一种PCR微卫星引物及其用于大黄鱼亲子鉴定的方法技术

本发明专利技术公开了一种PCR微卫星引物，包括引物位点1～10，引物位点的引物序列及退火温度。本发明专利技术还公开了一种PCR微卫星引物用于大黄鱼亲子鉴定的方法，首先，选择适宜的大黄鱼待测样品，提取大黄鱼待测样品的DNA；采用PCR微卫星引物位点1～10对大黄鱼待测样品的DNA进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；在体积百分数为12％的聚丙烯酰胺胶上对PCR扩增产物进行电泳分离；最后统计PCR微卫星引物位点1～10中PCR扩增产物的基因型；根据基因型进行大黄鱼待测样品之间的亲子鉴定。解决了现有的大黄鱼近亲交配、种群遗传多样性下降的问题。

【技术实现步骤摘要】
一种PCR微卫星引物及其用于大黄鱼亲子鉴定的方法
本专利技术涉及大黄鱼亲子鉴定
，具体涉及一种PCR微卫星引物，本专利技术还涉及上述PCR微卫星引物用于大黄鱼亲子鉴定的方法。
技术介绍
大黄鱼，体延长，侧扁，体长约40～50cm，金黄色，尾柄细长，鳞较小，背鳍起点至侧线间具8～9行鳞，椎骨25～27枚。平时栖息较深海区，4-6月向近海洄游产卵，秋冬季又向深海区迁移。大黄鱼的鳔能发声，渔民常借此估测鱼群的大小，是我国一种重要的经济鱼类。我国沿海大黄鱼的产卵场约10个，有江苏的吕泗洋，浙江的岱衢洋、大戢洋、猫头洋、大目洋及洞头洋，福建的官井洋、东引渔场，广东的南澳渔场和硇洲岛渔场。大黄鱼一生能多次重复产卵，生殖期中一般排卵2～3次。怀卵量与个体大小成正比，由10～275万粒不等，一般为20～50万粒。卵浮性，球形，卵径1.19～1.55毫米，卵膜光滑，有一无色油球，直径为0.35～0.46毫米。受精卵在水温18℃时约经50小时孵出仔鱼。各地方群的年龄组成不同，各群中个体的寿命、性成熟年龄也不相同。大黄鱼最大个体全长可达755毫米，重3.8千克。近年来，由于过度捕捞、水利工程建设等人类活动，大黄鱼的资源量急剧下降。从受威胁程度、遗传多样性、物种价值等方面进行定量评估来看，大黄鱼被列为低危鱼类。微卫星标记是目前研究濒危动物保护遗传学中最理想的一类方式。微卫星具有多态性高、共显性遗传、遍布整个基因组等优势，广泛应用于动物遗传性研究。亲子鉴定，是指运用生物学、遗传学以及有关学科的理论和技术，根据遗传性状在子代和亲代之间的遗传规律，判断被控的父母和子女之间是否亲生关系的鉴定。在大黄鱼遗传育种的研究过程中，苗种的来源比较杂乱，仅采用物理和形态进行个体比较很难区分不同的来源。传统方法是在对大黄鱼大规模的群体选育或家系选育时，会对大黄鱼个体打标进行区别，但是标容易脱落，造成大黄鱼个体混乱，在实施的过程中有很大的限制。为了明确大黄鱼在群体选育或家系选育时个体亲本的具体信息，急需一种有效的大黄鱼亲子鉴定方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种PCR微卫星引物，解决了现有的大黄鱼近亲交配、种群遗传多样性下降的问题。本专利技术的另一目的是提供上述PCR微卫星引物用于大黄鱼亲子鉴定的方法，解决了现有的大黄鱼近亲交配、种群遗传多样性下降的问题。本专利技术所采用的一种技术方案是一种PCR微卫星引物，包括引物位点1～10，引物位点的引物序列及退火温度如下所示：本专利技术所采用的另一种技术方案是上述一种PCR微卫星引物用于大黄鱼亲子鉴定的方法，具体按照以下步骤实施：步骤1，选择适宜的大黄鱼待测样品，提取大黄鱼待测样品的DNA；步骤2，采用PCR微卫星引物位点1～10对大黄鱼待测样品的DNA进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；步骤3，在体积百分数为12％的聚丙烯酰胺胶上对PCR扩增产物进行电泳分离；步骤4，统计PCR微卫星引物位点1～10中PCR扩增产物的基因型；根据基因型进行大黄鱼待测样品之间的亲子鉴定。本专利技术的特点还在于：PCR扩增的反应体系：总体积PCR反应体系25μL，10×PCRBuffer2.5μL，2.5mmol/LdNTP0.5μL，MgCl21.5μL，PCR反应体系的上下游引物各1μL，Taq酶0.4μL，DNA模板3μL，超纯水15.1μL。PCR扩增的程序为：95℃预变性3min；95℃变性30s，退火温度56℃复性30s，72℃延伸30s，进行30个循环；最后72℃延伸10min；4℃保存。步骤3中，聚丙烯酰胺胶为非变性聚丙烯酰胺胶。步骤4中，采用BIO-PROFIL软件进行基因型分型，采用CERVUS软件计算累计排除概率。本专利技术的有益效果是：(1)、本专利技术一种PCR微卫星引物用于大黄鱼亲子鉴定的方法，可以快速进行大黄鱼个体之间的亲子鉴定，继而确定个体之间的亲缘关系，避免了群体之间近亲繁殖；本专利技术提供的PCR微卫星引物和反应体系具有高度的多态性和稳定性，具有巨大的实用价值。(2)、本专利技术一种PCR微卫星引物，将其建立大黄鱼亲子鉴定技术，可以有效防止近亲交配，避免某些大黄鱼亲本过度繁殖所带来的种群遗传多样性下降的风险；本专利技术一种PCR微卫星引物使得大黄鱼资源量得以较快恢复与增殖，从而更好的保护大黄鱼。附图说明图1是本专利技术一种PCR微卫星引物筛选PCR扩增产物的电泳图。具体实施方式下面结合附图和具体实施方式对本专利技术进行详细说明。本专利技术提出了一种PCR微卫星引物，其特征在于，包括引物位点1～10，引物位点的引物序列及退火温度如下所示：本专利技术还提出了上述PCR微卫星引物用于大黄鱼亲子鉴定的方法，其特征在于，具体按照以下步骤实施：步骤1，选择适宜的大黄鱼待测样品，提取大黄鱼待测样品的DNA；步骤2，采用PCR微卫星引物位点1～10对大黄鱼待测样品的DNA进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；其中，PCR扩增的反应体系：总体积PCR反应体系25μL，，10×PCRBuffer2.5μL，2.5mmol/LdNTP0.5μL，MgCl21.5μL，PCR反应体系的上下游引物各1μL，Taq酶0.4μL，DNA模板3μL，超纯水15.1μL；PCR扩增的程序为：95℃预变性3min；95℃变性30s，退火温度56℃复性30s，72℃延伸30s，进行30个循环；最后72℃延伸10min；4℃保存；步骤3，在体积百分数为12％的聚丙烯酰胺胶上对PCR扩增产物进行电泳分离；聚丙烯酰胺胶为非变性聚丙烯酰胺胶；本专利技术一种PCR微卫星引物位点筛选PCR扩增产物的电泳图，如图1所示，从图1可以得出，PCR微卫星引物位点扩增出的基因型条带清晰，稳定性高，可以应用于大黄鱼的遗传多样性分析。步骤4，统计PCR微卫星引物位点1～10中PCR扩增产物的基因型；根据基因型进行大黄鱼待测样品之间的亲子鉴定；采用BIO-PROFIL软件进行基因型分型，采用CERVUS软件计算累计排除概率。实施例(1)大黄鱼待测样品的DNA提取具体按照以下步骤实施：步骤1、采集大黄鱼亲本鳍条样本2尾(雌雄各1尾，按1：1进行繁殖)及相应的子代个体样本10尾，剪取鳍条或其他组织样本5mg，经双蒸水洗涤后，用小剪刀充分剪碎，放入1.5mL离心管a中，加入500μL裂解液，在55℃下消化5～8h，在消化期间加入10μL蛋白酶k溶液；步骤2、将体积比为25:24:1的酚、氯仿和异戊醇混合均匀，得到混合液，在离心管a中加入500μL的混合液，采用静音混合仪将离心管a内的溶液混合均匀，再将离心管a装入离心机，以8000rpm离心10min，取上层液至离心管b中，弃滤液；步骤3、重复步骤2，2～3次，直至两相分界面处无明显的变性蛋白质；<本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种PCR微卫星引物，其特征在于，包括引物位点1～10，所述引物位点的引物序列及退火温度如下所示：/n

【技术特征摘要】
1.一种PCR微卫星引物，其特征在于，包括引物位点1～10，所述引物位点的引物序列及退火温度如下所示：








2.如权利要求1所述的一种PCR微卫星引物用于大黄鱼亲子鉴定的方法，其特征在于，具体按照以下步骤实施：
步骤1，选择适宜的大黄鱼待测样品，提取所述大黄鱼待测样品的DNA；
步骤2，采用所述PCR微卫星引物位点1～10对大黄鱼待测样品的DNA进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；
步骤3，在体积百分数为12％的聚丙烯酰胺胶上对所述PCR扩增产物进行电泳分离；
步骤4，统计PCR微卫星引物位点1～10中所述PCR扩增产物的基因型；根据所述基因型进行大黄鱼待测样品之间的亲子鉴定。


3.根据权利要求2所述的一种PCR微卫星引物用于大黄鱼亲子鉴定的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应体系：
总体积PCR反应体...

【专利技术属性】
技术研发人员：王俊，潘保柱，蒋小明，孙智薇，
申请(专利权)人：西安理工大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61