治疗是一种新型的重组蛋白转运方法，具有明显的优势，包括稳定，有效和永久的基因表达，对受体相同的糖基化模式以及对受体无免疫原性。病毒载体对分裂期及非分裂期细胞均具有感染作用，能使目的基因进入靶细胞并能够稳定长期得表达，可向同一细胞引入多种基因，或对同一细胞进行对此转染，不易引起靶细胞的免疫反应，生物学安全性也较高。随着时间的流逝，细胞损伤的积累是引发衰老和癌症发作的关键机制之一。细胞衰老可能是由各种细胞类型中的DNA，脂质或蛋白质改变驱动的。成体组织增殖潜能的丧失是促进衰老的主要机制之一，其中包括免疫细胞增殖(如T细胞)的下降、胰腺细胞增殖的年龄依赖性下降以及肝细胞的年龄相关性凋亡。相反，在生理组织中，诸如TGF-β信号通路的细胞抑制和促凋亡作用对于预防高增殖性疾病的产生至关重要。TGF-β诱导的细胞周期抑制能力主要是通过细胞依赖性激酶抑制剂CDKN2B(编码p15/ink4b)、CDKN1A本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种慢病毒，其特征在于，所述慢病毒通过将慢病毒载体、包装质粒和表达质粒共转染细胞获得；所述慢病毒载体包括TGF-β1基因全长序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种慢病毒，其特征在于，所述慢病毒通过将慢病毒载体、包装质粒和表达质粒共转染细胞获得；所述慢病毒载体包括TGF-β1基因全长序列。


2.如权利要求1所述的慢病毒，其特征在于，所述慢病毒通过将慢病毒载体、包装质粒VSVG和表达质粒sPA共转染细胞293T获得；所述包括TGF-β1基因全长序列的慢病毒载体的序列如SEQIDNO.1所示。


3.如权利要求1所述的慢病毒，其特征在于，所述慢病毒载体、包装质粒VSVG和表达质粒sPA以质量之比3:1:2共转染细胞293T。


4.一种重组间充质干细胞，其特征在于，所述重组间充质干细胞通过如权利要求1所述的慢病毒感染间充质干细胞得到。


5.一种如权利要求4所述的重组间充质干细胞的构建方法，其特征在于，取未感染的间充质干细胞，消化后离心重悬，将细胞悬液接种于培养皿，待细胞贴壁率25-30％时，加入无血清DMEM/F12培养液、含有绿色荧光蛋白的慢病毒和感染增强液进行培养；吸出病毒液并使用完全培养基培养，细胞经消化、离心后重悬，...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢创丰，吴曙霞，李玉霞，
申请(专利权)人：艾一生命科技广东有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44