一种采用液相色谱-质谱联用检测卡马西平血液药物浓度的方法技术

本发明专利技术涉及一种采用液相色谱‑质谱联用检测卡马西平血液药物浓度的方法，具体步骤包括卡马西平储备液的配制、校准品溶液的制备、质控品溶液的制备、待测样品的前处理、液相色谱‑质谱实验参数的设置后将处理后的待测血清样本按进样2μL进行液相色谱串联质谱分析，最后计算血清样本中卡马西平浓度。本发明专利技术中的标准品溶液和质控品溶液的基质使用动物血清代替人血清，降低了检测成本，且本发明专利技术中检测血清中卡马西平浓度的方法，准确、快速、特异性强。

【技术实现步骤摘要】
一种采用液相色谱-质谱联用检测卡马西平血液药物浓度的方法
本专利技术涉及一种采用液相色谱-质谱联用检测卡马西平血液药物浓度的方法，属于分析化学

技术介绍
卡马西平(Carbamazepine)是一种高效的广谱抗癫痫药物，能够对多种癫痫如部分性发作、复杂部分性发作、简单部分性发作、继发性全身发作、全身性发作和强直-阵挛发作等症状具有疗效，同时对神经性疼痛、心律失常、预防及治疗躁狂抑郁症都有一定治疗作用。卡马西平的血药浓度与用药剂量、临床疗效和副作用有直接的关系。卡马西平推荐的血浆浓度5到10微克/毫升。过量服用可能造成剧烈眩晕、嗜睡、呼吸不规则、颤抖，心跳异常、昏迷，严重时有致命的皮肤反应，包括中毒性表皮坏死松解症和史蒂文斯-约翰逊综合征等都在卡马西平治疗中有所报告。所以临床用药时需要对个体随时进行监测给药。另外，卡马西平的代谢效率随个体的生理情况不同而不同。卡马西平血药浓度的检测结果可以作为个性化治疗方案的制定依据。治疗药物监测(therapeuticdrugmonitoring,简称TDM)是指在临床进行药物治疗过程中，观察药物疗效的同时，定时采集患者的血液(有时采集尿液、唾液等液体)，测定其中的药物浓度，探讨药物的体内过程，以便根据患者的具体情况，以药动学和药效学基础理论为指导，借助先进的分析技术手段，并利用药代动力学原理和公式，使给药方案个体化，从而达到满意的疗效及避免发生毒副反应，同时也可以为药物过量中毒的诊断和处理提供有价值的实验室依据，将临床用药从传统的经验模式提高到比较科学的水平。现有的血药浓度监测试剂盒中的校准品和质控品基质都为同源基质(即人血来源的全血、血清或血浆样本)。但人血的采集在世界范围内都是严格受控的，要经过严格的前期志愿者的招募、体检筛选；要符合伦理要求；要进行血液传染性病毒安全性检测。而且，《中华人民共和国献血法》第十一条规定，“无偿献血的血液必须用于临床，不得买卖。”以上原因造成无论TDM试剂盒生产或实验室自建方法TDM检测，获得国内人源基质都比较困难。而若从国外进口校准品、质控品成品，成本高、周期长，限制了TDM在国内的开展。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决现有马西平血液药物浓度检测过程中校准品和质控品的基质需要采用人源基质造成的检测受限的问题，提出了一种LC-MS法进行卡马西平TDM检测时使用动物血清替代人血清作为基质的检测方法。本专利技术采用如下的技术方案：一种采用液相色谱-质谱联用检测卡马西平血液药物浓度的方法，具体步骤包括如下：(1)卡马西平储备液的制备：取一定量的卡马西平，加甲醇溶解，制备得到卡马西平储备液；(2)内标工作液：取一定量的D10-卡马西平，加80％甲醇溶解，制备得到内标工作液；(3)取一定量的动物血清低温解冻，再平衡至室温备用；(4)校准品溶液的制备：取步骤(3)的动物血清加入一定量的卡马西平储备液，制备得到一定梯度浓度的多个卡马西平校准品溶液；(5)质控品溶液的制备：取步骤(3)的动物血清加入一定量的卡马西平储备液，制备得到一定梯度浓度的多个卡马西平质控品溶液；(6)待测样品的前处理：在室温条件下，分别准确吸取校准品溶液、质控品溶液、待测血清样本加入内标工作液，设置空白质控，经振荡混合后，离心取上清液，加入超纯水复溶，震荡混合后离心，封膜后为待测样品；(7)设置液相色谱-质谱条件：按照液相色谱条件和质谱条件进行液相色谱串联质谱参数的设置和优化；(8)待测样品的检测：经处理后的校准品溶液按照浓度由低到高顺序进行液相色谱串联质谱分析，将处理后的待测血清样本按进样量2μL进行液相色谱串联质谱分析；(9)质量控制：对处理后的质控品溶液进行测定，若质控品溶液测定结果在理论值±15％范围内，则测定结果有效；质控品测定结果不在范围内，则测定结果无效，需重新定标再进行测定；(10)根据校准品溶液浓度值、质控品溶液浓度值对其卡马西平峰面积与内标峰面积的比例，建立线性方程，最终计算得到血清样本中卡马西平的浓度。进一步的，所述动物血清为小牛血清、新生牛血清、马血清、山羊血清、猪血清、狗血清或兔血清中的一种。进一步的，所述校准品溶液的梯度浓度为每毫升分别含卡马西平0.5μg、1.0μg、3.0μg、10μg、15μg和20μg。进一步的，所述质控品溶液的梯度浓度为1.2μg、8.0μg和18μg。进一步的，所述空白质控包含2个复孔，在空白质控孔1内加入250μL80％的甲醇溶液；在空白质控孔2内加入250μL内标工作液。进一步的，所述步骤(6)中离心条件为：温度为4℃，离心速度为4000rpm，离心时间为5min。进一步的，所述步骤(7)中液相色谱条件为：色谱柱采用WatersACQUITYUPLCBEHC18，柱温为40℃。进一步的，所述步骤(7)中液相色谱的流动相A为0.5％乙酸水溶液，流动相B为乙腈，采用梯度洗脱的方式，流速为0.4mL/min。进一步的，所述步骤(7)中质谱条件为：采用喷雾离子源(ESI)，正离子模式，毛细管电压为2.5kV，雾化压力为7.0Bar。进一步的，所述步骤(7)中质谱条件为：去溶剂化温度为600℃，去溶剂化流速为1000L/Hr，锥孔流速为150L/Hr。我国法律规定严格禁止人血液买卖，进口人血清须在政府部门进行申购人备案、风险评估、特殊物品进口审批、情况说明等一系列流程。不易获得、成本高、周期长等问题限制了人血清作为基质的方法应用。动物血清不存在以上问题，经过分析性能评估证明以动物血清作为校准品和质控品的基质，方法的灵敏度、线性、准确度、精密度和抗干扰能力良好，解决了现有马西平血液药物浓度检测过程中校准品和质控品的基质需要采用人源基质造成的检测受限的问题。本专利技术的有益效果：本专利技术中的标准品溶液和质控品溶液的基质中使用动物血清代替人血清，极大的简化了实验用物料采购的法规程序复杂度，降低了检测成本，且本专利技术中检测血清中卡马西平浓度的方法，准确、快速、特异性强，具有较高的分离度和灵敏度，为临床上卡马西平的血药浓度监测提供了可靠的实验数据，更便于医生为患者及时提供准确的卡马西平给药方案。附图说明图1为小牛血清标曲检测结果-人血清标曲检测结果对比图。图2为新生牛血清标曲检测结果-人血清标曲检测结果对比图。图3为马血清标曲检测结果-人血清标曲检测结果对比图。图4为山羊血清标曲检测结果-人血清标曲检测结果对比图。图5为猪血清标曲检测结果-人血清标曲检测结果对比图。图6为狗血清标曲检测结果-人血清标曲检测结果对比图。图7为兔血清标曲检测结果-人血清标曲检测结果对比图。具体实施方式下面将结合具体实施例对本专利技术做进一步的说明。本专利技术实施例中所用的马血清、狗血清、山羊血清、猪血清、兔血清外购于广州蕊特生物科技有限公司本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种采用液相色谱-质谱联用检测卡马西平血液药物浓度的方法，其特征在于：具体步骤包括如下：/n(1)卡马西平储备液的制备：取一定量的卡马西平，加甲醇溶解，制备得到卡马西平储备液；/n(2)内标工作液：取一定量的D10-卡马西平，加80％甲醇溶解，制备得到内标工作液；/n(3)取一定量的动物血清低温解冻，再平衡至室温备用；/n(4)校准品溶液的制备：/n取步骤(3)的动物血清加入一定量的卡马西平储备液，制备得到一定梯度浓度的多个卡马西平校准品溶液；/n(5)质控品溶液的制备：/n取步骤(3)的动物血清加入一定量的卡马西平储备液，制备得到一定梯度浓度的多个卡马西平质控品溶液；/n(6)待测样品的前处理：/n在室温条件下，分别准确吸取校准品溶液、质控品溶液、待测血清样本加入内标工作液，设置空白质控，经振荡混合后，离心取上清液，加入超纯水复溶，震荡混合后离心，封膜后为待测样品；/n(7)设置液相色谱-质谱条件：/n按照液相色谱条件和质谱条件进行液相色谱串联质谱参数的设置和优化；/n(8)待测样品的检测：/n经处理后的校准品溶液按照浓度由低到高顺序进行液相色谱串联质谱分析，将处理后的待测血清样本按进样量2μL进行液相色谱串联质谱分析；/n(9)质量控制：对处理后的质控品溶液进行测定，若质控品溶液测定结果在理论值±15％范围内，则测定结果有效；质控品测定结果不在范围内，则测定结果无效，需重新定标再进行测定；/n(10)根据校准品溶液浓度值、质控品溶液浓度值对卡马西平峰面积与内标峰面积的比例，建立线性方程，最终计算得到血清样本中卡马西平的浓度。/n...

【技术特征摘要】
1.一种采用液相色谱-质谱联用检测卡马西平血液药物浓度的方法，其特征在于：具体步骤包括如下：
(1)卡马西平储备液的制备：取一定量的卡马西平，加甲醇溶解，制备得到卡马西平储备液；
(2)内标工作液：取一定量的D10-卡马西平，加80％甲醇溶解，制备得到内标工作液；
(3)取一定量的动物血清低温解冻，再平衡至室温备用；
(4)校准品溶液的制备：
取步骤(3)的动物血清加入一定量的卡马西平储备液，制备得到一定梯度浓度的多个卡马西平校准品溶液；
(5)质控品溶液的制备：
取步骤(3)的动物血清加入一定量的卡马西平储备液，制备得到一定梯度浓度的多个卡马西平质控品溶液；
(6)待测样品的前处理：
在室温条件下，分别准确吸取校准品溶液、质控品溶液、待测血清样本加入内标工作液，设置空白质控，经振荡混合后，离心取上清液，加入超纯水复溶，震荡混合后离心，封膜后为待测样品；
(7)设置液相色谱-质谱条件：
按照液相色谱条件和质谱条件进行液相色谱串联质谱参数的设置和优化；
(8)待测样品的检测：
经处理后的校准品溶液按照浓度由低到高顺序进行液相色谱串联质谱分析，将处理后的待测血清样本按进样量2μL进行液相色谱串联质谱分析；
(9)质量控制：对处理后的质控品溶液进行测定，若质控品溶液测定结果在理论值±15％范围内，则测定结果有效；质控品测定结果不在范围内，则测定结果无效，需重新定标再进行测定；
(10)根据校准品溶液浓度值、质控品溶液浓度值对卡马西平峰面积与内标峰面积的比例，建立线性方程，最终计算得到血清样本中卡马西平的浓度。


2.如权利要求1所述的采用液相色谱-质谱联用检测卡马西平血液药物浓度的方法，其特征在于：所述动物血清为小牛血清、新生牛血清、马血清、山羊血清、猪血清、狗血清或兔血清中的一种。


3.如权利要求1所述的采用液...

【专利技术属性】
技术研发人员：盛蔚，丁沛瑜，王金玉，
申请(专利权)人：苏州药明泽康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32