一种血管紧张素转化酶测定试剂盒及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种血管紧张素转化酶测定试剂盒，试剂盒含有试剂R1和试剂R2，试剂R1包含以下组分：N‑三(羟甲基)甲基‑3‑氨基丙磺酸、氯化钠、离子激活剂、聚甘油脂肪酸酯、4‑羟基2,2,6,6‑四甲基‑1‑氧‑哌啶(AAQ‑2)、防腐剂；试剂R2包含以下组分：N‑三(羟甲基)甲基‑3‑氨基丙磺酸、FAPGG、稳定剂、防腐剂。本发明专利技术同时提供了该试剂盒的制备方法和应用，该试剂盒是一种抗干扰能力强、稳定性强、重复性好的液体试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
一种血管紧张素转化酶测定试剂盒及其制备方法和应用
本专利技术涉及生化试剂测定
，特别涉及一种血管紧张素转化酶测定试剂盒及其制备方法和应用。
技术介绍
血管紧张素转化酶(angiotensinconvertingenzyme,ACE，EC3.4.15.1)是一种哺乳动物组织中普遍存在的Zn2+依赖型羧二肽酶，为膜整合的单链糖蛋白，主要存在于肺血管内皮细胞，也可见于子宫、胎盘、心脏、肾、大脑、肾上腺皮质等大多数组织中。通过肾素-血管紧张素系统RAS(rennin-angiotensinsystem)和激肽释放酶-激肽系统,ACE对血压、电解质和体液平衡、心血管系统发育和结构重塑起重要调节作用。在Zn2+存在的条件下，ACE能水解十肽血管紧张素I(angiotensinI,AngI)中Phe8-His9之间的肽键，产生八肽血管紧张素II(AngII)和羧基端的二肽His-Leu。血管紧张素II是目前研究发现最强的收缩血管物质之一，作用于血管紧张素受体1，收缩血管平滑肌，刺激醛固酮分泌，促进人体肾脏对Na+、K+重吸收，引起钠贮量和血容量的增加，从而导致血压升高，对于心脏具有正性肌力作用和变时作用；同时，ACE还水解血管舒张剂-缓激肽羧基末端两个氨基酸，钝化其扩张血管的生物活性，被称为激肽水解酶2。除了底物血管紧张素I和缓激肽外,ACE还可以水解多种血管活性肽，如脑啡呔、P物质、神经降压素等，体外实验证明其能水解Alzheimer症中过量表达的β淀粉样蛋白。血清中ACE含量的水平，取决于组织细胞对ACE的合成与释放能力。如果细胞这种功能失调，则影响组织与血液之间ACE含量的动态平衡，引起血清中的ACE含量改变，在临床上对肺部疾病、肝脏疾病、糖尿病、冠心病、心肌梗死等疾病具有诊断意义，血清ACE可作为临床相关诊断的指标。早期关于ACE测定多采用荧光光度法、生物学放射层析法、分光光度法，随着对ACE研究的深入，相继建立了高效液相色谱法、放射免疫法、酶偶联法及ACE基因测定法等。酶偶联法:血清中的ACE作用于底物马尿酸双苷肽，生成马尿酸和双苷肽，再由γ-谷氨酰基转移酶作指示酶催化酶偶联反应，在410nm处测定其吸光度，ACE活性与生成物量呈正比。偶联反应如下：放免法：此法使用蛋白酶抑制剂Lisinopril、Aprotinin及EDTA结合的放射免疫分析法，但需要特殊仪器，应用不广泛。分光光度法：利用马尿酸-组氨酸-亮氨酸作为ACE的反应底物，被分解成马尿酸和组氨酸-亮氨酸，马尿酸和氰尿酰氯结合呈淡黄色，通过比色法可计算ACE的活性。连续监测法：使用呋喃丙烯基丙氨酰甘氨酰甘氨酸(furylacryloyl-phe-Gly-Gly,FAPGG)作为底物测ACE的特异活性。FAPGG被ACE催化水解时，产生吸光度变化，在340nm处测定。此法灵敏度明显改善，参考值范围也被确定。近期国内外资料测定血清(浆)或组织液ACE活性大多采用FAPGG作底物的试剂，且此法可用于全自动生化分析仪，适合于临床常规检验。但是由于血管紧张素转化酶活性容易受胆红素等因素的抑制，普通的血管紧张素转化酶检测试剂存在重复性不好、抗干扰性能差等缺点。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术提供一种血管紧张素转化酶测定试剂盒及其制备方法和应用，该试剂盒是一种稳定性强、抗干扰能力强、重复性好的液体试剂盒。本专利技术是通过以下技术方案实现的：一种血管紧张素转化酶测定试剂盒，试剂盒含有试剂R1和试剂R2:试剂R1包含以下组分：试剂R2中含有以下成分：优选地，试剂R1的pH值为7.0-9.0；试剂R2的pH值为7.0-8.5。优选地，试剂R1中所述的离子激活剂为氯化锌、硫酸锌、硝酸锌、磷酸锌的一种或多种。优选地，试剂R2中所述的稳定剂为壳寡糖、甘油、Surfynol-465的混合物，壳寡糖、甘油、Surfynol-465的质量比为2:3-5:4-8。优选地，试剂R1中所述的防腐剂为叠氮钠、PC300、MIT和硫酸庆大霉素中的一种或多种；试剂R2中所述的防腐剂为叠氮钠、PC300、MIT和硫酸庆大霉素中的一种或多种。上述所述的血管紧张素转化酶测定试剂盒的制备方法，包括以下步骤:(1)试剂R1的配制：取适量水，分别依次加入R1中所示原料，搅匀溶解一个原料后加入下一个原料，用盐酸或氢氧化钠调节到PH值7.0-9.0，定容到所需体积。(2)试剂R2的配制：取适量水，分别依次加入R2中所示原料，搅匀溶解一个原料后加入下一个原料，用盐酸或氢氧化钠调节到PH值7.0-8.5，定容到所需体积。上述所述的血管紧张素转化酶测定试剂盒的应用，用于非疾病的诊断和治疗目的测定血清中血管紧张素转化酶的浓度。本专利技术血管紧张素转化酶测定试剂盒原理为FAPGG被ACE催化水解时，产生吸光度变化，在340nm处测定，FAPGG最大吸收峰在340nm。本专利技术有益效果1)本专利技术血管紧张素转化酶测定试剂盒为液体双试剂，无需复溶配制，开瓶可以直接使用，试剂R1对样本进行孵育，去除干扰，试剂R2最大限度保持FAPGG的稳定性。2)本专利技术血管紧张素转化酶试剂R1和R2中的缓冲液为TAPS缓冲液，能够促进血管紧张素转化酶的催化作用，在添加氯化钠的基础上，同时添加锌金属盐，两者都作为反应的离子激活剂，彻底激活酶催化底物的能力，保证反应的特异性、准确性。3)本专利技术血管紧张素转化酶试剂R1中聚甘油脂肪酸酯去除血清中的的胆红素对血管紧张素转化酶活性的抑制作用，添加4-羟基2,2,6,6-四甲基-1-氧-哌啶(AAQ-2)可去除抗坏血酸对试剂的干扰作用，提高试剂的抗干扰性能。4)本专利技术通过试剂中添加壳寡糖、甘油、Surfynol-465，可以协同保护试剂中的FAPGG，Surfynol-465作为表面活性剂使反应体系均一稳定，更有利于试剂稳定性和重复性的提高。附图说明图1为实施例1和对比例1试剂的相关性曲线；图2为对比例1和对比例2试剂的相关性曲线；图3为实施例1和对比例1、2、5、6、7提供的唾液酸测定试剂进行稳定性试验的浓度变化。具体实施方式以下是本专利技术的具体实施例结合附图说明，对本专利技术的技术方案作进一步的描述，但本专利技术并不限于这些实施例。本专利技术试剂盒测定血清中血管紧张素转化酶的测试条件为：方法：速率法；主波长：340nm；温度：37℃；校正类型：线性；校准方法：两点定标；反应方向：向下。操作步骤表1血管紧张素转化酶测定试剂操作步骤计算方法样本要求：1.新鲜血清。2.样本稳定性：标本2～8℃保存可稳定30天，-20℃保存可稳定6个月。实施例1一种血管紧张素转化酶测定试剂盒，包括试剂R1和试剂R2。试剂R1的组分为：试剂R2的组分为：<本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种血管紧张素转化酶测定试剂盒，其特征在于，试剂盒含有试剂R1和试剂R2:/n试剂R1包含以下组分：/nN-三(羟甲基)甲基-3-氨基丙磺酸（TAPS缓冲液） 100-200mmol/L；/n氯化钠 200-400 mmol/L；/n离子激活剂 0.5-1mmol/L ；/n聚甘油脂肪酸酯 5-20mg/L；/n4-羟基2,2,6,6-四甲基-1-氧-哌啶(AAQ-2) 5-20mg/L ；/n防腐剂 0.5-2g/L；/n试剂R2中含有以下成分：/nN-三(羟甲基)甲基-3-氨基丙磺酸（TAPS缓冲液） 100-200mmol/L；/nFAPGG 0.7-1.5 mmol/L；/n稳定剂 1-15g/L；/n防腐剂 0.5-2g/L。/n...

【技术特征摘要】
1.一种血管紧张素转化酶测定试剂盒，其特征在于，试剂盒含有试剂R1和试剂R2:
试剂R1包含以下组分：
N-三(羟甲基)甲基-3-氨基丙磺酸（TAPS缓冲液）100-200mmol/L；
氯化钠200-400mmol/L；
离子激活剂0.5-1mmol/L；
聚甘油脂肪酸酯5-20mg/L；
4-羟基2,2,6,6-四甲基-1-氧-哌啶(AAQ-2)5-20mg/L；
防腐剂0.5-2g/L；
试剂R2中含有以下成分：
N-三(羟甲基)甲基-3-氨基丙磺酸（TAPS缓冲液）100-200mmol/L；
FAPGG0.7-1.5mmol/L；
稳定剂1-15g/L；
防腐剂0.5-2g/L。


2.根据权利要求1所述的血管紧张素转化酶测定试剂盒，其特征在于，试剂R1的pH值为7.0-9.0；试剂R2的pH值为7.0-8.5。


3.根据权利要求1所述的血管紧张素转化酶测定试剂盒，其特征在于，试剂R1中所述的离子激活剂为氯化锌、硫酸锌、硝酸锌、磷酸锌的一种或多种。


4.根据权利要求1所述的血管紧张素转化酶测定试剂盒，其特征在于，试剂R2中所述的稳定剂为壳寡糖、甘油、Surfynol-465的混合物，壳...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘安娜，王洪星，
申请(专利权)人：中科梅奥山东医学检验有限公司，中拓生物有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37