一种产品性能可控的脱细胞生物羊膜的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种产品性能可控的脱细胞生物羊膜的制备方法，属于生物材料领域。产品性能可控指，采用下述公式通过控制脱细胞液的浓度、脱细胞处理时间和脱细胞处理温度来控制所述脱细胞生物羊膜的产品的拉伸强度、降解时间：Y1＝52.59‑7X1‑3X2‑4.5X3+0.25X1X2+0.25X1X3+1.75X2X3；Y2＝9.67‑1.77X1‑0.99X2‑1.12X3+0.34X1X2+0.36X1X3+0.54X2X3；上述公式中，Y1为降解时间，Y2为拉伸强度；X1代表脱细胞液的浓度；X2代表处理时间；X3代表处理温度。本发明专利技术可对产品性能做有效预测及控制，并能获得性能优良的脱细胞生物羊膜产品。

A preparation method of acellular biological amniotic membrane with controllable product performance

【技术实现步骤摘要】
一种产品性能可控的脱细胞生物羊膜的制备方法
本专利技术属于生物材料领域，具体涉及一种产品性能可控的脱细胞生物羊膜的制备方法。
技术介绍
羊膜是胎盘的最内层，主要由Ⅰ、Ⅳ、Ⅴ型胶原组成，无神经和血管，具有一定的弹性，表面光滑，厚约0.02-0.5mm，其结构主要分为上皮层、基底膜、致密层、纤维母细胞层和海绵层。羊膜含有大量干细胞生长因子和成纤维细胞生长因子，可以促进细胞的分化和增值，为缺损组织的快速修复起到了关键的作用。同时生物羊膜还可以通过抑制某些特定转化因子如TGF-β的表达来抑制纤维母细胞的形成，进而减轻组织瘢痕的形成。另外，羊膜无HLA-A，B或DR抗原，免疫性极低，移植到体内几乎不会发生特异性排斥反应。由于其优越的生物学性能，已成为众多生物公司研究的热点。国内已经有公司推出羊膜产品，其制备工艺各有不同，产品对应的适应症也有不同。目前国内的生物羊膜大部分被用于眼表修复、骨修复和表皮修复领域。脱细胞生物羊膜主要用到对免疫原性要求高的适应症，但羊膜的厚度较薄且质地柔软，一般的脱细胞液很难避免对其结构造成影响，脱细胞后生物羊膜的厚度和韧性会随之变低，降解时间变短，临床的应用产生局限性，脱细胞液的浓度对性能的影响研究显得格外重要。目前常用来脱细胞的试剂主要有酸碱，高低渗盐溶液，十二烷基硫酸钠，胰蛋白酶等其中的一种或几种的混合，选用合适浓度的脱细胞试剂对羊膜进行处理是影响羊膜产品性能的关键，浓度过高时，试剂会对材料的结构性能产生影响；浓度过低时，试剂无法去除细胞。面对不同的医学需求，需要选择合适的脱细胞试剂对羊膜进行处理，对于不同的修复领域，需要选择各项性能不同的脱细胞羊膜产品，包括不同的力学强度、不同的降解时间等，本领域尚未出现一种在制备过程中根据不同的修复需求通过控制脱细胞液浓度、脱细胞时间来控制最终产品上述各方面性能的方法，因此本领域亟需开发一种产品性能可控的脱细胞羊膜的制备方法。
技术实现思路
基于本领域存在的客观问题及上述需求，本专利技术提供了一种产品性能可控的脱细胞生物羊膜的制备方法，能在制备过程中根据最终的产品应用领域所需的性能要求来控制制备步骤中的各参数本专利技术的技术方案如下：一种产品性能可控的脱细胞生物羊膜的制备方法，其特征在于：所述产品性能可控指，采用下述预测公式通过控制脱细胞液的浓度、处理时间和处理温度来控制所述脱细胞生物羊膜的产品的拉伸强度、降解时间：Y1＝52.59-7X1-3X2-4.5X3+0.25X1X2+0.25X1X3+1.75X2X3；Y2＝9.67-1.77X1-0.99X2-1.12X3+0.34X1X2+0.36X1X3+0.54X2X3；上述公式中，Y1为降解时间，Y2为拉伸强度；X1代表脱细胞液的浓度；X2代表时间；X3代表温度；所述制备方法包括：将消毒后的羊膜组织先后放入两种不同的脱细胞液中处理；所述脱细胞液的浓度、所述处理的时间和温度根据所述脱细胞生物羊膜的产品要求的拉伸强度、降解时间通过上述公式计算确定。所述脱细胞液选自酸碱，高低渗盐溶液，十二烷基硫酸钠，胰蛋白酶；所述将消毒后的羊膜组织先后放入两种不同的脱细胞液中处理指：将消毒后的羊膜组织先后放入两种不同的脱细胞液中浸泡。所述将消毒后的羊膜组织先后放入两种不同的脱细胞液中处理指：将消毒后的羊膜组织先后放入胰蛋白酶液和十二烷基硫酸钠溶液中浸泡。所述胰蛋白酶液的浓度为0.20％，0.30％，0.40％；所述胰蛋白酶液的中的浸泡时间为10-25h，优选18h，浸泡温度为2-26℃，优选2-8℃；所述十二烷基硫酸钠溶液的浓度为0.20％，0.30％，0.40％；所述十二烷基硫酸钠溶中的浸泡时间为10-30min，优选20min，浸泡温度为15-30℃，优选为20-25℃。所述十二烷基硫酸钠溶液中浸泡的同时伴随振荡，振荡频率为100-120r/min，优选110r/min；反复浸泡3-5次，优选4次。一种产品性能可控的脱细胞生物羊膜的制备方法，还包括：在脱细胞液中处理之前将羊膜组织进行消毒、清洗；在脱细胞液中处理之后将羊膜组织清洗、冻干、灭菌。所述消毒指，将羊膜组织先后放入消毒液：过氧化氢溶液和酒精中浸泡；优选地，所述过氧化氢溶液浓度为3％；所述酒精为浓度为75％的酒精溶液；更优选地，羊膜组织在过氧化氢溶液中的浸泡30min，且每隔10min搅拌一次；羊膜组织在过氧化氢溶液中浸泡完毕后清洗4-8次，再放入酒精中浸泡30min，每隔10min搅拌一次；酒精浸泡完毕后清洗羊膜组织4-8次，再放入脱细胞液中处理。在脱细胞液中处理之后将羊膜组织清洗4-8次；所述灭菌指辐照灭菌。所述羊膜组织取自胎盘羊膜；所述胎盘选自人胎盘，牛胎盘，羊胎盘。根据上述制备方法制备得到的脱细胞生物羊膜。本专利技术的有益效果在于，一方面，提供了一种产品性能可控的脱细胞生物羊膜的制备方法，并得到了羊膜材料力学拉伸强度、降解所需时间与脱细胞液浓度、处理时间、处理温度的关系，在面对不同修复领域、不同性能要求的羊膜产品要求时，可根据本专利技术提供的制备方法中的公式，将所需羊膜产品性能参数代入公式计算得到制备方法过程中所需的脱细胞液的浓度、脱细胞处理时间等环节的参数，使最终实际获得的脱细胞羊膜成品符合预期的产品性能要求。本专利技术通过试验验证了脱细胞生物羊膜产品的力学拉伸强度、降解时间等响应变量的预测值和实验值十分接近，降解时间和拉伸强度的预测值与实验平均值的相对误差分别为1.2％和1.1％，这说明能够利用响应变量回归模型对脱细胞条件下的降解时间和拉伸强度进行有效的预测和控制，另一方面，为不同医学需求选择合适性能的羊膜材料提供了一套最佳的脱细胞工艺，其中包括优化出最佳的脱细胞液浓度，并充分保证试剂在去除细胞的前提下对产品性能的影响最小。说明书附图图1中，a-d分别为胰蛋白酶和SDS浓度为0，0.20％，0.30％，0.40％；放大倍数1:200时，羊膜中细胞残留情况。图2中，a，c为脱细胞羊膜；b，d分别为人真皮成纤维细胞培养后羊膜及肾小管细胞培养后羊膜具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的详细说明，下述实施例只是说明性的，并不限制本专利技术保护范围。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法；所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。生物材料的来源下面实施例和实验例用到的胎盘来自北京清华长庚妇产医院。第1组实施例、本专利技术的脱细胞羊膜的制备方法本组实施例提供一种产品性能可控的脱细胞生物羊膜的制备方法，其特征在于：所述产品性能可控指，采用下述预测公式通过控制脱细胞液的浓度、处理时间和处理温度来控制所述脱细胞生物羊膜的产品的拉伸强度、降解时间：Y1(降解时间)＝52.59-7X1-3X2-4.5X3+0.25X1X2+0.25X1X3+1.75X2X3；Y2(拉伸强度)＝9.67-1.77X1-0.99X2-1.12X3+0.34X1X2+0.36X1X3+0.54X2X3；上述公式中，X1代表脱细胞液的浓度；X2代表时间；X3代表温度；所述制备方法包括：将消毒后的羊膜组织先后放入两种不同的脱细胞液中处理；所述脱细胞液的浓度、所述处理的时间和温度根据所述脱细胞生物羊膜的产品要求的拉伸强度、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种产品性能可控的脱细胞生物羊膜的制备方法，其特征在于：所述产品性能可控指，采用下述公式通过控制脱细胞液的浓度、脱细胞处理时间和脱细胞处理温度来控制所述脱细胞生物羊膜的产品的拉伸强度、降解时间：Y1＝52.59‑7X1‑3X2‑4.5X3+0.25X1X2+0.25X1X3+1.75X2X3；Y2＝9.67‑1.77X1‑0.99X2‑1.12X3+0.34X1X2+0.36X1X3+0.54X2X3；上述公式中，Y1为降解时间，Y2为拉伸强度；X1代表脱细胞液的浓度；X2代表处理时间；X3代表处理温度；所述制备方法包括：将消毒后的羊膜组织先后放入两种不同的脱细胞液中处理；所述脱细胞液的浓度、所述处理时间和处理温度根据所述脱细胞生物羊膜的产品要求的拉伸强度、降解时间通过上述公式计算确定。

【技术特征摘要】
2018.12.20 CN 20181156688371.一种产品性能可控的脱细胞生物羊膜的制备方法，其特征在于：所述产品性能可控指，采用下述公式通过控制脱细胞液的浓度、脱细胞处理时间和脱细胞处理温度来控制所述脱细胞生物羊膜的产品的拉伸强度、降解时间：Y1＝52.59-7X1-3X2-4.5X3+0.25X1X2+0.25X1X3+1.75X2X3；Y2＝9.67-1.77X1-0.99X2-1.12X3+0.34X1X2+0.36X1X3+0.54X2X3；上述公式中，Y1为降解时间，Y2为拉伸强度；X1代表脱细胞液的浓度；X2代表处理时间；X3代表处理温度；所述制备方法包括：将消毒后的羊膜组织先后放入两种不同的脱细胞液中处理；所述脱细胞液的浓度、所述处理时间和处理温度根据所述脱细胞生物羊膜的产品要求的拉伸强度、降解时间通过上述公式计算确定。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述脱细胞液选自酸碱，高渗盐溶液，低渗液，十二烷基硫酸钠，胰蛋白酶；所述酸碱选自盐酸、醋酸、EDTA、氢氧化钠溶液、氢氧化钾溶液、氨水等；所述高渗盐溶液选自1-3mol/L的氯化钠或氯化钾溶液，所述低渗液选自质量分数为0.9％的氯化钠或氯化钾溶液或纯化水；所述将消毒后的羊膜组织先后放入两种不同的脱细胞液中处理指：将消毒后的羊膜组织先后放入两种不同的脱细胞液中浸泡。3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：所述将消毒后的羊膜组织先后放入两种不同的脱细胞液中处理指：将消毒后的羊膜组织先后放入胰蛋白酶液和十二烷基硫酸钠溶液中浸泡。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述胰蛋白酶液的质量浓度为0.10％-0.60％，优选0....

【专利技术属性】
技术研发人员：刘伟，崔鑫，李宗燕，李燕青，
申请(专利权)人：百澳瑞派天津生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12