基于二代测序技术的检测120个基因座的试剂盒及其使用的引物组合制造技术

本发明专利技术公开了基于二代测序技术的检测120个基因座的试剂盒及其使用的引物组合。引物组合由230条引物组合，230条引物的核苷酸序列依次如SEQ ID NO：1—SEQ ID NO：230所示。本发明专利技术提供的试剂盒检测的120个基因座中扩增子长度大于300bp的仅为2.5％(3/120)，有利于降解检材的分析。实验证明，采用本发明专利技术提供的试剂盒检测标准品2800M中120个基因座的STR分型，分型结果准确。本发明专利技术具有重要的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
基于二代测序技术的检测120个基因座的试剂盒及其使用的引物组合
本专利技术属于法医学
，具体涉及基于二代测序技术的检测120个基因座的试剂盒及其使用的引物组合，尤其涉及基于二代测序技术的检测119个STR基因座和Amelogenin基因座的试剂盒及其使用的引物组合。
技术介绍
STR分型技术简单、快速，结果可靠、灵敏度高，且重复性好，是法医遗传学研究的主要工具。STR分型主要采用的技术手段是通过毛细管电泳检测进行基因分型，该技术通过检测同一基因型DNA分子的总荧光强度来实现该基因型的判读，一方面只能对基因型进行定性分析，无法对该基因型所占比例进行准确定量，另一方面会限制STR分型可检测的基因座数量。二代测序STR分型技术，信息含量更大、数据准确性更高，不仅能够获得STR的长度信息，还能获得完整的序列信息，发现更多相同长度片段中存在的序列不一致的等位基因，而且还可以一次性获得所有要检测的位点信息，避免多次毛细管电泳分型的操作失误，保证得到的分型结果来源于同一样本，缩短时间、节省成本的同时提高检测准确率。人类的Y染色体短串联重复(Y-chromosomeshorttandemrepeats，Y-STR)是指存在于Y染色体上非重组区的短串联重复片段。Y-STR具有男性特有、父系遗传及单倍型遗传等三大特征，被广泛用于男性家系排查、个体识别以及在群体遗传学研究中追溯父系群体的起源、迁徙和融合等。人类的X染色体短串联重复(X-chromosomeshorttandemrepeats，X-STR)是指存在于X染色体上非重组区的短串联重复片段。X-STR遗传特征既不同于常染色体，也不同于Y染色体，表现为性连锁特征，在父女关系、母子关系、隔代亲缘关系、乱伦等特殊亲缘关系鉴定案件中，具有独特价值，可以作为对常染色体STR、Y-STR的重要补充。因此，将常染色体STR与Y-STR、X-STR进行联合分型，可显著提升法医DNA检测的信息量。目前，二代测序STR分型产品应用最广泛、包含STR分型位点最多的两款试剂盒，分别为Illumina公司和ThermoFisher公司产品。首先，此二者价格非常高昂；其次，可获得信息具有局限性，只能获得这些产品中固有基因座的数据和分析，并且基因座数目比较少，特别X-STR基因座更少；再次，由于人种差异，这些产品并不完全适用于我国人群STR群体遗传多态性分析。我国已建立庞大的DNA数据库，故基于我国人群群体遗传学数据筛选基因座，研究和开发联合常染色体、Y染色体和X染色体中较多基因座的法医学二代测序STR分型试剂，具有十分重要的研究意义和应用价值。
技术实现思路
本专利技术的目的为制备适合我国人群STR群体遗传多态性分析的试剂盒。本专利技术首先保护引物组合，可包括引物1—引物230；引物1—引物230均为单链DNA分子，核苷酸序列依次可如SEQIDNO：1—SEQIDNO：230所示。所述引物组合具体可由引物1—引物230组成。上述任一所述的引物组合中，引物1—引物230的摩尔比具体可为0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.04：0.04：0.04：0.04：0.12：0.12：0.04：0.04：0.08：0.08：0.16：0.16：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.06：0.06：0.06：0.06：0.08：0.08：0.08：0.08：0.16：0.16：0.24：0.24：0.48：0.48：0.24：0.24：0.04：0.04：0.08：0.08：0.12：0.12：0.48：0.48：0.12：0.12：0.16：0.16：0.08：0.08：0.12：0.12：0.06：0.06：0.12：0.12：0.12：0.12：0.06：0.06：0.16：0.16：0.08：0.08：0.12：0.12：0.12：0.12：0.24：0.24：0.04：0.04：0.08：0.08：0.02：0.02：0.02：0.02：0.08：0.08：0.04：0.04：0.16：0.16：0.02：0.02：0.08：0.08：0.08：0.08：0.03：0.03：0.03：0.03：0.08：0.08：0.04：0.04：0.16：0.16：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.02：0.02：0.08：0.08：0.04：0.04：0.04：0.04：0.08：0.08：0.08：0.08：0.04：0.04：0.08：0.08：0.02：0.02：0.08：0.08：0.02：0.02：0.04：0.04：0.04：0.04：0.02：0.02：0.08：0.08：0.12：0.12：0.02：0.02：0.08：0.08：0.16：0.16：0.04：0.04：0.24：0.24：0.08：0.08：0.24：0.24：0.05：0.05：0.08：0.08：0.12：0.12：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.16：0.16：0.08：0.08：0.08：0.08：0.16：0.16：0.12：0.12：0.08：0.08：0.24：0.24：0.12：0.12：0.04：0.04：0.16：0.16：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.12：0.12：0.24：0.24：0.12：0.12：0.12：0.12：0.08：0.08：0.04：0.04：0.08：0.08：0.32：0.32：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08。上述任一所述的引物组合可用于扩增120个基因座。本专利技术还保护一种基于120个基因座的复合扩增体系，可包括上述任一所述引物组合。所述复合扩增体系可由上述任一所述引物组合组成。引物1—引物230在所述复合扩增体系中的浓度分别可为0.08μM、0.08μM、0.08μM、0.08μM、0.08μM、0.08μM、0.04μM、0.04μM、0.04μM、0.04μM、0.12μM、0.12μM、0.04μM、0.04μM、0.08μM、0.08μM、0.16μM、0.16μM、0.08μM、0.08μM、0.08μM、0.08μM、0.08μM、0.08μM、0.08μM、0.08μM、0.08μM、0.08μM、0.06μM、0.06μM、0.06μM、0.06μM、0.08μM、0.08μM、0.08μM、0.08μM、0.16μM、0.16μM、0.24μM、0.24μM、0.48μM、0.48μM、0.24μM、0.24μM、0.04μM、0.04μM、0.08μM、0.08μM、0.12μM、0.12μM、0.48μM、0.48μM、0.12μM、0.12μM、0.16μM、0.16μM、0.08μM、0.0本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.引物组合，包括引物1—引物230；引物1—引物230均为单链DNA分子，核苷酸序列依次如SEQ ID NO：1—SEQ ID NO：230所示。/n

【技术特征摘要】
1.引物组合，包括引物1—引物230；引物1—引物230均为单链DNA分子，核苷酸序列依次如SEQIDNO：1—SEQIDNO：230所示。


2.如权利要求1所述的引物组合，其特征在于：所述引物组合由引物1—引物230组成。


3.如权利要求1或2所述的引物组合，其特征在于：引物1—引物230的摩尔比为0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.04：0.04：0.04：0.04：0.12：0.12：0.04：0.04：0.08：0.08：0.16：0.16：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.06：0.06：0.06：0.06：0.08：0.08：0.08：0.08：0.16：0.16：0.24：0.24：0.48：0.48：0.24：0.24：0.04：0.04：0.08：0.08：0.12：0.12：0.48：0.48：0.12：0.12：0.16：0.16：0.08：0.08：0.12：0.12：0.06：0.06：0.12：0.12：0.12：0.12：0.06：0.06：0.16：0.16：0.08：0.08：0.12：0.12：0.12：0.12：0.24：0.24：0.04：0.04：0.08：0.08：0.02：0.02：0.02：0.02：0.08：0.08：0.04：0.04：0.16：0.16：0.02：0.02：0.08：0.08：0.08：0.08：0.03：0.03：0.03：0.03：0.08：0.08：0.04：0.04：0.16：0.16：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.02：0.02：0.08：0.08：0.04：0.04：0.04：0.04：0.08：0.08：0.08：0.08：0.04：0.04：0.08：0.08：0.02：0.02：0.08：0.08：0.02：0.02：0.04：0.04：0.04：0.04：0.02：0.02：0.08：0.08：0.12：0.12：0.02：0.02：0.08：0.08：0.16：0.16：0.04：0.04：0.24：0.24：0.08：0.08：0.24：0.24：0.05：0.05：0.08：0.08：0.12：0.12：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.16：0.16：0.08：0.08：0.08：0.08：0.16：0.16：0.12：0.12：0.08：0.08：0.24：0.24：0.12：0.12：0.04：0.04：0.16：0.16：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.12：0.12：0.24：0.24：0.12：0.12：0.12：0.12：0.08：0.08：0.04：0.04：0.08：0.08：0.32：0.32：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08：0.08。


4.一种基于120个基因座的复合扩增体系，包括权利要求1至3任一所述引物组合；所述120个基因座由Amelogenin、CSF1PO、FGA、TH01、TPOX、VWA、PentaD、PentaE、D2S1338、D3S1358、D5S818、D6S1043、D7S820、D8S1179、D12S391、D13S317、D16S539、D18S51、D19S433、D21S11、DYS19、DYS385a/b、DYS389-I、DYS389-II、DYS390、DYS391、DYS392、DYS393、DYS437、DYS438、DYS439、DYS448、DYS456、DYS458、DYS481、DYS533、DYS576、DYS635、Y-GATA-H4、D1S1627、D1S1677、D2S1360、D2S1776、D2S441、D3S1744、D3S3045、D3S3053、D3S4529、D4S2364、D4S2366、D5S2500、D5S2800、D6S474、D6S477、D7S3048、D8S1132、D9S2157、D9S1122、D10S1248、D10S1435、D10S2325、D11S4463、D12ATA63、D13S325、D14S1434、D14S608、D15S659、D17S1301、D17S974、D18S1364、D18S535、D18S853、D19S253、D20S1082、D20S470、D20S482、D21S1270、D21S2055、D22S1045、D22GATA198B05、DYS388、DYS399S1、DYS404S1a/b、DYS504、DYS505、DYS508、DYS520、DYS531、DYS549、DYS552、DYS557、DYS570、DYS593、DYS596、DYS622、DYS641、DYS643、DYS645、DXS10079、DXS10103、DXS6789、DXS6799、DXS6800、DXS6801、DXS6804、DXS6809、DXS7130、DXS7132、DXS7423、DXS7424、DXS981、DXS9895、...

【专利技术属性】
技术研发人员：王乐，郭立亮，康克莱，张驰，季安全，叶健，
申请(专利权)人：公安部物证鉴定中心，
类型：发明
国别省市：北京;11