可侵染烟草的大豆花叶病毒侵染性克隆载体和农杆菌菌株及其应用制造技术

本发明专利技术公开了可侵染烟草的大豆花叶病毒侵染性克隆载体和农杆菌菌株及其应用。可侵染烟草的大豆花叶病毒侵染性克隆载体序列如SEQ ID NO.1所示。所述的大豆花叶病毒侵染性克隆载体pCB301‑SMV(SC7)在侵染烟草中应用。本发明专利技术中，我们选择能够侵染烟草的大豆花叶病毒株系(SC7)构建侵染性克隆载体，转化农杆菌并注射烟草后，成功的在烟草上形成了系统侵染。这将为烟草在大豆花叶病毒研究方面的应用奠定坚实可靠的基础。

【技术实现步骤摘要】
可侵染烟草的大豆花叶病毒侵染性克隆载体和农杆菌菌株及其应用
本专利技术属于基因工程领域，涉及可侵染烟草的大豆花叶病毒侵染性克隆载体和农杆菌菌株及其应用。
技术介绍
大豆花叶病毒(SMV)属于马铃薯Y病毒属，基因组为一条大小约9.6kb的正义RNA链，包含5’和3’非编码区以及中间的编码序列。其编码序列翻译而成的一条多肽能够通过自我剪切形成10个成熟的病毒蛋白。大豆花叶病毒寄主较窄，但流行范围很广，在全世界的大豆主产区都有不同程度的发生。大豆感染大豆花叶病毒后，会产生花叶、叶片皱缩、顶端枯死等症状，致使植株生长发育受阻、产量和品质下降。研究大豆花叶病毒的致病原因，弄清植物抗大豆花叶病毒的机理，能够使我们更有效的运用分子育种手段实现良好抗病品种的培育。在以前关于大豆花叶病毒和抗大豆花叶病毒基因的研究上，我们一直局限于在大豆植株本身上进行。但是，由于大豆遗传转化困难等原因，相关研究进展并不顺利；并且，由于大豆花叶病毒的侵染范围有限，我们寻找抗病基因的范围始终没有突破物种界限。植物病毒侵染性克隆载体能够为病毒与植物的互作等领域提供新的思本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种可侵染烟草的大豆花叶病毒侵染性克隆载体pCB301-SMV(SC7)，其特征在于序列如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种可侵染烟草的大豆花叶病毒侵染性克隆载体pCB301-SMV(SC7)，其特征在于序列如SEQIDNO.1所示。


2.权利要求1所述的大豆花叶病毒侵染性克隆载体pCB301-SMV(SC7)的构建方法，其特征在于从感染大豆花叶病毒SC7的大豆叶片中提取RNA，反转录成为cDNA，利用多对引物分段扩增获得大豆花叶病毒SC7的片段，然后利用PCR的方法在最后一个片段的3’UTR之后引入PolyA及HDVrz的序列，且各片段之间存在重叠序列；将上述各个片段及利用SmaI和StuI线性化之后的pCB301载体一起转入酵母W303菌株之中进行重组反应；筛选重组成功的载体提取质粒即形成侵染性克隆载体pCB301-SMV(SC7)。


3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于通过第一轮PCR分五段分别扩增获得SMV的片段：模板为反转录所得SMV(SC7)的cDNA，扩增frag1a使用引物1c-F-1和1a-2R，扩增frag2a使用引物2a-F和2a-2R，扩增frag3a使用引物3a-F和3a-R，扩增frag4a使用引物4a-F和4a-R，扩增frag5-1a使用引物5a-F和5a-R-1；其中1c-F-1的序列如SEQIDNO.2所示，1a-2R的序列如SEQIDNO.3所示，2a-F的序列如SEQIDNO.5所示，2a-2R的序列如SEQIDNO.4所示，3a-F的序列如SEQIDNO.6所示，3a-R的序列如SEQIDNO.7所示，4a-F的序列如SEQIDNO.8所示，4a-R的序列如SEQIDNO.9所示，5a-F的序列如SEQIDNO.10所示，5a-...

【专利技术属性】
技术研发人员：智海剑，殷金龙，王丽群，刘慧，晋彤彤，李凯，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32