一种表达血清4型禽腺病毒纤突蛋白F1的重组杆状病毒的构建方法技术

本发明专利技术涉及一种表达血清4型禽腺病毒纤突蛋白F1的重组杆状病毒的构建方法，包括以下步骤：（1）构建FAdV‑4‑F1基因重组杆状病毒表达载体；（2）表达重组FAdV‑4蛋白的杆状病毒包装和传代；（3）将携带有FAdV‑4‑F1基因的杆状病毒基因组转染进sf9细胞，27℃培养箱中培养5‑7天，观察细胞病变情况；当细胞病变达到70%时收集细胞裂解液，离心去沉淀，作为种毒保存；进行病毒的传代，传至第3代时，作为种毒扩大培养。本发明专利技术所述的血清4型禽腺病毒纤突蛋白F1利用该杆状病毒载体表达，且表达水平高，含有His标签，可以方便后期的纯化步骤，可以制备成禽腺病毒4型亚单位疫苗，也可以作为建立FAdV‑4酶联免疫吸附试剂制备研发中的包被用抗原。

【技术实现步骤摘要】
一种表达血清4型禽腺病毒纤突蛋白F1的重组杆状病毒的构建方法
本专利技术涉及一种表达血清4型禽腺病毒纤突蛋白F1的重组杆状病毒的构建方法，属于生物

技术介绍
禽腺病毒(FowlAdenovirus，FAdV)属于腺病毒科禽腺病毒属，分为5个种(A-E)，12个血清型。其中FAdV-4可通过接触水平传播及垂直传播,对雏鸡的致病力最强，致死率高，发病的宿主包括白羽肉鸡、肉种鸡、蛋鸡、黄羽鸡。临床表现为包涵体肝炎(IBH)、心包积水肝炎综合征(HHS)。随着我国养鸡业的迅速发展，禽腺病毒的爆发给家禽业造成了严重的经济损失。而FAdV-4的F1蛋白含有多个抗原表位，是决定其衣壳蛋白抗原性的关键之一，宿主细胞和病毒的结合与F1蛋白密切相关。由于目前尚无快速特异检测FAdV-4的血清学方法及商品化FAV-4疫苗。为减少FAdV-4给我国禽行业带来的损失，进一步研究建立诊断方法和生产FAdV-4亚单位疫苗及快速诊断试剂，本专利技术通过构建含FAdV-4-F1蛋白的重组杆状病毒载体，并利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中表达了F1蛋白，为建立及生本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种表达血清4型禽腺病毒纤突蛋白F1的重组杆状病毒的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：/n（1）构建FAdV-4-F1基因重组杆状病毒表达载体；/n设计F1基因扩增引物、pFastBacHTA线性化载体扩增引物， F1基因扩增引物扩增血清4型禽腺病毒F1基因，pFastBacHTA线性化载体扩增引物pFastBacHTA线性化载体，并连接转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞，涂于加有Amp+的LB琼脂平板，过夜培养，利用菌落PCR鉴定阳性克隆，构建重组质粒pFastBacHTA-FAdV-4-F1；/n所述F1基因扩增引物为：/n上游引物：TTCAAAGGCCTACATGTCGGCCCTAA...

【技术特征摘要】
1.一种表达血清4型禽腺病毒纤突蛋白F1的重组杆状病毒的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）构建FAdV-4-F1基因重组杆状病毒表达载体；
设计F1基因扩增引物、pFastBacHTA线性化载体扩增引物，F1基因扩增引物扩增血清4型禽腺病毒F1基因，pFastBacHTA线性化载体扩增引物pFastBacHTA线性化载体，并连接转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞，涂于加有Amp+的LB琼脂平板，过夜培养，利用菌落PCR鉴定阳性克隆，构建重组质粒pFastBacHTA-FAdV-4-F1；
所述F1基因扩增引物为：
上游引物：TTCAAAGGCCTACATGTCGGCCCTAATCGC；
下游引物：CTCTAGATTCTTAGGGGCCCGGAGCAT;
所述pFastBacHTA线性化载体扩增引物：
上游引物：TAAGAA...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶建强，王伟康，秦爱建，张伟，隆玉兰，谢泉，张建军，李拓凡，万志敏，邵红霞，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32