一种浮萍表达凡纳滨对虾抗菌肽VPS载体的构建方法技术

本发明专利技术公开了一种浮萍表达凡纳滨对虾抗菌肽VPS载体的构建方法，本方法以虾RNA为材料，通过反转录获得cDNA作为模板，设计Penaeidin3a.1基因特异性引物，经过PCR、酶切，将产物与烟草花叶病毒35S启动子和NOS终止子之间相连接，最终经过双酶切，构建到植物双元表达载体1301上。通过PCR鉴定、双酶切鉴定和基因测序，最终确定完成浮萍表达凡纳滨对虾抗菌肽VPS载体的构建。本项发明专利技术中构建方法具有简单、便捷、易操作、保存1301载体原有GUS基因易于进行筛选等特点，可应用于浮萍表达抗菌肽应用研究，是浮萍作为生产抗菌肽蛋白不可或缺的关键操作。

【技术实现步骤摘要】
一种浮萍表达凡纳滨对虾抗菌肽VPS载体的构建方法本专利技术得到国家重点研发计划资助(2018YFD0901301)，国家自然科学基金青年项目(31700443)，天津市水产产业技术体系创新团队(ITTFRS2017007)的资助。
本专利技术属于生物工程
，具体涉及一种浮萍表达凡纳滨对虾抗菌肽VPS载体的构建方法。
技术介绍
在水产养殖业中，抗生素的大量使用造成了食物和水源的双重危害，且出现了相应的抗药性治病菌，目前已成为水产养殖业的一大问题。抗菌肽具有广谱抗菌性，并对部分病毒、寄生虫和癌细胞等均具有抗性，同时可提高免疫力和伤口愈合，是取代常规抗生素、解决致病菌抗药性问题的极佳选择。因此，将抗菌肽替代抗生素应用于生产实践越来越受到科学工作者和水产养殖业的重视。获得植物表达抗菌肽载体，可应用于利用浮萍生产抗菌肽的生产实际中，是利用浮萍作为植物反应器生产抗菌肽分析不可或缺的关键操作。
技术实现思路
本专利技术涉及一种浮萍表达凡纳滨对虾抗菌肽VPS载体的构建方法。本专利技术的目的构建浮萍表达凡纳滨对虾抗菌肽V本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种浮萍表达凡纳滨对虾抗菌肽VPS载体的构建方法，其特征在于按照下列步骤进行：/n1)取凡纳滨对虾组织进行研磨，提取RNA，反转录为cDNA；/n2)利用VPS特异性引物，以凡纳滨对虾cDNA为模板，通过PCR技术获得带有特定酶切位点的抗菌肽基因，并将其连接到T-载体上；/n3)启动子-VPS-终止子中间载体的构建：对启动子-cTP-终止子中间载体和T-Pen3同时进行双酶切，所采用的限制性内切酶为BglⅡ和Pst I，产物利用T4连接酶进行连接；/n4)最终载体的构建：对启动子-VPS-终止子中间载体和pCAMBIA 1301载体同时进行双酶切，所采用的限制性内切酶为Sac I和EcoR...

【技术特征摘要】
1.一种浮萍表达凡纳滨对虾抗菌肽VPS载体的构建方法，其特征在于按照下列步骤进行：
1)取凡纳滨对虾组织进行研磨，提取RNA，反转录为cDNA；
2)利用VPS特异性引物，以凡纳滨对虾cDNA为模板，通过PCR技术获得带有特定酶切位点的抗菌肽基因，并将其连接到T-载体上；
3)启动子-VPS-终止子中间载体的构建：对启动子-cTP-终止子中间载体和T-Pen3同时进行双酶切，所采用的限制性内切酶为BglⅡ和PstI，产物利用T4连接酶进行连接；
4)最终载体的构建：对启动子-VPS-终止子中间载体和pCAMBIA1301载体同时进行双酶切，所采用的限制性内切酶为SacI和EcoRI，对产物利用T4连接酶进行连接获得植物表达凡纳滨对虾VPS的载体。

【专利技术属性】
技术研发人员：孙金生，杨琳，曾键尧，李娜，
申请(专利权)人：天津师范大学，
类型：发明
国别省市：天津;12