一种CK8基因表达检测试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种CK8基因表达检测试剂盒，其包括针对检测CK8基因mRNA的捕获探针以及信号放大系统；所述信号放大系统包括扩增探针H1和扩增探针H2；每条捕获探针从5’端到3’端的碱基组成依次为：P1序列、间隔臂序列、特异性P2序列，且特异性P2序列从3’端到5’端的第2～9个碱基处有2～8个碱基进行了锁核酸修饰；每条扩增探针H1从5’端到3’端的碱基组成依次为：P3序列、P4序列；每条扩增探针H2从5’端到3’端的碱基组成依次为：P1序列、P5序列。上述试剂盒通过对捕获探针和信号放大系统的优化，可有效提高检测的灵敏度、准确率和检测效率，缩短检测时间，更好地满足CK8基因表达检测的需要。

【技术实现步骤摘要】
一种CK8基因表达检测试剂盒
本专利技术属于分子生物学
，具体涉及一种CK8基因表达检测试剂盒。
技术介绍
细胞角蛋白8(CK8)是一种II型碱性中间丝蛋白，属于细胞骨架蛋白家族，其基因定位于人类染色体12q13.13，包含10个外显子。CK8常与CK18结合，在肝细胞、胰腺腺泡和胰岛细胞、近端肾小管上皮细胞等多种上皮细胞中表达，在维持细胞结构完整性和信号转导及细胞分化中发挥作用(KarantzaV.Oncogene,2011,30:127)。研究表明，CK8在肺癌、乳腺癌、结直肠癌、胃癌等多种肿瘤中异常表达，并与肿瘤的发生发展、侵袭、转移以及抗癌药物敏感性/耐药性有关(KarantzaV.Oncogene,2011,30:127)。在循环肿瘤细胞(CTCs)研究中，CK8常被作为上皮型标志物，用于CTCs的分离与鉴定。有研究联合过滤法和CK8抗体免疫染色法富集和计数乳腺癌患者血液中的CTCs，结果发现，远处转移患者CTCs检出率明显高于淋巴结阳性或淋巴结阴性患者，提示CK8阳性CTCs可能作为乳腺癌潜在的预后指标和疾病进展标志物本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种CK8基因表达检测试剂盒，其特征在于，包括针对检测CK8基因mRNA的捕获探针以及信号放大系统；所述信号放大系统包括末端修饰有荧光基团的扩增探针H1和末端修饰有荧光基团的扩增探针H2；其中，/n所述捕获探针用于连接CK8基因mRNA与扩增探针H1，每条捕获探针从5’端到3’端的碱基组成依次为：P1序列、间隔臂序列、能与CK8基因mRNA结合的特异性P2序列；所述P1序列为长度为24～26bp，不存在发夹结构，探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配，与特异性P2序列和CK8基因mRNA之间均不存在特异性结合的序列；所述特异性P2序列长度为18～24bp，且特异性P2序列从3’端到5’端...

【技术特征摘要】
1.一种CK8基因表达检测试剂盒，其特征在于，包括针对检测CK8基因mRNA的捕获探针以及信号放大系统；所述信号放大系统包括末端修饰有荧光基团的扩增探针H1和末端修饰有荧光基团的扩增探针H2；其中，
所述捕获探针用于连接CK8基因mRNA与扩增探针H1，每条捕获探针从5’端到3’端的碱基组成依次为：P1序列、间隔臂序列、能与CK8基因mRNA结合的特异性P2序列；所述P1序列为长度为24～26bp，不存在发夹结构，探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配，与特异性P2序列和CK8基因mRNA之间均不存在特异性结合的序列；所述特异性P2序列长度为18～24bp，且特异性P2序列从3’端到5’端的第2～9个碱基处有2～8个碱基进行了锁核酸修饰；
所述扩增探针H1为双荧光标记的发夹结构，用于连接捕获探针与扩增探针H2，每条扩增探针H1从5’端到3’端的碱基组成依次为：能与捕获探针P1序列互补配对的P3序列、P4序列；所述P3序列的3’端碱基与P4序列的3’端碱基互补配对形成发夹结构，P3序列的5’端和P4序列的3’端均修饰有相同的荧光基团；所述P4序列为长度为24～26bp，探针内部不形成二聚体、不存在发夹结构、不存在错配，与P1、P2和CK8基因mRNA之间均不存在特异性结合的序列；
所述扩增探针H2为双荧光标记的发夹结构，用于连接扩增探针H1，每条扩增探针H2从5’端到3’端的碱基组成依次为：能与扩增探针H1的P3序列互补配对的P1序列、能与扩增探针H1的P4序列互补配对的P5序列；所述P1序列与捕获探针的P1序列碱基组成相同；所述P1序列5’端碱基与P5序列的5’端碱基互补配对形成发夹结构，P1序列的5’端和P5序列的3’端均修饰有与扩增探针H1相同的荧光基团。


2.根据权利要求1所述的CK8基因表达检测试剂盒，其特征在于，所述每条捕获探针中特异性P2序列从3’端到5’端的第2～8个碱基处有2～4个碱基进行了锁核酸修饰。


3.根据权利要求2所述的CK8基因表达检测试剂盒，其特征在于，所述每条捕获探针中特异性P2序列从3’端到5’端的第2～5个碱基处有2～4个碱基进行了锁核酸修饰。


4.根据权利要求1所述的CK8基因表达检测试剂盒，其特征在于，针对CK8基因mRNA的捕获探针中，P1序列为SEQIDNO.1，特异性P2序列选自SEQIDNO.3～SEQIDNO.12中的5条或5条以上；
和/或，针对CK8基因mRNA的扩增探针H1中，P3序列为SEQIDNO.23，P4序列为SEQIDNO.25；
和/或，针对CK8基因mRNA的扩增探针H2中，P5序列为SEQIDNO.27。


5.根据权利要求1所述的CK8基因表达检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括针对内参基因的mRNA的捕获探针以及信号放大系统；所述信号放大系统包括末端修饰有荧光基团的扩增探针H1和末端修饰有荧光基团的扩增探针H2；其中，
所述捕获探针用于连接内参基因mRNA与扩增探针H1，每条捕获探针从5’端到3’端的碱基组成依次为：P1序列、间隔臂序列、能与内参基因mRNA结合的特异性P2序列；所述P1序列为长度为24～26bp，不存在发夹结构，探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配，与特异性P2序列和内参基因mRNA之间均不存在特异性结合的序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴诗扬，黄洁芬，许嘉森，刘志明，刘芳，
申请(专利权)人：益善生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44