一种妇科再造丸HPLC指纹图谱及多指标定量的建立方法技术

本发明专利技术公开了一种妇科再造丸HPLC指纹图谱及多指标定量的建立方法。该方法建立全方的HPLC指纹图谱，在一张色谱图中标定了分离度良好的35个特征色谱峰，指认了15个成分，并建立了11个目标成分的多指标定量方法。本发明专利技术本发明专利技术可快速、准确地鉴定不同厂家、不同批号产品中主要成分的种类及数量，并对多指标成分进行定量分析，从而鉴别产品的真伪优劣，具有简单、高效、准确可靠、重复性好的优点，可用于企业妇科再造丸的质量控制及鉴别不同厂家产品的优劣的有益效果。

【技术实现步骤摘要】
一种妇科再造丸HPLC指纹图谱及多指标定量的建立方法
本专利技术涉及一种HPLC指纹图谱及多指标定量的建立方法,特别是一种妇科再造丸HPLC指纹图谱及多指标定量的建立方法。
技术介绍
妇科再造丸源自贵州四大名医之首王聘贤(1895～1964)先生的经验方，包含党参、白芍、香附(醋炙)、黄芪、熟地黄、茯苓、当归(酒炙)等42味中药，其有补益肝肾、养血调经、暖宫止痛的功效。用于月经先后不定期、带经日久、痛经、带下等妇科病症，临床应用已有80余年，疗效确切。妇科再造丸的制备工艺如下：首先黄芪、杜仲、熟地黄、续断、秦艽、肉苁蓉、牛膝、地骨皮8味中草药加水煎煮得滤液再浓缩，阿胶加水烊化后与制得的浓缩液合并浓缩成清膏，再将其余的33味中草药细粉与清膏混合泛丸制成药丸，干燥，包衣即得，现收载于国家药品监督管理局2002年颁布的《国家中成药标准汇编-外科妇科分册》。妇科再造丸是由42味药材组成的大复方，涵盖植物药、动物药与矿物药，成分复杂，关于妇科再造丸的质量评价，现有的标准及文献报道了显微鉴别、薄层色谱(TLC)鉴别、单一成分的含量测定等。国家中成药标准中采用TLC法进行香附、白芍、陈皮、黄芩药材的鉴别，丹参酮及丹参的专属性薄层鉴别，以及采用高液相色谱(HPLC)法测定芍药苷的含量。中药特别是中药复方制剂化学成分非常复杂，简单测定一种或几种化合物的含量，不能够体现出中药复方制剂的内部质量，目前指纹图谱和多指标定量已经成为评价中药及其复方制剂的有效方法，可以反映中药及其复方的整体质量，达到对中药质量稳定的有效控制的要求。目前，中国专利(申请号：201711083060.4)公开了一种妇科再造丸的检测方法，其采用HPLC建立产品中白芍苷、黄芩苷和丹酚酸B含量的测定方法，其采用不同的色谱条件对3个成分进行检测，存在单独检测3个成分，样品处理繁琐、检测周期长；检测指标少，不能较全面反映妇科再造丸的质量。中国专利(申请号：201610304060.1)公开了一种妇科再造丸UPLC指纹图谱的建立方法，其采用UPLC建立了妇科再造丸的指纹图谱，并确定了15个共有峰，但是，其未指认共有峰的成分，并进行指标成分的定量分析，存在检测设备贵、共有峰较少、未进行指标成分的定量分析，不能较全面的体现妇科再造丸产品的质量。徐剑等建立了妇科再造丸UPLC指纹图谱，标出有15个共有峰，并对指标成分橙皮苷和黄芩苷进行含量测定，但是，其同样没有确定其成分，多指标成分太少不能充分反馈妇科再造丸的质量，且超高效液相色谱仪(UPLC)价格昂贵，对色谱柱要求较高，在中国制药企业尚不普遍，还不是中药质量控制的主要方法。因此，建立妇科再造丸HPLC指纹图谱及多指标定量的方法，对共有峰及指认成分多并能进行多指标定量分析、才能全面体现妇科再造丸质量的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于，提供一种妇科再造丸HPLC指纹图谱及多指标定量的建立方法。本专利技术可快速、准确地鉴定不同厂家、不同批号产品中主要成分的种类及数量，并对多指标成分进行定量分析，从而鉴别产品的真伪优劣，具有简单、高效、准确可靠、重复性好的优点，可用于企业妇科再造丸的质量控制及鉴别不同厂家产品的优劣的特点。本专利技术的技术方案：一种妇科再造丸HPLC指纹图谱及多指标定量的建立方法，包括有以下步骤：(1)对照品溶液的配制线性关系：精密称取各对照品适量，分别置于5ml容量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，制成没食子酸1.10-1.40mg/mL、绿原酸0.30-0.55mg/mL、龙胆苦苷0.45-0.60mg/mL、橙皮苷0.45-0.65mg/mL、黄芩苷1.00-1.25mg/mL、丹酚酸B0.95-1.25mg/mL、汉黄芩苷0.25-0.50mg/mL、黄芩素0.65-0.85mg/mL、汉黄芩素0.40-0.65mg/mL、洋川芎内酯A2.50-4.50mg/mL和Z-藁本内酯1.85-2.10mg/mL的对照品溶液，即得；精密吸取各个对照品溶液适量至10ml容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，即得混合对照品溶液，吸取适量混合对照品溶液，分别置相应的容量瓶中，加入甲醇定容，分别稀释不同倍数，得到7个不同浓度水平的混合对照品溶液，用0.22μm微孔滤膜过滤；根据下述色谱条件测定峰面积，以各对照品的进样浓度X，μg/mL为横坐标，以相应的化合物峰面积Y为纵坐标，进行线性回归；(2)供试品溶液的制备：取妇科再造丸适量，研细，精密称取约3g，置50mL锥形瓶中，精密加入45-55％甲醇15-30mL，称重，加热回流方式提取30-90min，提取1次，放冷，再称重，用45-55％甲醇补足减少的量，并混合均匀，0.22μm微孔滤膜过滤，即得；(3)色谱条件：色谱柱：COSMOSILC18(3.0mm×150mm，2.6μm)；流动相：乙腈(A)-0.4％乙酸(36％)水溶液(B)梯度洗脱，流速为0.3-0.5mL/min；柱温为25℃；检测波长为280nm；进样量为4μL；(4)指纹图谱的建立：按上述提供的方法制备供试品溶液和对照品溶液，在上述色谱条件下进样，记录色谱图得到妇科再造丸的HPLC指纹图谱和混合对照品溶液的HPLC图；(5)指纹图谱的确认：按供试品溶液制备方法制备多批妇科再造丸供试品溶液，按上述色谱条件进行测定；通过分析比较确定了35个共有峰，这些共有峰构成妇科再造丸的指纹图谱，并在指纹图谱中指认15个成分；(6)多指标成分定量：按照上述供试品溶液的制备方法制备取妇科再造丸成品12批，按上述色谱条件检测，每个样品平行测得两次，记录的峰面积，根据标准曲线计算其含量，分别计算12批样品中的11个化合物平均含量，比较各成分在样品中的含量百分比。前述的妇科再造丸HPLC指纹图谱及多指标定量的建立方法中，所述步骤(1)中，对照品溶液是这样配制：精密称取各对照品适量，分别置于5ml容量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，制成没食子酸1.270mg/mL、绿原酸0.410mg/mL、龙胆苦苷0.502mg/mL、橙皮苷0.5600mg/mL、黄芩苷1.1133mg/mL、丹酚酸B1.055mg/mL、汉黄芩苷0.383mg/mL、黄芩素0.770mg/mL、汉黄芩素0.5133mg/mL、洋川芎内酯A3.573mg/mL、Z-藁本内酯1.998mg/mL的对照品溶液，即得。前述的妇科再造丸HPLC指纹图谱及多指标定量的建立方法中，所述步骤(2)中，供试品溶液是这样配制：取妇科再造丸适量，研细，精密称取约3g，置50mL锥形瓶中，精密加入20mL50％甲醇，称重，加热回流方式提取60min，提取1次，放冷，再称重，用50％甲醇补足减少的量，并混合均匀，进样前用0.22μm微孔滤膜过滤后，取续滤液供HPLC检测分析。前述的妇科再造丸HPLC指纹图谱及多指标定量的建立方法中，所述步骤(3)中，梯度洗脱条件为：0-12.5min，A相2％-16％，12.5-19min，A相16％，24-30min，A相2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种妇科再造丸HPLC指纹图谱及多指标定量的建立方法，其特征在于：包括有以下步骤：/n(1)对照品溶液的配制线性关系：/n精密称取各对照品适量，分别置于5ml容量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，制成没食子酸1.10-1.40mg/mL、绿原酸0.30-0.55mg/mL、龙胆苦苷0.45-0.60mg/mL、橙皮苷0.45-0.65mg/mL、黄芩苷1.00-1.25mg/mL、丹酚酸B0.95-1.25mg/mL、汉黄芩苷0.25-0.50mg/mL、黄芩素0.65-0.85mg/mL、汉黄芩素0.40-0.65mg/mL、洋川芎内酯A2.50-4.50mg/mL和Z-藁本内酯1.85-2.10mg/mL的对照品溶液，即得；/n精密吸取各个对照品溶液适量至10ml容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，即得混合对照品溶液，吸取适量混合对照品溶液，分别置相应的容量瓶中，加入甲醇定容，分别稀释不同倍数，得到7个不同浓度水平的混合对照品溶液，用0.22μm微孔滤膜过滤；根据下述色谱条件测定峰面积，以各对照品的进样浓度X，μg/mL为横坐标，以相应的化合物峰面积Y为纵坐标，进行线性回归；/n(2)供试品溶液的制备：/n取妇科再造丸适量，研细，精密称取约3g，置50mL锥形瓶中，精密加入45-55％甲醇15-30mL，称重，加热回流方式提取30-90min，提取1次，放冷，再称重，用45-55％甲醇补足减少的量，并混合均匀，0.22μm微孔滤膜过滤，即得；/n(3)色谱条件：/n色谱柱：COSMOSIL C...

【技术特征摘要】
1.一种妇科再造丸HPLC指纹图谱及多指标定量的建立方法，其特征在于：包括有以下步骤：
(1)对照品溶液的配制线性关系：
精密称取各对照品适量，分别置于5ml容量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，制成没食子酸1.10-1.40mg/mL、绿原酸0.30-0.55mg/mL、龙胆苦苷0.45-0.60mg/mL、橙皮苷0.45-0.65mg/mL、黄芩苷1.00-1.25mg/mL、丹酚酸B0.95-1.25mg/mL、汉黄芩苷0.25-0.50mg/mL、黄芩素0.65-0.85mg/mL、汉黄芩素0.40-0.65mg/mL、洋川芎内酯A2.50-4.50mg/mL和Z-藁本内酯1.85-2.10mg/mL的对照品溶液，即得；
精密吸取各个对照品溶液适量至10ml容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，即得混合对照品溶液，吸取适量混合对照品溶液，分别置相应的容量瓶中，加入甲醇定容，分别稀释不同倍数，得到7个不同浓度水平的混合对照品溶液，用0.22μm微孔滤膜过滤；根据下述色谱条件测定峰面积，以各对照品的进样浓度X，μg/mL为横坐标，以相应的化合物峰面积Y为纵坐标，进行线性回归；
(2)供试品溶液的制备：
取妇科再造丸适量，研细，精密称取约3g，置50mL锥形瓶中，精密加入45-55％甲醇15-30mL，称重，加热回流方式提取30-90min，提取1次，放冷，再称重，用45-55％甲醇补足减少的量，并混合均匀，0.22μm微孔滤膜过滤，即得；
(3)色谱条件：
色谱柱：COSMOSILC183.0mm×150mm，2.6μm；流动相：乙腈(A)-0.4％乙酸(36％)水溶液(B)梯度洗脱，流速为0.3-0.5mL/min；柱温为25℃；检测波长为280nm；进样量为4μL；
(4)指纹图谱的建立：
按上述提供的方法制备供试品溶液和对照品溶液，在上述色谱条件下进样，记录色谱图得到妇科再造丸的HPLC指纹图谱和混合对照品溶液的HPLC图；
(5)指纹图谱的确认：
按供试品溶液制备方法制备多批妇科再造丸供试品溶液，按上述色谱条件进行测定；通过分析比较确定了35个共有峰，这些共有峰构成妇科再造丸的指纹图谱，并在指纹图谱中指认15个成分；
(6)多指标成分定量：
按照上述供试品溶液的制备方法制备取妇科再造丸成品12批，按上述色谱条件检测，每个样品平行测得两次，记录的峰面积，根据标准曲线计算其含量，分别计算12批样品中的11个化合物平均含量，比较各成分在样品中的含量百分比。

【专利技术属性】
技术研发人员：张仕林，周雪，葛发欢，王雪莉，王迅，尚秘，吴劲勇，葛秋平，
申请(专利权)人：贵阳德昌祥药业有限公司，
类型：发明
国别省市：贵州;52