一种快速鉴定水稻双向启动子的方法技术

本发明专利技术公开了一种快速鉴定水稻双向启动子的方法，该方法将双向启动子OsBDP1和OsBDP2两端分别连接两个不同的荧光蛋白GFP和RFP，在原生质体转化后观察两侧的荧光信号来检测其活性。该鉴定方法一方面利用瞬时转化缩短了实验时间，另一方面通过同时检测两侧荧光蛋白活性而减少了工作量，为快速鉴定水稻中的双向启动子提供了一个高效途径。

【技术实现步骤摘要】
一种快速鉴定水稻双向启动子的方法
本专利技术涉及生物技术，特别涉及一种快速鉴定水稻双向启动子的方法。
技术介绍
双向启动子是指位于一对“头对头”基因的两个TSSs之间，富含高GC且长度一般不超过1.0Kb，可分别驱动正义链与反义链下游基因表达的DNA序列，如图1所示。在基因工程领域，利用双向启动子在两个方向上控制基因转录这一特性，在其两端连接两个不同的目的基因。这样不仅降低载体构建难度，而且减少转录调控元件的引入，避免了可能因调控元件之间同源序列的存在所导致的转基因“共抑制”现象。因此双向启动子可用于多基因转化，即启动两个及两个以上基因的同时表达，避免了因重复利用启动子而导致的基因沉默等结果。目前双向启动子的鉴定主要有生物信息学预测和实验验证两种方法。生物信息学的鉴定方法本质上都是通过不同的软件预测启动子中存在的motif结合位点、转录调控区域、DHS区域或者核小体缺失区域，筛选符合条件的双向启动子进行表达。实验鉴定的方法主要基于启动子驱动报告基因表达的方式来检测，主要分为稳定转化和瞬时表达两个途径。当前研究最常使用的方法是将双向启动子两边分别本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速鉴定水稻双向启动子的方法，其特征在于：包括如下步骤：/n(1)选取已通过水稻稳定转化验证的两个双向启动子，OsBDP1和OsBDP2；/n(2)构建双报告载体GFP-RFP reporter(SEQ ID NO.1)；/n(3)将OsBDP1和OsBDP2扩增后分别插入双报告载体GFP-RFP reporter(SEQ ID NO.1)，构建OsBDP1 reporter和OsBDP2 reporter载体(SEQ ID NO.2，SEQ ID NO.3)；/n(4)水稻原生质体的制备与转化；/n(5)转化后对OsBDP1、OsBDP2的活性进行验证。/n

【技术特征摘要】
1.一种快速鉴定水稻双向启动子的方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)选取已通过水稻稳定转化验证的两个双向启动子，OsBDP1和OsBDP2；
(2)构建双报告载体GFP-RFPreporter(SEQIDNO.1)；
(3)将OsBDP1和OsBDP2扩增后分别插入双报告载体GFP-RFPreporter(SEQIDNO.1)，构建OsBDP1reporter和OsBDP2reporter载体(SEQIDNO.2，SEQIDNO.3)；
(4)水稻原生质体的制备与转化；
(5)转化后对OsBDP1、OsBDP2的活性进行验证。


2.根据权利要求1所述的快速鉴定水稻双向启动子的方法，其特征在于：所述步骤(2)中双报告载体GFP-RFPreporter构建方法为：以pCambia1301载体为模板，扩增Ubiquitin启动子；以载体pGWB454为模板，扩增RFP编码序列；使用限制性内切酶NcoI和...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘鹏，李鑫琪，张韬，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32