一种特异性激活免疫共刺激通路的复制型溶瘤腺病毒及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及生物制药与肿瘤生物治疗领域，具体涉及一种复制型溶瘤腺病毒AD5 sCD137L及其应用。本发明专利技术公开了一种新型复制型溶瘤腺病毒AD5 sCD137L的设计和构建方法，成功获得了一株新型复制型溶瘤腺病毒AD5 sCD137L，该病毒可以在肿瘤细胞内选择性复制，并且能够高表达可溶性蛋白sCD137L，该蛋白能够分泌到细胞外肿瘤微环境局部，激活病毒所招募的浸润性淋巴细胞的共刺激信号受体CD137，发挥生物学功能。实验表明，本发明专利技术的新型复制型溶瘤腺病毒AD5 sCD137L具有很强的活化抗肿瘤免疫作用，具有显著的抗肿瘤活性和安全性，有非常高的开发抗肿瘤药物的前景和价值。

【技术实现步骤摘要】
一种特异性激活免疫共刺激通路的复制型溶瘤腺病毒及其制备方法和应用
本专利技术涉及生物制药和肿瘤生物治疗领域，具体涉及一种特异性激活免疫共刺激通路的复制型溶瘤腺病毒及其制备方法和应用。
技术介绍
癌症是对人类生命健康危害最大的疾病之一，我国每年新增癌症病例400多万，近300万人死于癌症。抗癌药物的研发一直是药学研究的热点，包括传统的化疗，本世纪初涌现的小分子靶向抗癌药物治疗，发展到目前颇具突破性肿瘤免疫治疗。抗肿瘤免疫治疗不断出现的令人振奋的临床研究结果，给肿瘤患者带来了希望。免疫系统具有识别并清除异己的能力，肿瘤在发生发展过程中不仅通过多种途径抑制免疫系统的先天性免疫反应，也通过限制自身“新抗原的展示”和启动免疫检查点等诸多方法来“麻痹”抗肿瘤的免疫效应细胞，从而逃避免疫识别和免疫清除。T细胞的活化除了TCR介导的第一信号，还需要一些特异性的共刺激分子辅助。如果缺少共刺激分子提供的信号，T细胞不能完全活化并执行抗肿瘤作用。效应T细胞膜表面的CD137是一个重要的免疫共刺激分子。利用抗体激活该通路，可以活化抗肿瘤免疫。然而，仅仅本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种激活免疫共刺激信号通路的复制型溶瘤腺病毒，其特征在于：所述的病毒在肿瘤细胞内复制，并且表达和分泌可溶性蛋白，所述的可溶性蛋白为结合CD137的CD137L。/n

【技术特征摘要】
1.一种激活免疫共刺激信号通路的复制型溶瘤腺病毒，其特征在于：所述的病毒在肿瘤细胞内复制，并且表达和分泌可溶性蛋白，所述的可溶性蛋白为结合CD137的CD137L。


2.如权利要求1所述的激活免疫共刺激信号通路的复制型溶瘤腺病毒，其特征在于：所述的可溶性蛋白为sCD137L，sCD137L的氨基酸序列和核苷酸序列分别如序列表SEQIDNO:1和SEQIDNO:4所示。


3.权利要求1或2所述的激活免疫共刺激信号通路的复制型溶瘤腺病毒，其特征在于：所述的复制型溶瘤腺病毒能够溶瘤。


4.权利要求1或2所述的激活免疫共刺激信号通路的复制型溶瘤腺病毒在制备活化抗肿瘤免疫药物中的应用。


5.权利要求1或2所述的激活免疫共刺激信号通路的复制型溶瘤腺病毒在制备刺激IFN-γ表达药物中的应用。


6.权利要求1或2所述的激活免疫共刺激信号通路的复制型溶瘤腺病毒在制备抗肿瘤药物中的应用。


7.如权利要求1或2所述的激活免疫共刺激信号通路的复制型溶瘤腺病毒在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于：所述的肿瘤为肝癌、腹水癌、黑色素瘤或者乳腺癌。


8.一种激活免疫共刺激信号通路的复制型溶瘤腺病毒AD5sCD137L的构建方法，其特征在于包括如下步骤：(1)AD5sCD137L质粒构建：将构建好的穿梭载体AD5-pShuttle-sCD137L用PmeI线性化后转入感受态pAdEasy-BJ5183中，使用含50ug/ml卡那霉素LB平板的进行筛选，挑取阳性克隆培养鉴定，鉴定正确的克隆质粒重新转化DH5a感受态进行二次筛选鉴定，鉴定正确后进行质粒大提获得AD5sCD137L质粒；
(2)AD5sCD137L病毒拯救：AD5sCD137L质粒使用PacI线性化，纯化后6孔板中1ug/well转染293T细胞，5％CO2、37℃培养，2天后将细胞消化后转入10cm平皿，2-3天换液，至80％细胞出现病变，使用10ml培养基将细胞吹下收集至15ml离心管，反复冻融2次，3000rpm/min离心15min，收...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏继武，张永辉，张海林，吴俊华，董杰，
申请(专利权)人：南京大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32