WNT/SFRP复合物，含WNT的组合物，表达WNT的细胞及其制备、纯化和使用方法技术

本公开内容描述了包括Wnt和sFRP的分离的蛋白质复合物；包括Wnt的组合物；过表达Wnt和sFRP的细胞；包括过表达Wnt的细胞和过表达sFRP的细胞的组合物；制备蛋白质复合物、组合物和细胞的方法；以及使用分离的蛋白质复合物、组合物和细胞的方法。本公开内容进一步描述了形成包括Wnt和sFRP的复合物的方法，以及用于分离Wnt的方法。本文还描述的是可以用于纯化Wnt而无需使用去污剂的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】WNT/SFRP复合物，含WNT的组合物，表达WNT的细胞及其制备、纯化和使用方法继续申请数据本申请要求于2017年10月9日提交的美国临时申请序列号62/569,748的权益，所述美国临时申请引入本文作为参考。序列表本申请含有作为名称为“541-00060201_ST25.txt”的ASCII文本文件、经由EFS-Web电子提交给美国专利及商标局（UnitedStatesPatentandTrademarkOffice）的序列表，所述ASCII文本文件具有84千字节的大小且于2018年10月9日创建。由于序列表的电子提交，电子提交的序列表充当由37CFR§1.821（c）要求的纸质副本、以及由§1.821（e）要求的CRF两者。序列表中包含的信息引入本文作为参考。专利技术概述本公开内容描述了分离的蛋白质复合物，其包括无翅/整合-1蛋白（Wingless/Integrated-1protein）（Wnt）和分泌型卷曲相关蛋白（secretedFrizzled-relatedprotein）（sFRP）；包括Wnt的组合物，其中所述组合物基本上不含去污剂；过表达Wnt和sFRP的细胞；包括过表达Wnt的细胞和过表达sFRP的细胞的组合物；制备蛋白质复合物、组合物和细胞的方法；以及使用蛋白质复合物、组合物和细胞的方法。在一些实施方案中，Wnt优选地包括活性Wnt。在一些实施方案中，该组合物可以用作培养基添加剂，并且可以提供相对于包括去污剂的组合物的优点。在一个方面，本公开内容描述了包括Wnt和sFRP的分离的蛋白质复合物。在另一个方面，本公开内容描述了包括Wnt的组合物，其中所述组合物基本上不含去污剂。在一个进一步方面，本公开内容描述了过表达Wnt和sFRP的细胞。在一个另外的方面，本公开内容描述了包括过表达Wnt的细胞和过表达sFRP的细胞的组合物。在另外一个方面，本公开内容描述了包括形成包括Wnt和sFRP的复合物，并且分离Wnt的方法。词语“优选的”和“优选地”指在某些情况下，可以提供某些益处的本专利技术的实施方案。然而，在相同或其它情况下，其它实施方案也可以是优选的。此外，一个或多个优选实施方案的叙述并非暗示其它实施方案是无用的，并且不预期从本专利技术的范围中排除其它实施方案。术语“包含”及其变化在说明书和权利要求中出现这些术语时不具有限制意义。“由……组成”意欲包括且限于在短语“由……组成”之后的任何内容。因此，短语“由……组成”指示所列出的要素是必需的或强制性的，并且可以不存在其它要素。“基本上由……组成”意欲包括在短语之后列出的任何要素，并且限于不干扰或促成本公开内容中对于所列出的要素指定的活性或动作的其它要素。因此，短语“基本上由……组成”指示所列出的要素是必需的或强制性的，但其它要素是任选的并且可以存在或不存在，取决于它们是否实质上影响所列出的要素的活性或作用。除非另有说明，否则“一个”、“一种”、“该/所述”和“至少一个/种”是可互换使用的，并且意指一个/种或多于一个/种。另外在本文中，通过端点的数目范围的叙述包括在该范围内所包含的所有数目（例如1至5包括1、1.5、2、2.75、3、3.80、4、5等）。对于本文公开的包括不连续步骤的任何方法，该步骤可以以任何可行的次序进行。并且，适当时，可以同时进行两个或更多个步骤的任何组合。本专利技术的上文概述并不预期描述本专利技术的每个公开的实施方案或每一个实施方式。下述描述更特别地例证了示例性实施方案。在申请自始至终的几个地方，通过实例的列表提供了指导，所述实例可以以各种组合使用。在每种情况下，所叙述的列表仅充当代表组，并且不应该被解释为排他性列表。本说明书自始至终对“一个实施方案（oneembodiment）”、“一个实施方案（anembodiment）”、“某些实施方案”或“一些实施方案”等的提及，意指与实施方案结合描述的特定特点、配置、组合物或特征包括在本公开内容的至少一个实施方案中。因此，此类短语在本说明书自始至终的各个地方的出现不一定指本公开内容的相同实施方案。此外，在一个或多个实施方案中，可以以任何合适的方式组合特定特点、配置、组合物或特征。除非另有说明，否则在说明书和权利要求使用的表示组分数量、分子量等等的所有数目都应理解为在所有情况下通过术语“约”进行修饰。相应地，除非另有相反说明，否则说明书和权利要求中阐述的数目参数是近似值，其可以根据通过本专利技术寻求获得的所需特性而变。至少，并且并非试图将等同原则限制于权利要求的范围，每个数目参数应该至少按照所报告的有效数字的数目，并通过应用普通的舍入技术加以解释。尽管阐述本专利技术的广泛范围的数值范围和参数是近似值，但在具体实例中阐述的数值被尽可能精确地报告。然而，所有数值固有地含有必然起因于其各自的测试测量中发现的标准差的范围。所有标题都是为了读者的方便，并且除非另有说明，否则不应该用于限制标题之后的文字的含义。附图简述图1（A-B）显示了小鼠sFRP1（msFRP1）和小鼠Wnt1（mWnt1）在CHO细胞中的共表达，导致上清液（在本文中也称为条件培养基）中的较高水平的活性mWnt1蛋白。图1A.等量的条件培养基（CM）的蛋白质印迹显示，与CHO对照细胞CM（泳道1）、CHOmWnt1CM（泳道3）和CHOmsFRP1（泳道4）中的mWnt1水平相比，表达mWnt1/msFRP1-His（泳道2）和mWnt1/msFRP1（泳道5）的CHO细胞中的增强水平的mWnt1。msFRP1蛋白质印迹显示与CHOCM（泳道1）和CHOmWnt1CM（泳道3）相比，CHOmWnt1/msFRP1-HisCM（泳道2）、CHOmsFRP1CM（泳道4）和CHOmWnt1/msFRP1CM（泳道5）中增强的msFRP1表达。图1B.将来自CHO细胞（蓝色圆圈）、CHOmWnt1（红色正方形）、CHOmWnt1/msFRP1（绿色三角形）、CHOmWnt1/msFRP1-His（橙色菱形）和CHOmsFRP1（红色圆圈）的条件培养基加入HEK293TCF9-SEAPhFz4/hLRP5WntReporter细胞中，从最高浓度的培养基开始，并且1：2稀释。仅当CHO细胞一起表达mWnt1和msFRP1或msFRP1-His时，才在条件培养基中检测到Wnt1活性。在该HEK293TCF9-SEAPhFz4/hLRP5WntReporter测定中，来自CHO-smWnt1/msFRP1细胞（绿色三角形）的条件培养基导致22倍的诱导，而CHOmWnt1/msFRP-His（橙色菱形）导致高于背景17倍的诱导。来自其它CHO系的条件培养基在HEK293TCF9-SEAPhFz4/hLRP5WntReporter细胞系中未诱导活性。图2A显示了在表达mWnt1和msFRP1-His两者的CHO条件培养基中，msFRP1-His与mWnt1结合。通过将抗Wnt1抗体（泳道2、泳道4），抗His抗体（泳道3、泳道5）、或无本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离的蛋白质复合物，其包含Wnt和sFRP。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171009 US 62/5697481.一种分离的蛋白质复合物，其包含Wnt和sFRP。


2.权利要求1的分离的蛋白质复合物，其中所述Wnt包含Wnt1、Wnt2、Wnt2b、Wnt3、Wnt3a、Wnt4、Wnt5a、Wnt5b、Wnt6、Wnt7a、Wnt7b、Wnt8a、Wnt8b、Wnt9a、Wnt9b、Wnt10a、Wnt10b、Wnt11和Wnt16中的一种或多种。


3.权利要求1或权利要求2的分离的蛋白质复合物，其中所述sFRP包含sFRP1、sFRP2、sFRP3、sFRP4和sFRP5中的一种或多种。


4.前述权利要求中任一项的分离的蛋白质复合物，其中所述Wnt包含活性Wnt。


5.权利要求4的分离的蛋白质复合物，其中如使用分泌型碱性磷酸酶（SEAP）报道分子测定测量的，所述活性Wnt包含具有Wnt报道分子活性的Wnt。


6.前述权利要求中任一项的分离的蛋白质复合物，其中所述蛋白质复合物基本上不含去污剂。


7.前述权利要求中任一项的分离的蛋白质复合物，其中所述Wnt包含小鼠Wnt，并且所述sFRP包含小鼠sFRP。


8.前述权利要求中任一项的分离的蛋白质复合物，其中所述Wnt包含小鼠Wnt1，并且所述sFRP包含小鼠sFRP1。


9.前述权利要求中任一项的分离的蛋白质复合物，其中如使用HEK293TCF9-SEAPhFz4/hLRP5WntReporter测定测量的，所述蛋白质复合物显示出小于500ng/mL的50%有效剂量（ED50）。


10.前述权利要求中任一项的分离的蛋白质复合物，其中如使用HEK293TCF9-SEAPhFz4/hLRP5WntReporter测定测量的，所述蛋白质复合物显示出小于100ng/mL的50%有效剂量（ED50）。


11.一种包含Wnt的组合物，其中所述组合物基本上不含去污剂。


12.权利要求11的组合物，其中所述Wnt包含Wnt1、Wnt2、Wnt2b、Wnt3、Wnt3a、Wnt4、Wnt5a、Wnt5b、Wnt6、Wnt7a、Wnt7b、Wnt8a、Wnt8b、Wnt9a、Wnt9b、Wnt10a、Wnt10b、Wnt11和Wnt16中的一种或多种。


13....

【专利技术属性】
技术研发人员：A珀森，熊丽文，毕明，C特蕾西，
申请(专利权)人：博奥泰克尼公司，
类型：发明
国别省市：美国;US