SARS-CoV-2病毒的高通量检测引物及试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及检测试剂技术领域，尤其涉及SARS‑CoV‑2病毒的高通量检测引物及试剂盒。本发明专利技术提供的引物针对的SARS‑CoV‑2病毒中特定的区域进行扩增，这些片段作为的SARS‑CoV‑2病毒的检测标志物，能够实现对的SARS‑CoV‑2病毒的高通量检测，灵敏度高、特异性好、准确率高。

【技术实现步骤摘要】
SARS-CoV-2病毒的高通量检测引物及试剂盒
本专利技术涉及检测试剂
，尤其涉及SARS-CoV-2病毒的高通量检测引物及试剂盒。
技术介绍
2019新型冠状病毒(SARS-CoV-2)是2019年在人体中发现的冠状病毒新毒株。该病毒症状一般为发热、乏力、干咳、逐渐出现呼吸困难，严重者表现为急性呼吸窘迫综合征，脓毒症休克，难以纠正的代谢性酸中毒和凝血功能障碍。该病毒潜伏期具有传染性，目前，所致疾病没有特异治疗方法。为了尽快控制疫情的发展，在第一时间内对所有可能感染SARS-CoV-2病毒的患者进行检测至关重要。目前，检测SARS-CoV-2病毒的主要方法是实时荧光定量PCR技术，该方法具有特异性强、灵敏度高的特点，但是由于该方法对操作人员的要求较高，且其使用的检测仪器限制了一次检测样本的数量，使得一次检测样本的通量较低，无法满足大批量样本的检测需求，因此能够高通量检测SARS-CoV-2病毒的试剂是当前急需的。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供SARS-CoV-2病毒的高通量检测引物及试剂盒，该引物适用于高通量测序的核酸检测方法。本专利技术提供了SEQIDNO:1～7所示7个核酸片段中的至少两个作为标志物在制备SARS-CoV-2病毒检测试剂的应用。本专利技术还提供了SARS-CoV-2病毒的高通量检测引物组，其上游引物由顺序连接的上游通用序列和上游识别序列组成；其下游引物由顺序连接的下游通用序列1、标签序列、下游通用序列2和下游识别序列组成；其中，上游通用序列的核苷酸序列如SEQIDNO:8所示；下游通用序列的核苷酸序列1如SEQIDNO:9所示；下游通用序列的核苷酸序列2如SEQIDNO:10所示；上游识别序列选自SEQIDNO:11～17所示的7种序列中的任一种；下游识别序列选自SEQIDNO:18～24所示的7种序列中的任一种。所述引物组中还包括SEQIDNO:25～26所示的内参引物。一些实施例中，所述引物组包括7对特异性引物和SEQIDNO:25～26所示的内参引物；引物对1包括：上游引物1：5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCTGATGGTGGTGTCACTCGTG-3’下游引物1：5’-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGAT[标签序列]GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCGGCACGACAAAACCCACTTC-3’引物对2包括：上游引物2：5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCTCGAACTGCACCTCATGGTC-3’下游引物2：5’-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGAT[标签序列]GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCGACTTTAGATCGGCGCCGTA-3’引物对3包括：上游引物3：5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCTGTCGTTGACAGGACACGAG-3’下游引物3：5’-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGAT[标签序列]GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCAGTCTCCAAAGCCACGTACG-3’引物对4包括：上游引物4：5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCCGGATGGCTTATTGTTGGCG-3’下游引物4：5’-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGAT[标签序列]GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCGGCATTTCCAGCAAAGCCAA-3’引物对5包括：上游引物5：5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCGCCGCTGTTGATGCACTATG-3’下游引物5：5’-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGAT[标签序列]GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCTGTCGTCTCAGGCAATGCAT-3’引物对6包括：上游引物6：5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCTCTTCTCAACGTGCCACTCC-3’下游引物6：5’-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGAT[标签序列]GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCGGCAGGTCCTTGATGTCACA-3’引物对7包括：上游引物7：5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCACACGTAACCCTGCTTGGAG-3’下游引物7：5’-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGAT[标签序列]GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCCTGAGGTGTGTAGGTGCCTG-3’。本专利技术所述的引物组中，所述标签序列随机，其长度为8bp；每个检测体系对应一个标签序列。每个待测样品对应一个标签序列，每个检测体系中至少包括两对检测引物和一对内参引物。每个检测体系中所有引物的标签序列是一致的。标签序列在测序中，用于区分待测样品。本专利技术提供的引物组适用于SARS-CoV-2病毒的高通量检测，其检测依赖于Illumina测序仪，测序策略使用单端150p测序。基于高通量平台的应用，利用本专利技术所述的引物组可以同时检测多个样品，每次检测最多可检测的样品数量可达1000例。因此，所述标签序列随机选自：本专利技术还提供了一种SARS-CoV-2病毒的高通量检测试剂盒，其包括本专利技术所述的引物组。本专利技术所述的高通量检测试剂盒中，还包括PCRbuffer、dNTPmix和TaqDNAPolymerase。本专利技术中，所述PCRbuffer(pH值为7.5～8.5)的组分为30mMtris-HCl，50mMKCl，2mMMgCl2,10mM硫酸铵。dNTPmix的组分为：100mMdATP、100mMdCTP、100mMdGTP和100mMdTTP。本专利技术还提供了非诊断目的的SARS-Co本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.SEQ ID NO:1～7所示7个核酸片段中的至少两个作为标志物在制备SARS-CoV-2病毒检测试剂的应用。/n

【技术特征摘要】
1.SEQIDNO:1～7所示7个核酸片段中的至少两个作为标志物在制备SARS-CoV-2病毒检测试剂的应用。


2.SARS-CoV-2病毒的高通量检测引物组，其特征在于，
其上游引物由顺序连接的上游通用序列和上游识别序列组成；
其下游引物由顺序连接的下游通用序列1、标签序列、下游通用序列2和下游识别序列组成；
其中，上游通用序列的核苷酸序列如SEQIDNO:8所示；
下游通用序列的核苷酸序列1如SEQIDNO:9所示；
下游通用序列的核苷酸序列2如SEQIDNO:10所示；
上游识别序列选自SEQIDNO:11～17所示的7种序列中的任一种；
下游识别序列选自SEQIDNO:18～24所示的7种序列中的任一种。


3.根据权利要求2所述的引物组，其特征在于，还包括SEQIDNO:25～26所示的内参引物。


4.根据权利要求2或3所述的引物组，其特征在于，包括7对特异性引物和SEQIDNO:25～26所示的内参引物；
引物对1包括：
上游引物1：
5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCTGATGGTGGTGTCACTCGTG-3’
下游引物1：
5’-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGAT[标签序列]GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCGGCACGACAAAACCCACTTC-3’
引物对2包括：
上游引物2：
5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCTCGAACTGCACCTCATGGTC-3’
下游引物2：
5’-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGAT[标签序列]GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCGACTTTAGATCGGCGCCGTA-3’
引物对3包括：
上游引物3：
5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCTGTCGTTGACAGGACACGAG-3’
下游引物3：
5’-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGAT[标签序列]GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCAGTCTCCAAAGCCACGTACG-3’
引物对4包括：
上游引物4：
5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCCGGATGGCTTATTGTTGGCG-3’
下游引物4：
5’-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGAT...

【专利技术属性】
技术研发人员：王送林，盖伟，宋翠丹，赵秀英，张岩，
申请(专利权)人：微岩医学科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11