一种从七叶皂苷钠中分离制备一种微量成分的方法技术

本发明专利技术公开了一种从七叶皂苷钠中分离制备一种微量成分的方法，该方法包括以下两个步骤：1)将七叶皂苷钠原料药上大孔树脂柱，用乙醇进行洗脱，收集洗脱液并浓缩、干燥，然后再上硅胶柱进行层析，用氯仿和甲醇混合溶剂进行洗脱，收集含有目标成分的洗脱液，浓缩至干得粗品；2)将粗品连续进行两次制备液相色谱纯化，收集目标流分并进行浓缩、干燥，采用上述制备方法有效得到了该化合物的成分单体，为七叶皂苷钠的二次开发和效应物质研究提供了物质基础。本发明专利技术制备的单体化合物纯度高达95％以上，产物收率达1.5％左右，具有很好的产业化生产前景。

【技术实现步骤摘要】
一种从七叶皂苷钠中分离制备一种微量成分的方法
本专利技术涉及一种从七叶皂苷钠原料药中分离制备一种微量成分的方法，属于制药领域。
技术介绍
七叶皂苷钠是一种天然药物，是从七叶树科七叶树属植物的种子娑罗子中提取得到的总皂苷钠盐，临床上具有抗脑水肿，抗炎作用，主要用于治疗慢性静脉功能不全。七叶皂苷钠依据液相色谱分析出峰先后(见附图1)，将其主要活性成分依次命名为七叶皂苷A、B、C、D，但七叶皂苷钠中也包含很多其它微量成分。在天然植物药现代化的热潮下，基于成分的复杂多样性，这些除七叶皂苷A、B、C、D以外的其它成分在天然药物的二次开发中显得尤为重要，其中不乏具有显著生物活性的很多新物质。另外，阐述七叶皂苷钠的效应物质基础，提升药物质量标准也是天然植物药走向国际化认证的重要前提，这也就要求对七叶皂苷钠中的成分单体进行有效的制备分离，得到大量的单体成分，为后续质量和药理毒理研究提供物质基础。目前，根据中国药典中提供的检测七叶皂苷钠的HPLC色谱方法，只是在分析柱上定量定性分析原料药，进样量非常小，无法放大到制备柱上进行单体制备，另外由于这些微量成分在七叶皂苷钠中的含量非常低，很难有效地获得高纯度的产物，或者以非常高的成本获得少量的产物，无法满足中试放大生产的需要。因此大多文献如CN102020691，CN102532242报导的都是制备七叶皂苷A、B、C、D单体的方法，对于制备七叶皂苷钠中含量很少的微量成分目前还没有有效的制备方法，尤其是针对其中常规HPLC分析检测下分离度较差的成分，更具有难度。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种从七叶皂苷钠中分离制备一种微量成分的方法。一种从七叶皂苷钠中分离制备一种微量成分的方法，所述微量成分的化学结构式如下：该方法包括以下两个步骤：1)将七叶皂苷钠原料药上大孔树脂柱，用乙醇进行洗脱，收集洗脱液并浓缩、干燥，然后再上硅胶柱进行层析，用氯仿和甲醇混合溶剂进行洗脱，收集洗脱液，浓缩至干得粗品；2)将粗品连续进行两次制备液相色谱纯化，收集目标流分并进行浓缩、干燥。优选地，所述大孔树脂是CHP20P型。优选地，所述乙醇洗脱，包括先用30～45％乙醇洗脱，再用50～70％乙醇洗脱两个步骤，收集50～70％乙醇洗脱液。优选地，所述氯仿与甲醇的体积比为1～5：1。优选地，所述两次制备液相色谱纯化所使用的色谱柱均是反相色谱柱，色谱柱的填料均为聚苯乙烯/二乙烯基苯聚合物，流动相为体积比60～70：40～30的甲醇与0.5～2‰甲酸混合溶液，均采用等度洗脱，检测波长200-230nm。优选地，其中第一次纯化所使用的填料粒径10～15μm，孔径300～500A，第二次纯化所使用的填料粒径3～5μm，孔径100～300A。优选地，其中第一次纯化的洗脱时间100～150min，流速20～50mL/min，第二次纯化的洗脱时间70～90min，流速5～15mL/min。本专利技术中甲酸、乙醇、甲醇凡是所涉及到的浓度均为体积浓度，溶剂均为水，如1‰甲酸指的是每1000ml甲酸水溶液中含有甲酸1ml。本专利技术的有益效果是：本专利技术所制备的化合物在常规HPLC分析检测中的色谱峰出峰时间在136min左右(图1)，前后都有两种化学结构和理化性质非常相近的物质干扰，采用常规的液相色谱很难将其分离，采用上述制备方法，本专利技术有效得到了该化合物的成分单体，为七叶皂苷钠的二次开发和效应物质研究提供了物质基础。本专利技术制备的单体化合物纯度高达95％以上，产物收率达1.5％左右，具有很好的产业化生产前景。附图说明图1是七叶皂苷钠原料药的液相色谱分析定位图。图2是实施例1中一次反向制备的分离色谱图。图3是实施例1中二次反向制备的分离色谱图。图4是HMBC相关谱图。具体实施方式下面的实施例将对本专利技术予以进一步的说明，但不因此限制本专利技术。以下实施例所使用的七叶皂苷钠原料药由武汉爱民制药股份有限公司自行生产，纯度为99.7％。实施例11.粗品制备取CHP20P大孔树脂(三菱化学)1L，湿法装柱，称取七叶皂苷钠粉末5g，用10％乙醇超声溶解，将溶液上柱后先用45％乙醇洗脱5倍柱体积，弃去，再用70％乙醇洗脱8倍柱体积，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至干，得到721mg干膏。将干膏用10ml甲醇超声溶解，然后用80-100目硅胶10g拌样后上硅胶层析柱(上柱比例干膏：硅胶＝1:150，w/w)，接着用氯仿/甲醇(5:1，v/v)混合溶剂为洗脱剂进行洗脱，收集含有目标成分的洗脱液，浓缩至干得到402mg粗品。2.一次制备取步骤1中的粗品402mg，用65％甲醇50ml溶解，0.45μm微孔滤膜过滤后进行一次制备。采用制备液相色谱系统，柱型号DAC50，填料Unips10×300，粒径10μm，孔径300A，流动相为甲醇/1‰甲酸(66：34，v/v)，检测波长200nm，洗脱时间110min，流速35mL/min，上样量为5mL，连续套针进样。分段接收不同保留时间的成分峰流分，并旋干送检进行高效液相分析，保留与原料药液相色谱分析定位图(图1)中目标成分出峰时间一致的流分，该组流分在一次制备分离色谱图(图2)中的出峰时间段为88-91min。将出峰时间段为88-91min的流分减压浓缩并干燥，从而得到目标化合物的富集样品粉末152mg，将富集样品粉末进行高效液相分析检测纯度，分析结果采用峰面积归一化法处理，纯度为83％。3.二次制备将得到的富集样品粉末152mg用65％甲醇超声至完全溶解，浓度30mg/mL，经过0.45μm微孔滤膜过滤后进行二次制备。制备液相色谱柱填料为Unips5×100，粒径5μm，孔径100A，流动相为甲醇/1‰甲酸(70：30，v/v)，检测波长210nm，洗脱时间85min，流速10mL/min，进样量0.5mL，连续套针进样。分段接收不同保留时间的成分峰流分，并旋干送检进行高效液相分析，保留与原料药液相色谱分析定位图(图1)中目标成分出峰时间一致的流分，该组流分在二次制备分离色谱图(图3)中的出峰时间段为68-74min。将出峰时间段为68-74min的流分减压浓缩并干燥，得到固体粉末样品92mg，将最终产物进行高效液相分析检测纯度，分析结果采用峰面积归一化法处理，纯度97.2％。其中，原料药、洗脱流分、产物的高效液相分析检测条件如下：色谱柱：C18柱，5μm，4.6×250mm；检测波长200nm；柱温：30℃；流速：1.0mL/min；进样体积：20μL；流动相体系为乙腈-1‰甲酸；洗脱梯度程序为：时间minA相％(乙腈)B相％(1‰甲酸)0257520336732336733...

【技术保护点】
1.一种从七叶皂苷钠中分离制备一种微量成分的方法，其特征在于：所述微量成分的结构式如下，该方法包括以下两个步骤：/n1)将七叶皂苷钠原料药上大孔树脂柱，用乙醇进行洗脱，收集洗脱液并浓缩、干燥，然后再上硅胶柱进行层析，用氯仿和甲醇混合溶剂进行洗脱，收集含有目标成分的洗脱液，浓缩至干得粗品；/n2)将粗品连续进行两次制备液相色谱纯化，收集目标流分并进行浓缩、干燥，/n

【技术特征摘要】
1.一种从七叶皂苷钠中分离制备一种微量成分的方法，其特征在于：所述微量成分的结构式如下，该方法包括以下两个步骤：
1)将七叶皂苷钠原料药上大孔树脂柱，用乙醇进行洗脱，收集洗脱液并浓缩、干燥，然后再上硅胶柱进行层析，用氯仿和甲醇混合溶剂进行洗脱，收集含有目标成分的洗脱液，浓缩至干得粗品；
2)将粗品连续进行两次制备液相色谱纯化，收集目标流分并进行浓缩、干燥，





2.如权利要求1所述从七叶皂苷钠中分离制备一种微量成分的方法，其特征在于：所述大孔树脂是CHP20P型大孔树脂。


3.如权利要求1所述从七叶皂苷钠中分离制备一种微量成分的方法，其特征在于：所述乙醇洗脱，包括先用30～45％乙醇洗脱，再用50～70％乙醇洗脱两个步骤，收集50～70％乙醇洗脱液。


4.如权利要求1所述从七叶皂苷钠中分离制备一种微量成分的方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：石召华，叶利春，张洋，陆婷，关小羽，彭娟，
申请(专利权)人：湖北李时珍药物研究有限公司，武汉爱民制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42