基因工程改造外泌体递送miRNA-146a在糖尿病足溃疡治疗方面的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种基因工程改造外泌体递送miRNA‑146a在糖尿病足溃疡治疗方面的应用，包括：⑴构建质粒：以pCDH‑CMV‑MCS‑EF1‑copGFP慢病毒表达载体为基础，整合miRNA‑146a基因，得到miRNA‑146a过表达慢病毒载体pCDH‑CMV‑MCS‑EF1‑copGFP‑146a；⑵包装获得慢病毒，转染293T：使用慢病毒包装质粒pSPAX2和pMD2.G对pCDH‑CMV‑MCS‑EF1‑copGFP‑146a进行包装，转染293T细胞，富集高滴度的病毒液；⑶侵染脐带充间质干细胞：用包装好的病毒侵染脐带间充质干细胞，得到过表达miRNA‑146a的脐带间充质干细胞hucMSC‑146a；⑷培养hucMSC‑146a，从培养基中分离过表达miRNA‑146a的外泌体Exso‑146a。

【技术实现步骤摘要】
基因工程改造外泌体递送miRNA-146a在糖尿病足溃疡治疗方面的应用
本专利技术属于基因工程领域，涉及外泌体表达技术，尤其是一种基因工程改造外泌体递送miRNA-146a在糖尿病足溃疡治疗方面的应用。
技术介绍
外泌体是细胞之间的信号传递因子，它广泛存在并分布于各种体液中，携带多种蛋白质、mRNA、miRNA和脂质类物质等。生物体的外泌体形成了一种全新的细胞-细胞间信息传递网络，可参与细胞通讯、细胞迁移、血管新生和肿瘤细胞生长等过程。脐带间充质干细胞(hucMSC)能够加速损伤皮肤的创面愈合。近年来的研究成果表明，来源于hucMSC的外泌体hucMSC-ex也可以通过介导WNT4信号通路，参与皮肤创伤修复。除此之外，HucMSC-ex还能够显著促进皮肤细胞增殖，抑制H2O2诱导的细胞凋亡。人类miRNA-146a定位于第五号染色体loc285628基因的第二个外显子区。不同物种间miR-146a的序列高度保守，提示其在生物体的生理、病理过程中可能发挥着重要作用。到目前为止，越来越多的证据表明miR-146a参与了免疫、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基因工程改造外泌体递送miRNA-146a在糖尿病足溃疡治疗方面的应用，其特征在于：具体方法步骤如下：/n步骤一：构建质粒：以基因工程手段构建miRNA-146a过表达的质粒；/n步骤二：借用慢病毒等载体，包装后，转染293T，并富集高滴度的病毒液；/n步骤三：侵染脐带充间质干细胞：用包装好的病毒侵染脐带间充质干细胞，得到过表达miRNA-146a的脐带间充质干细胞hucMSC-146a；/n步骤四：培养hucMSC-146a，从培养基中分离过表达miRNA-146a的外泌体Exso-146a；/n步骤五：通过外敷或肌注的方式给药，用Exso-146a治疗糖尿病足溃疡。/n

【技术特征摘要】
1.一种基因工程改造外泌体递送miRNA-146a在糖尿病足溃疡治疗方面的应用，其特征在于：具体方法步骤如下：
步骤一：构建质粒：以基因工程手段构建miRNA-146a过表达的质粒；
步骤二：借用慢病毒等载体，包装后，转染293T，并富集高滴度的病毒液；
步骤三：侵染脐带充间质干细胞：用包装好的病毒侵染脐带间充质干细胞，得到过表达miRNA-146a的脐带间充质干细胞hucMSC-146a；
步骤四：培养hucMSC-146a，从培养基中分离过表达miRNA-146a的外泌体Exso-146a；
步骤五：通过外敷或肌注的方式给药，用Exso-146a治疗糖尿病足溃疡...

【专利技术属性】
技术研发人员：柏玮，李志宏，郭雅楠，蒋彩云，
申请(专利权)人：百澳瑞派天津生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12