CENPK基因在胃癌诊断与治疗中的应用制造技术

本发明专利技术提供特异性检测CENPK基因及其表达产物的试剂在制备判断是否患有胃癌、预判胃癌转移风险、判断胃癌是否转移、判断胃癌转移是否复发的产品中的应用。本发明专利技术的CENPK基因及其表达产物，可作为诊断胃癌的特异性标志基因。本发明专利技术的CENPK基因及其表达产物提供了新的胃癌治疗途径。

【技术实现步骤摘要】
CENPK基因在胃癌诊断与治疗中的应用
本专利技术属于肿瘤学
，涉及CENPK基因在胃癌诊断与治疗中的应用，具体涉及特异性检测CENPK基因及其表达产物的试剂在制备判断是否患有胃癌、预判胃癌转移风险、判断胃癌是否转移、判断胃癌转移是否复发的产品中的应用。
技术介绍
胃癌在世界范围内是最常见的恶性肿瘤之一，我国是胃癌的高发区，其发病率和死亡率居消化道肿瘤的首位。然而早期胃癌发现率低，临床中可用的胃癌早期诊断的标志物较少。另外，目前尚缺乏有效的针对胃癌的靶向药物。因此，进一步深入阐明胃癌的发生发展机理，有目的寻找新的胃癌诊治的标志物以及有效的靶向药物，对改善胃癌的诊疗现状有十分重要的意义。着丝粒蛋白K(CentromereproteinK,CENPK)是着丝粒蛋白家族的一个成员，与细胞的正常有丝分裂密切相关，并且参与细胞间期核质的形成。现有技术中并未公开CENPK基因与胃癌之间的关系。
技术实现思路
为了解决现有技术中存在的问题，本专利技术提供了人CENPK基因在胃癌诊断与治疗中的应用。人CENPK基因能够用于判断是否患有胃癌、预判胃癌转移风险、判断胃癌是否转移、判断胃癌转移是否复发；并通过抑制CENPK基因表达，能够开发出治疗胃癌的靶向药物。为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：本专利技术提供特异性检测CENPK基因及其表达产物的试剂在制备判断是否患有胃癌、预判胃癌转移风险、判断胃癌是否转移、判断胃癌转移是否复发的产品中的应用。作为优选，上述产品包括：用RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交、基因芯片或全基因组测序判断是否患有胃癌、预判胃癌转移风险、判断胃癌是否转移、判断胃癌转移是否复发的产品。作为优选，所述用RT-PCR判断是否患有胃癌、预判胃癌转移风险、判断胃癌是否转移、判断胃癌转移是否复发的产品至少包括一对特异扩增CENPK基因的引物；所述用实时定量PCR判断是否患有胃癌、预判胃癌转移风险、判断胃癌是否转移、判断胃癌转移是否复发的产品至少包括一对特异扩增CENPK基因的引物；所述用免疫检测判断是否患有胃癌、预判胃癌转移风险、判断胃癌是否转移、判断胃癌转移是否复发的产品包括：与CENPK蛋白特异性结合的抗体；所述用原位杂交判断是否患有胃癌、预判胃癌转移风险、判断胃癌是否转移、判断胃癌转移是否复发的产品包括：与CENPK基因的核酸序列杂交的特异性探针；所述用芯片判断是否患有胃癌、预判胃癌转移风险、判断胃癌是否转移、判断胃癌转移是否复发的产品包括：蛋白芯片和基因芯片；其中，蛋白芯片包括与CENPK蛋白特异性结合的抗体，基因芯片包括与CENPK基因或mRNA特异性结合的探针。本专利技术的CENPK核苷酸全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩增法，可根据已公开的有关核苷酸序列，尤其是开放阅读框序列来设计引物，并用市售的cDNA库或按本领域技术人员已知的常规方法所制备的cDNA库作为模板，扩增而得有关序列。当序列较长时，常常需要进行两次或多次PCR扩增，然后再将各次扩增出的片段按正确次序拼接在一起。一旦获得了有关的序列，就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。此外，还可用人工合成的方法来合成有关序列，尤其是片段长度较短时。通常，通过先合成多个小片段，然后再进行连接可获得序列很长的片段。应用PCR技术扩增DNA/RNA的方法被优选用于获得本专利技术的基因。用于PCR的引物可根据本文所公开的本专利技术的序列信息适当地选择，并可用常规方法合成。可用常规方法如通过凝胶电泳分离和纯化扩增的DNA/RNA片段。通过对血液进行全基因组测序，能够判定CENPK基因是否高表达。作为优选，所述CENPK蛋白包括融合蛋白和非融合蛋白。作为优选，所述的产品包括芯片、试剂盒。作为进一步优选，所述芯片包括基因芯片、蛋白质芯片；所述基因芯片包括固相载体以及固定在固相载体的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括用于检测CENPK基因转录水平的针对CENPK基因的特异性寡核苷酸探针；所述蛋白质芯片包括固相载体以及固定在固相载体的CENPK蛋白的特异性抗体。所述基因芯片可用于检测包括CENPK基因在内的多个基因(例如，与胃癌转移相关的多个基因)的表达水平。所述蛋白质芯片可用于检测包括CENPK蛋白在内的多个蛋白质(例如与胃癌转移相关的多个蛋白质)的表达水平。通过将多个与胃癌转移的标志物同时检测，可大大提高胃癌诊断的准确率。所述特异性抗体包括对CENPK蛋白具有特异性的多克隆抗体和单克隆抗体，尤其是单克隆抗体。这里，“特异性”是指抗体能结合于CENPK基因产物或片段。较佳地，指那些能与CENPK基因产物或片段结合但不识别和结合于其它非相关抗原分子的抗体。本专利技术的抗体可以通过本领域内技术人员已知的各种技术进行制备。本专利技术不仅包括完整的单克隆或多克隆抗体，而且还包括具有免疫活性的抗体片段，如Fab’或(Fab)2片段；抗体重链；抗体轻链；遗传工程改造的单链Fv分子；或嵌合抗体。抗CENPK蛋白的抗体可用于免疫组织化学技术中，检测活检标本中的CENPK蛋白。所述试剂盒包括基因检测试剂盒和蛋白免疫检测试剂盒；所述基因检测试剂盒包括用于特异性检测CENPK基因转录水平的试剂；所述蛋白免疫检测试剂盒包括CENPK蛋白的特异性抗体。作为优选，所述试剂包括针对CENPK基因的特异性引物和/或特异性探针。根据CENPK基因的核酸序列设计出用于检测CENPK基因表达水平的引物和探针。与CENPK基因的核酸序列杂交的探针可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、PNA或其它衍生物。所述探针的长度没有限制，只要完成特异性杂交、与目的核苷酸序列特异性结合，任何长度都可以。比如所述探针的长度可短至25、20、15、13或10个碱基长度。同样，所述探针的长度可长至60、80、100、150、300个碱基对或更长，甚至整个基因。由于不同的探针长度对杂交效率、信号特异性有不同的影响，所述探针的长度通常至少是14个碱基对，最长一般不超过30个碱基对，与目的核苷酸序列互补的长度以15-25个碱基对最佳。所述探针自身互补序列最好少于4个碱基对，以免影响杂交效率。在本专利技术中，CENPK基因表达产物包括CENPK蛋白以及CENPK蛋白的部分肽。所述CENPK蛋白的部分肽含有与胃癌转移相关的功能域。“CENPK蛋白”包括CENPK蛋白以及CENPK蛋白的任何功能等同物。所述功能等同物包括CENPK蛋白保守性变异蛋白质、或其活性片段，或其活性衍生物，等位变异体、天然突变体、诱导突变体、在高或低的严紧条件下能与CENPK的DNA杂交的DNA所编码的蛋白质。优选地，CENPK蛋白是具有下列氨基酸序列的蛋白质：(1)由序列表中SEQIDNO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.特异性检测CENPK基因及其表达产物的试剂在制备判断是否患有胃癌、预判胃癌转移风险、判断胃癌是否转移、判断胃癌转移是否复发的产品中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.特异性检测CENPK基因及其表达产物的试剂在制备判断是否患有胃癌、预判胃癌转移风险、判断胃癌是否转移、判断胃癌转移是否复发的产品中的应用。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述产品包括：用RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交、基因芯片或基因测序判断是否患有胃癌、预判胃癌转移风险、判断胃癌是否转移、判断胃癌转移是否复发的产品。


3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述用RT-PCR判断是否患有胃癌、预判胃癌转移风险、判断胃癌是否转移、判断胃癌转移是否复发的产品至少包括一对特异扩增CENPK基因的引物；
所述用实时定量PCR判断是否患有胃癌、预判胃癌转移风险、判断胃癌是否转移、判断胃癌转移是否复发的产品至少包括一对特异扩增CENPK基因的引物；
所述用免疫检测判断是否患有胃癌、预判胃癌转移风险、判断胃癌是否转移、判断胃癌转移是否复发的产品包括：与CENPK蛋白特异性结合的抗体；
所述用原位杂交判断是否患有胃癌、预判胃癌转移风险、判断胃癌是否转移、判断胃癌转移是否复发的产品包括：与CENPK基因的核酸序列杂交的特异性探针；
所述用芯片判断是否患有胃癌、预判胃癌转移风险、判断胃癌是否转移、判断胃癌转移是否复发的产品包括：蛋白芯片和基因芯片；其中，蛋白芯片包括与CENPK蛋白特异性结合的抗体，基因芯片包括与CENPK基因或mRNA特异性结合的探针。


4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述CENPK蛋白包括融合蛋白和非融合蛋白。


5.根据权利要求1-4任一项所述的应用，其特征在于：所述的产品包括芯片、试剂盒。


6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述芯片包括基因芯片、蛋白质芯片；所述基因芯片包括固相载体以及固定在固相载体的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括用于检测CENPK基因转录水平的针对CENPK...

【专利技术属性】
技术研发人员：王芳，田宏伟，
申请(专利权)人：兰州大学，
类型：发明
国别省市：甘肃;62