基于miRNA的山羊中β制造技术

本发明专利技术公开了一种基于miRNA的山羊β

【技术实现步骤摘要】
基于miRNA的山羊中β2-受体激动剂检测引物及检测方法
本专利技术涉及一种基于miRNA的山羊中β2-受体激动剂检测引物及检测方法。
技术介绍
近几年来，病害畜产品、药物残留及人为添加违禁物品等问题，已对人体健康造成了较大的危害，畜产品质量安全与否已成为消费者关心的敏感问题，也成为国际、国内社会关注的热点和焦点。β2-受体激动剂是一类人工合成药物，包括：西马特罗，喷布特罗，妥布特罗，西布特罗，溴不特罗，马布特罗，特布他林，氯丙那林，莱克多巴胺，克伦特罗，沙丁胺醇，班布特罗，利托君，克伦普罗，齐帕特罗，马贲特罗等。β2-受体激动剂主要用于防治人、兽支气管哮喘和支气管痉挛等病症，但当使用量超过治疗剂量时，它能促进动物体内蛋白质的合成和脂肪的分解，所以常被当作动物饲料添加剂使用来达到提高饲养动物瘦肉率的目的，但β2-受体激动剂的使用会在畜产品中造成残留，给人类的健康带来威胁。现行我国标准及相关法律法规虽已明令禁止在动物饲料和饮水中添加β2受体激动剂，但仍屡禁不止，而目前主流的药物残留分析方法如仪器分析、免疫分析、传感器及芯片分析等均是基于已知药物的检测，这就导致只有在发现新的β2-受体激动剂后才能建立对应的检测方法，应对效率极低，难以应对当前的严峻形势。因此，寻找合适的β2-受体激动剂检测标志物及建立检测方法，在发现畜产品中已知的药物种类的同时也能够挖掘该家族中的新型药物，对于提高监管效率，早发现早治理至关重要。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种基于miRNA的山羊β2-受体激动剂检测引物及检测方法。第一方面，本专利技术首先保护引物组合，包括引物A、引物B、引物C、引物D、引物E、引物F、引物G、引物H、引物I和引物J；所述引物A为序列表的序列1所示的单链DNA分子；所述引物B为序列表的序列2所示的单链DNA分子；所述引物C为序列表的序列3所示的单链DNA分子；所述引物D为序列表的序列4所示的单链DNA分子；所述引物E为序列表的序列5所示的单链DNA分子；所述引物F为序列表的序列6所示的单链DNA分子；所述引物G为序列表的序列7所示的单链DNA分子；所述引物H为序列表的序列8所示的单链DNA分子；所述引物I为序列表的序列9所示的单链DNA分子；所述引物J为序列表的序列10所示的单链DNA分子。所述引物组合还可包括引物对甲；所述引物对甲由引物F和引物R组成；所述引物F为序列表的序列11所示的单链DNA分子；所述引物R为序列表的序列12所示的单链DNA分子。所述引物组合的用途为如下(a1)-(a4)中的任一种：(a1)检测β2-受体激动剂；(a2)制备用于检测β2-受体激动剂的产品；(a3)鉴定或辅助鉴定待测样本中是否含有β2-受体激动剂；(a4)制备用于鉴定或辅助鉴定待测样本中是否含有β2-受体激动剂的产品。第二方面，本专利技术还保护所述引物组合的应用，为如下(a1)-(a4)中的任一种：(a1)检测β2-受体激动剂；(a2)制备用于检测β2-受体激动剂的产品；(a3)鉴定或辅助鉴定待测样本中是否含有β2-受体激动剂；(a4)制备用于鉴定或辅助鉴定待测样本中是否含有β2-受体激动剂的产品。第三方面，本专利技术还保护含有所述引物组合的产品，所述产品的用途为如下(b1)或(b2)：(b1)检测β2-受体激动剂；(b2)鉴定或辅助鉴定待测样本中是否含有β2-受体激动剂。所述产品还包括miRNAcDNA第一链合成试剂盒和miRNA荧光定量检测试剂盒。所述miRNAcDNA第一链合成试剂盒和miRNA荧光定量检测试剂盒为配套使用的产品，可搭配所述引物组合使用实现miRNAcDNA第一链的合成和荧光定量检测。所述miRNAcDNA第一链合成试剂盒具体可为miRcute增强型miRNAcDNA第一链合成试剂盒(TIANGEN，北京，中国)。所述miRNA荧光定量检测试剂盒具体可为miRcute增强型miRNA荧光定量检测试剂盒(TIANGEN，北京，中国)。第四方面，本专利技术还保护鉴定或辅助鉴定待测样本中是否含有β2-受体激动剂的方法，包括如下步骤：(1)提取待测样本的miRNA，采用miRNAcDNA第一链合成试剂盒完成miRNAcDNA第一链的合成；(2)以步骤(1)得到的miRNAcDNA第一链为模板，分别使用所述10条引物(引物A至引物J)和miRNA荧光定量检测试剂盒对模板进行荧光实时定量PCR检测，获得10个反应体系的△ct值，依次记为x1、x2、x3、x4、x5、x6、x7、x8、x9和x10；所述x1为采用引物A和miRNA荧光定量检测试剂盒对模板进行荧光实时定量PCR检测得到的ct值与对照反应体系的Ct值的差值；所述x2为采用引物B和miRNA荧光定量检测试剂盒对模板进行荧光实时定量PCR检测得到的ct值与对照反应体系的Ct值的差值；所述x3为采用引物C和miRNA荧光定量检测试剂盒对模板进行荧光实时定量PCR检测得到的ct值与对照反应体系的Ct值的差值；所述x4为采用引物D和miRNA荧光定量检测试剂盒对模板进行荧光实时定量PCR检测得到的ct值与对照反应体系的Ct值的差值；所述x5为采用引物E和miRNA荧光定量检测试剂盒对模板进行荧光实时定量PCR检测得到的ct值与对照反应体系的Ct值的差值；所述x6为采用引物F和miRNA荧光定量检测试剂盒对模板进行荧光实时定量PCR检测得到的ct值与对照反应体系的Ct值的差值；所述x7为采用引物G和miRNA荧光定量检测试剂盒对模板进行荧光实时定量PCR检测得到的ct值与对照反应体系的Ct值的差值；所述x8为采用引物H和miRNA荧光定量检测试剂盒对模板进行荧光实时定量PCR检测得到的ct值与对照反应体系的Ct值的差值；所述x9为采用引物I和miRNA荧光定量检测试剂盒对模板进行荧光实时定量PCR检测得到的ct值与对照反应体系的Ct值的差值；所述x10为采用引物J和miRNA荧光定量检测试剂盒对模板进行荧光实时定量PCR检测得到的ct值与对照反应体系的Ct值的差值；所述对照反应体系的Ct值为采用所述引物对甲对模板进行荧光实时定量PCR检测得到的ct值；(3)将步骤(2)得到的x1-x10代入下述公式1和公式2，公式1：Y1＝23.629x1-196.449x2-104.946x3+60.133x4+369.088x5+19.466x6+12.09x7+54.674x8+133.242x9+8.04x10-3428.62；公式2：Y2＝23.181x1-215.131x2-108.599x3+65.817x4+390.8x5+20.088x6+20.98x7+59.853x8+142.476x9+11.898x本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.引物组合，包括引物A、引物B、引物C、引物D、引物E、引物F、引物G、引物H、引物I和引物J；/n所述引物A为序列表的序列1所示的单链DNA分子；/n所述引物B为序列表的序列2所示的单链DNA分子；/n所述引物C为序列表的序列3所示的单链DNA分子；/n所述引物D为序列表的序列4所示的单链DNA分子；/n所述引物E为序列表的序列5所示的单链DNA分子；/n所述引物F为序列表的序列6所示的单链DNA分子；/n所述引物G为序列表的序列7所示的单链DNA分子；/n所述引物H为序列表的序列8所示的单链DNA分子；/n所述引物I为序列表的序列9所示的单链DNA分子；/n所述引物J为序列表的序列10所示的单链DNA分子。/n

【技术特征摘要】
1.引物组合，包括引物A、引物B、引物C、引物D、引物E、引物F、引物G、引物H、引物I和引物J；
所述引物A为序列表的序列1所示的单链DNA分子；
所述引物B为序列表的序列2所示的单链DNA分子；
所述引物C为序列表的序列3所示的单链DNA分子；
所述引物D为序列表的序列4所示的单链DNA分子；
所述引物E为序列表的序列5所示的单链DNA分子；
所述引物F为序列表的序列6所示的单链DNA分子；
所述引物G为序列表的序列7所示的单链DNA分子；
所述引物H为序列表的序列8所示的单链DNA分子；
所述引物I为序列表的序列9所示的单链DNA分子；
所述引物J为序列表的序列10所示的单链DNA分子。


2.如权利要求1所述的引物组合，其特征在于：所述引物组合还包括引物对甲；
所述引物对甲由引物F和引物R组成；
所述引物F为序列表的序列11所示的单链DNA分子；
所述引物R为序列表的序列12所示的单链DNA分子。


3.权利要求1或2所述引物组合的应用，为如下(a1)-(a4)中的任一种：
(a1)检测β2-受体激动剂；
(a2)制备用于检测β2-受体激动剂的产品；
(a3)鉴定或辅助鉴定待测样本中是否含有β2-受体激动剂；
(a4)制备用于鉴定或辅助鉴定待测样本中是否含有β2-受体激动剂的产品。


4.含有权利要求1或2所述引物组合的产品，所述产品的用途为如下(b1)或(b2)：
(b1)检测β2-受体激动剂；
(b2)鉴定或辅助鉴定待测样本中是否含有β2-受体激动剂。


5.如权利要求4所述的产品，其特征在于：所述产品还包括miRNAcDNA第一链合成试剂盒和miRNA荧光定量检测试剂盒。


6.鉴定或辅助鉴定待测样本中是否含有β2-受体激动剂的方法，包括如下步骤：
(1)提取待测样本的miRNA，采用miRNAcDNA第一链合成试剂盒完成miRNAcDNA第一链的合成；
(2)以步骤(1)得到的miRNAcDNA第一链为模板，分别使用权利要求1中所述的10条引物和miRNA荧光定量检测试剂盒对模板进行荧光实时定量PCR检测，获得10个反应体系的△ct值，依次记为x1、x2、x3、x4、x5、x6、x7、x8、x9和x10；
所述x1为采用引物A和miRNA荧光定量检测试剂盒对模板进行荧光实时定量PCR检测得到的ct值与对照反应体系的Ct值的差值；
所述x2为采用引物B和miRNA荧光定量检测试剂盒对模板进行荧光实时定量PCR检测得到...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨曙明，赵璐瑶，王济世，薛佳俐，刘晓夏，刘瑞，刘倩，王彦云，赵汝婷，
申请(专利权)人：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11