一种鸡“鹿角”冠相关的分子标记及其分型方法和应用技术

本发明专利技术属于生物技术领域，涉及一种鸡“鹿角”冠相关的分子标记及其分型方法和应用。所述“鹿角”冠相关的分子标记分型方法是通过抽提样本血液DNA样本后对其进行多重PCR扩增，PCR产物纯化后进行延伸反应，将产物进行测序对变异位点进行分型，然后淘汰杂合子个体。本发明专利技术可用于育种中对“鹿角”冠性状的提纯以及应用于培育具有“鹿角”冠性状的新品系以及新的配套系。

【技术实现步骤摘要】
一种鸡“鹿角”冠相关的分子标记及其分型方法和应用
本专利技术属于生物
，涉及一种鸡“鹿角”冠相关的分子标记及其分型方法和应用。
技术介绍
因为外貌特征往往是品种的标志性性状，所以外貌选育在鸡育种和保种中尤为重要，外貌特征也是普通消费者辨别品种尤其是地方品种的重要依据。鸡冠形状就是一些品种的标志特征之一，就像玫瑰冠是我国泰和丝羽乌骨鸡的重要特征、毛冠是北京油鸡的重要特征、双冠是贵妃鸡的重要外貌特征一样，鹿角冠(冠尾分叉，且部分具有冠齿，形似鹿角)则是我国河田鸡和象洞鸡的主要特征。相对于单冠，鹿角冠呈现常染色体显性遗传。在动物的育种生产中，单基因性状的选择提纯有三种方案：①表型直接选淘，逐渐降低群体中相关的隐性等位基因的频率；②测交剔除掉隐性等位基因。③分子标记辅助选择，直接剔除相应的等位基因。其中方案“①”通过表型的直接选淘需要多个世代，而且隐性等位基因会一直存在群体中，无法完全剔除掉隐性等位基因。方案“②”理论上可以经过一个世代剔除掉相关的隐性等位基因，但是实际的操作过程中由于过程繁琐很容易出现差错。方案“③”具有快速，过程简单的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鸡“鹿角”冠相关的分子标记，其特征在于，所述分子标记为具有SEQ.No.4所示和/或SEQ.No.5所示的基因序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种鸡“鹿角”冠相关的分子标记，其特征在于，所述分子标记为具有SEQ.No.4所示和/或SEQ.No.5所示的基因序列。


2.一种如1所述的鸡“鹿角”冠相关的分子标记的分型方法，其特征在于，通过抽提样本血液DNA样本后对其进行多重PCR扩增，PCR产物纯化后进行延伸反应，将产物进行测序对变异位点进行分型，然后淘汰杂合子个体，其中变异位点为扩增片段的第44位核苷酸，野生型等位基因序列如SEQ.No.4所示；突变基因序列如SEQ.No.5所示。


3.根据权利要求2所述的鸡“鹿角”冠相关的分子标记的分型方法，其特征在于，其具体包括如下步骤：
步骤1：样本DNA抽提：根据采用苯酚-氯仿抽提法提取样本血液DNA；
步骤2：目的位点分型：
(1)多重PCR扩增：正向引物和反向引物混合得到混合引物；向其中加入样本血液DNA、核苷酸后用水定容配制PCR体系，按照95℃3min；94℃15s，55℃15s，35循环；72℃30s；72℃3min的扩增条件进行扩增反应，得到PCR产物；
(2)PCR产物纯化：使用ExoI，FastAP和ExoIbuffer对PCR产物进行纯化；
(3)延伸反应：将纯化后的PCR产物加入SnapshotMix试剂、延伸引物并用水定容，按照96℃1min；96℃10s，52℃5s，30循环；60℃30s的扩增条件进行延伸反应，得到延伸产物；
(4)测序分型：将延伸产物变性后上测序仪测序，根据目的位点的核苷酸淘汰杂合子个体。


4.根据权利要求3所述的鸡“鹿角”冠相关的分子标记的分型方法，其特征在于，其具体包括如下步骤：
步骤1：样本DNA抽提：根据采用苯酚-氯仿抽提法提取样本血液DNA；
步骤2：目的位点分型
(1)多重PCR扩增
将正向引物和反向引物分别用1*TE溶解至浓度为10pmol，将正向引物和反向引物混匀后离心得到混合引物；按照如下体积配比配制PCR体系：DNA1-2μL，2*PCRmix7.5μL，混合引物2μL，加入H2O补至15μL，将PCR体系转移至96微孔板进行PCR反应，按照95℃3min；94℃15s，55℃15s，35循环；72℃30s；72℃3min的扩增条件进行扩增反应，得到PCR产物；
(2)PCR产物纯化
取3μLPCR产物，向其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：许继国，罗威，聂庆华，张细权，饶友生，
申请(专利权)人：华南农业大学，南昌师范学院，
类型：发明
国别省市：广东;44