悬铃木突变体、获取悬铃木突变体的方法和应用技术

本发明专利技术提供了悬铃木突变体、获取悬铃木突变体的方法和应用，通过设计悬铃木目的基因的gRNA靶点序列，构建得到基因组编辑载体，利用基因枪法转化处理至种子胚中得到转化产物，对所述转化产物进行培育、鉴定得到所述悬铃木突变体，该方法可对悬铃木的特定基因进行定向突变，定向性强，效率高。

【技术实现步骤摘要】
悬铃木突变体、获取悬铃木突变体的方法和应用
本专利技术涉及转基因
，尤其涉及悬铃木突变体、获取悬铃木突变体的方法和应用。
技术介绍
悬铃木(Platanusspp.)系悬铃木科悬铃木属落叶乔木树种。该科仅有一属，约10-12种，均产于国外。我国引入栽培三种：一球悬铃木(美国梧桐，P.occidentalisLinn.)、二球悬铃木(英国梧桐，P.acerifoliaWilld)和三球悬铃木(法国梧桐，P.orientalisLinn.)。其中，英国梧桐为美国梧桐和法国梧桐的杂交种(P.occidentalis×P.orientalis)，具有良好的杂种优势，引种我国己有百余年的历史。因其生长迅速、冠大荫浓、树干通直、干皮光洁、耐修剪、易繁殖,能适应城市环境和各种土壤条件,具有较强的抗空气污染，抗光化学烟雾、苯、乙醚、硫化氢等有害气体及良好的滞尘减噪、净化空气的能力,全球温带及亚热带各大城市普遍用作公路、街道和工厂绿化树种，并享有“行道树之王”的美誉。在我国，悬铃木作为行道树和庭荫树广泛应用于黄河及长江流域地区,深受广大市民及园林工作者喜爱本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种获得悬铃木突变体的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n获取悬铃木目的基因并确定所述gRNA靶点序列；/n合成含限制性内切酶粘性末端的gRNA靶点序列寡核苷酸片段和及其互补链，混合退火后产生两端含内切酶粘性末端的DNA退火产物；/n提供CRISPR/Cas9载体质粒和限制性内切酶，采用所述限制性内切酶对所述CRISPR/Cas9载体质粒进行酶切处理得到酶切后的CRISPR/Cas9载体质粒；/n提供连接酶，采用所述连接酶依次将所述酶切后的CRISPR/Cas9载体质粒、所述DNA退火产物进行连接处理得到CRISPR/Cas9基因组编辑载体；/n采用基因枪法将所述CRISPR/Cas9基因...

【技术特征摘要】
1.一种获得悬铃木突变体的方法，其特征在于，包括以下步骤：
获取悬铃木目的基因并确定所述gRNA靶点序列；
合成含限制性内切酶粘性末端的gRNA靶点序列寡核苷酸片段和及其互补链，混合退火后产生两端含内切酶粘性末端的DNA退火产物；
提供CRISPR/Cas9载体质粒和限制性内切酶，采用所述限制性内切酶对所述CRISPR/Cas9载体质粒进行酶切处理得到酶切后的CRISPR/Cas9载体质粒；
提供连接酶，采用所述连接酶依次将所述酶切后的CRISPR/Cas9载体质粒、所述DNA退火产物进行连接处理得到CRISPR/Cas9基因组编辑载体；
采用基因枪法将所述CRISPR/Cas9基因组编辑载体转化至种子胚中得到转化产物，对所述转化产物进行培育，筛选悬铃木突变体。


2.根据权利要求1所述的获得悬铃木突变体的方法，其特征在于，所述gRNA靶点序列包括第一gRNA靶点序列和第二gRNA靶点序列，其中，
所述第一gRNA靶点序列如SEQIDNo.1所示，为：
5’-CAGCGCCGATATTGTTCAGG-3’；
所述第二gRNA靶点序列如SEQIDNo.2所示，为：
5’-TTCTGCGCGAAGTCTCTTGG-3’。


3.根据权利要求1所述的获得悬铃木突变体的方法，其特征在于，采用基因枪法将所CRISPR/Cas9基因组编辑载体转化至种子胚中得到转化产物的方法中，包括如下步骤：
获取植物成熟期果实种子，培育出胚芽；
提供待转化载体，所述待转化质粒载体包括所述植物基因组编辑载体以及携带所述植物基因组编辑载体的金属微粒；其中，所述金属微粒的直径为0.6μm～1.8μm；
采用基因枪，在压力为450～2200PSI的条件下将所述待转化载体转化至所述胚芽中，得到转化产物。


4.根据权利要求3所述的获得悬铃木突变体的方法，其特征在于，提供待转化载体的步骤中，按照所述金属微粒与所述植物基因组编辑载体的质量比为15mg:2μg进行包被，制备得到所述待转化载体。


5.根据权利要求3所述的获得悬铃木突变体的方法，其特征在于，采用基因枪，在压力为450～220...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏立新，于为常，骆超，周秋艳，
申请(专利权)人：深圳大学，
类型：发明
国别省市：广东;44