本发明专利技术公开了一种快速检测七种冠状病毒和其他呼吸道病原体的探针及引物组合物，主要是根据OC43‑CoV、NL63‑CoV、229E‑CoV、HKU1‑CoV、SARS‑CoV、FluB、RSV的N基因；MERS‑CoV的ORF1a、ORF1b、N基因；2019‑nCoV的ORF1ab、N基因；FluA的M基因；HadV的HEXON基因的特异性设计一组特异性引物及Taqman或MGB探针，利用熔解曲线技术，根据熔解温度的变化快速鉴定CoV‑OC43、HCoV‑NL63、HCoV‑229E、HCoV‑HKU1、SARS‑CoV、MERS‑CoV、2019‑nCoV、FluA、FluB、HAdV、RSV。该设计能够实现一个荧光通道中同时检测多种病原体，并能够满足较高的灵敏度。
【技术实现步骤摘要】
一种快速检测七种冠状病毒和其他呼吸道病原体的探针及引物组合物
：本专利技术属于核酸检测
，具体涉及一种检测冠状病毒OC43、冠状病毒NL63、冠状病毒229E、冠状病毒HKU1、SARS冠状病毒、MERS冠状病毒、新型冠状病毒(2019-nCoV)、甲型流感病毒、乙型流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒的试剂盒及检测方法领域。
技术介绍
：冠状病毒(Coronavirus，CoV)属巢状病毒目，冠状病毒科，是一类有包膜的正链RNA病毒，全长在26-32kb之间，分为α、β、γ三个属。α、β属仅对哺乳动物致病，γ属主要引起鸟类感染，CoV主要通过直接接触分泌物或经气溶胶、飞沫传播，也有证据表明可经粪口途径传播。冠状病毒在自然界的感染谱非常广泛，常见的哺乳类动物如犬、猫、鼠、猪、牛及家禽类等都易感。近年来，又从白鲸、骆驼、蝙蝠体内分离到多种类型的冠状病毒。到目前为止，引起人类呼吸道疾病的人冠状病毒(HCoV)已达7种：HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-229E、HCoV-HKU1、SARS-CoV、MERS-CoV和新型冠状病毒(2019-nCoV)，是人呼吸道感染的重要病原体。其中，2019-nCoV于2019年被发现，临床表现为发热、乏力等全身症状，伴有干咳，呼吸困难等，可迅速发展为重症肺炎、呼吸衰竭、急性呼吸窘迫综合征，脓毒性休克，多器官功能衰竭，严重酸碱代谢紊乱等，甚至危及生命。流感是由流感病毒引起急性呼吸道传染病，主要传播方式是空气飞沫传播。流感病毒分为甲型、乙型和丙型。甲型流感病毒(InfluenzaAvirus，FluA)根据表面血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的不同分为16个HA亚型和9个NA亚型，甲型流感病毒最容易发生变异，容易引起爆发流行；乙型流感病毒(InfluenzaBvirus，FluB)变异较少，丙型流感病毒较稳定，多引起散发病例。流感是一种季节性疾病，在温带地区，流感会在整个冬季流行，在热带地区，流感病毒一年四季均存在，雨季流行多见。一般来说，仅约50％左右的感染病人会发展成典型流感临床症状。流感典型症状以突然发热、头晕头痛、肌痛为特点，同时可伴有喉咙痛和咳嗽、鼻塞、流涕、胸痛、眼痛、畏光等症状。发热体温可达39～40℃，一般持续2～3天后渐退。甲型和乙型流感的临床症状相似，乙型流感通常有肌炎及胃肠道症状。人腺病毒(Humanadenoviruses,HAdV)属于哺乳动物腺病毒属，是一群分布广泛的、无包膜的双链DNA病毒，1953年由Rowe等首次发现。目前已发现至少90个基因型，分为A-G共7个亚属，不同型别HAdV的组织嗜性、致病力、流行地区等特性不同。HAdV感染可引起多种疾病，包括肺炎、支气管炎、膀胱炎、眼结膜炎、胃肠道疾病及脑炎等。与呼吸道感染相关的HAdV主要有B亚属(HAdV-3、7、11、14、16、21、50、55型)，C亚属(HAdV-1、2、5、6、57型)和E亚属(HAdV-4型)。腺病毒肺炎约占社区获得性肺炎的4％-10％，重症肺炎以3型及7型多见，HAdV-7B型是2019年我国南方发病地区主要流行株。呼吸道合胞病毒(respiratorysyncytialvirus,RSV)是临床常见的、重要的呼吸道病毒，形态为球形，基因组为线性、不分节段的单链RNA，病毒体有包膜，膜上有刺突，由糖蛋白组成，无血凝素和神经氨酸酶。根据病毒表面蛋白抗原的变异，可将RSV分为两种类型：RSVA型和RSVB型。RSV是5岁以下婴幼儿呼吸道感染的最主要病因，此外，RSV还能感染其他各个年龄组的人群，并导致严重的呼吸道疾病，其病情在老年人中尤为严重。HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-229E、HCoV-HKU1、SARS-CoV、MERS-CoV、2019-nCoV、FluA、FluB、HAdV、RSV都是呼吸道病原体，实验室常用的检测方法包括病毒培养、血清学检测和分子生物学检测。其中，病毒培养和血清学检测由于耗时长、灵敏度低，已不能满足临床需求。而分子生物学检测包括常规PCR、巢式PCR、RT-PCR、Real-timePCR、MultiplexRT-PCR、恒温扩增等。目前使用最多、发展最快的是Real-timePCR，如专利CN102732638A公布的一管多重荧光PCR检测人冠状病毒OC43、229E、NL63、HKU1、SARS；CN110724764A公布的荧光定量PCR检测人冠状病毒OC43、HKU1和呼吸道合胞病毒B型；CN104059997A公布的一种检测A型和B型流感病毒、人偏肺病毒，NL63型、HKU1型和OC43型人冠状病毒的试剂盒，一管内实现6种病原体的检测；CN110144422A公布的同时检测MERS、NL63、OC43、HKU1四种人冠状病毒的试剂盒等。这些公布的检测方法，虽然具有较高的灵敏度，但受到荧光通道的限制，无法实现多种病原体在单管内的同时检测。公开于该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
技术实现思路
：本专利技术的目的在于提供一种基于熔解曲线快速检测HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-229E、HCoV-HKU1、SARS-CoV、MERS-CoV、2019-nCoV、FluA、FluB、HAdV、RSV的试剂盒，能够实现一个荧光通道中同时检测多种病原体，并能够满足较高的灵敏度，从而克服上述现有技术中的缺陷。为实现上述目的，本专利技术提供了一种快速检测七种冠状病毒和其他呼吸道病原体的探针及引物组合物，其特征在于,包括以下组分：包含1种特异性探针及包含2种引物的第一引物组，其中所述一种特异性探针具有如SEQIDNO.31所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQIDNO.1-2所示的核苷酸序列；包含1种特异性探针及包含2种引物的第二引物组，其中所述一种特异性探针具有如SEQIDNO.32所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQIDNO.3-4所示的核苷酸序列；包含1种特异性探针及包含2种引物的第三引物组，其中所述一种特异性探针具有如SEQIDNO.33所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQIDNO.5-6所示的核苷酸序列；包含1种特异性探针及包含2种引物的第四引物组，其中所述一种特异性探针具有如SEQIDNO.34所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQIDNO.7-8所示的核苷酸序列；包含1种特异性探针及包含2种引物的第五引物组，其中所述一种特异性探针具有如SEQIDNO.35所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQIDNO.9-10所示的核苷酸序列；包含1种特异性探针及包含2种引物的第六引物组，其中所述一种特异性探针具有如SEQIDNO.36所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQIDNO.11-12所示的核苷酸序列；包含1种特异性探针及包含2种引物的第七引物组，其中本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种快速检测七种冠状病毒和其他呼吸道病原体的探针及引物组合物，其特征在于,包括以下组分：/n包含1种特异性探针及包含2种引物的第一引物组，其中所述一种特异性探针具有如SEQ ID NO.31所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQ ID NO.1-2所示的核苷酸序列；/n包含1种特异性探针及包含2种引物的第二引物组，其中所述一种特异性探针具有如SEQ ID NO.32所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQ ID NO.3-4所示的核苷酸序列；/n包含1种特异性探针及包含2种引物的第三引物组，其中所述一种特异性探针具有如SEQ ID NO.33所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQ ID NO.5-6所示的核苷酸序列；/n包含1种特异性探针及包含2种引物的第四引物组，其中所述一种特异性探针具有如SEQ ID NO.34所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQ ID NO.7-8所示的核苷酸序列；/n包含1种特异性探针及包含2种引物的第五引物组，其中所述一种特异性探针具有如SEQ ID NO.35所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQ ID NO.9-10所示的核苷酸序列；/n包含1种特异性探针及包含2种引物的第六引物组，其中所述一种特异性探针具有如SEQ ID NO.36所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQ ID NO.11-12所示的核苷酸序列；/n包含1种特异性探针及包含2种引物的第七引物组，其中所述一种特异性探针具有如SEQ ID NO.37所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQ ID NO.13-14所示的核苷酸序列；/n包含1种特异性探针及包含2种引物的第八引物组，其中所述一种特异性探针具有如SEQ ID NO.38所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQ ID NO.15-16所示的核苷酸序列；/n 包含1种特异性探针及包含2种引物的第九引物组，其中所述一种特异性探针具有如SEQ ID NO.39所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQ ID NO.17-18所示的核苷酸序列；/n包含1种特异性探针及包含2种引物的第十引物组，其中所述一种特异性探针具有如SEQ ID NO.40所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQ ID NO.19-20所示的核苷酸序列；/n包含1种特异性探针及包含2种引物的第十一引物组，其中所述一种特异性探针具有如SEQ ID NO.41所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQ ID NO.21-22所示的核苷酸序列；/n 包含1种特异性探针及包含2种引物的第十二引物组，其中所述一种特异性探针具有如SEQ ID NO.42所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQ ID NO.23-24所示的核苷酸序列；/n包含1种特异性探针及包含2种引物的第十三引物组，其中所述一种特异性探针具有如SEQ ID NO.43所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQ ID NO.25-26所示的核苷酸序列；/n包含1种特异性探针及包含2种引物的第十四引物组，其中所述一种特异性探针具有如SEQ ID NO.44所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQ ID NO.27-28所示的核苷酸序列。/n...
【技术特征摘要】
1.一种快速检测七种冠状病毒和其他呼吸道病原体的探针及引物组合物，其特征在于,包括以下组分：
包含1种特异性探针及包含2种引物的第一引物组，其中所述一种特异性探针具有如SEQIDNO.31所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQIDNO.1-2所示的核苷酸序列；
包含1种特异性探针及包含2种引物的第二引物组，其中所述一种特异性探针具有如SEQIDNO.32所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQIDNO.3-4所示的核苷酸序列；
包含1种特异性探针及包含2种引物的第三引物组，其中所述一种特异性探针具有如SEQIDNO.33所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQIDNO.5-6所示的核苷酸序列；
包含1种特异性探针及包含2种引物的第四引物组，其中所述一种特异性探针具有如SEQIDNO.34所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQIDNO.7-8所示的核苷酸序列；
包含1种特异性探针及包含2种引物的第五引物组，其中所述一种特异性探针具有如SEQIDNO.35所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQIDNO.9-10所示的核苷酸序列；
包含1种特异性探针及包含2种引物的第六引物组，其中所述一种特异性探针具有如SEQIDNO.36所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQIDNO.11-12所示的核苷酸序列；
包含1种特异性探针及包含2种引物的第七引物组，其中所述一种特异性探针具有如SEQIDNO.37所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQIDNO.13-14所示的核苷酸序列；
包含1种特异性探针及包含2种引物的第八引物组，其中所述一种特异性探针具有如SEQIDNO.38所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQIDNO.15-16所示的核苷酸序列；
包含1种特异性探针及包含2种引物的第九引物组，其中所述一种特异性探针具有如SEQIDNO.39所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQIDNO.17-18所示的核苷酸序列；
包含1种特异性探针及包含2种引物的第十引物组，其中所述一种特异性探针具有如SEQIDNO.40所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQIDNO.19-20所示的核苷酸序列；
包含1种特异性探针及包含2种引物的第十一引物组，其中所述一种特异性探针具有如SEQIDNO.41所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQIDNO.21-22所示的核苷酸序列；
包含1种特异性探针及包含2种引物的第十二引物组，其中所述一种特异性探针具有如SEQIDNO.42所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQIDNO.23-24所示的核苷酸序列；
包含1种特异性探针及包含2种引物的第十三引物组，其中所述一种特异性探针具有如SEQIDNO.43所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQIDNO.25-26所示的核苷酸序列；
包含1种特异性探针及包含2种引物的第十四引物组，其中所述一种特异性探针具有如SEQIDNO.44所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQIDNO.27-28所示的核苷酸序列。
2.根据权利要求1所述的快速检测七种冠状病毒和其他呼吸道病原体的探针及引物组合物，其特征在于，还包括第十五引物组，包含1种特异性探针及包含2种引物，其中所述一种特异性探针具有如SEQIDNO.45所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQIDNO.29-30所示的核苷酸序列。
【专利技术属性】
技术研发人员：赵西浩，张蓉，李伟伟，曹新文，陈永红，郭玉婉，苏波，张梅梅，李秀林，刘中华，王国强，
申请(专利权)人：江苏硕世生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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