精子特异miRNAs在辅助生殖体外受精诊断中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种精子特异miRNAs在制备辅助生殖体外受精的诊断试剂或诊断试剂盒中的应用，所述精子特异miRNAs为hsa‑miR‑191‑5p、hsa‑miR‑499a‑5p、hsa‑miR‑132‑3p或hsa‑miR‑29a‑3p中的一种或几种。本发明专利技术还公开了一种精子特异miRNAs在制备用于预测或评估辅助生殖体外受精过程中精子生育力的分子标志物的应用。本发明专利技术的精子特异miRNAs可以作为精子特异性的分子标志物、辅助生殖体外受精的诊断试剂或诊断试剂盒等，以用于预测精子生育力，从而为辅助生殖体外受精中的男性不育治疗以及临床诊断提供可靠的科学依据与个性化治疗的思路。

【技术实现步骤摘要】
精子特异miRNAs在辅助生殖体外受精诊断中的应用
本专利技术属于生物
，具体地说，是关于一种精子特异miRNAs在辅助生殖体外受精诊断中的应用。
技术介绍
microRNAs(miRNAs)是一类小的、单链非编码小RNA(smallnoncodingRNAs,sncRNAs)，长度为20-23nt，可以通过与靶mRNA的3’UTR的不完全配对，在转录后水平介导基因沉默，从而实现翻译抑制或是靶mRNAs的降解。目前，miRNAs是研究较多的一类sncRNAs，许多研究证实miRNAs可以作为精子质量预测及诊断的潜在生物标志物。在非梗阻性无精子症(NOA,non-obstructiveazoospermia)患者睾丸内miRNAs的表达发生改变，意味着miRNAs可在精子发生过程中发挥作用。对少弱精症患者精子进行microarray检测，发现许多miRNAs的表达发生变化，进一步的生物信息学分析表明，它们可能参与精子发生过程。此外，还有研究发现，在无精症患者精浆内，有3个miRNAs(miR-141,miR-429,miR-7-1-3p)的表达发生变化，它们可能参与NOA相关的甲基化-miRNA-基因调控网络。这些结果表明，miRNAs在雄性生殖系统中发挥重要作用，但其目前尚未有miRNA对正常精子的评估及预测。现有对辅助生殖体外受精(invitrofertilization，IVF)过程中精子生育力预测的技术手段和方法，主要集中在检测精液参数、精液ROS值、精子DNA碎片率等。但是，现有的方法仅检测精子相关参数，没有和胚胎质量相关联，无法全面、真实、准确地评估精子生育力。因此现有的方法仅对精子质量做出判断，但对精子的生育力评价不足，临床上IVF的成功率仅为30％左右，成本高(在生殖中心进行一次IVF花费约在3万人民币左右)等。
技术实现思路
本专利技术选取IVF病人中正常男性精液样本87例，通过对精液样本进行优化以及精液质量检测，选取符合标准的正常精子样本，根据其对应优质胚胎率(goodqualityembryo，GQE)情况，分为H-GQE((GQE≥75％，high，H-GQE，n＝23；GQE≤25％，low，L-GQE，n＝64)，然后进行精子RNA提取，最后对通过小RNA高通量测序方法检测miRNAs表达水平。通过小RNA高通量测序后，共检测到389个miRNAs，并分析两组表达差异后，共得到4个差异表达miRNAs。最后通过数据分发现，这4个miRNAs对87例样本的区分效率可以达到71.54％。因此，本专利技术的首要目的是提供精子特异miRNAs在制备辅助生殖体外受精的诊断试剂中的应用。本专利技术的第二个目的是提供精子特异miRNAs在制备辅助生殖体外受精的诊断试剂盒中的应用。本专利技术的第三个目的是提供精子特异miRNAs在制备用于预测或评估辅助生殖体外受精过程中精子生育力的分子标志物的应用。为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：作为本专利技术的第一个方面，精子特异miRNAs在制备辅助生殖体外受精的诊断试剂中的应用，所述精子特异miRNAs为hsa-miR-191-5p、hsa-miR-499a-5p、hsa-miR-132-3p或hsa-miR-29a-3p中的一种或几种。根据本专利技术，所述诊断试剂为检测生物样品中hsa-miR-191-5p、hsa-miR-499a-5p、hsa-miR-132-3p和/或hsa-miR-29a-3p在低优质胚胎率中的特异性低表达或特异性高表达情况。作为本专利技术的第二个方面，精子特异miRNAs在制备辅助生殖体外受精的诊断试剂盒中的应用，所述精子特异miRNAs为hsa-miR-191-5p、hsa-miR-499a-5p、hsa-miR-132-3p或hsa-miR-29a-3p中的一种或几种。根据本专利技术，所述诊断试剂盒包含了检测生物样品中hsa-miR-191-5p、hsa-miR-499a-5p、hsa-miR-132-3p和/或hsa-miR-29a-3p在低优质胚胎率中的特异性低表达或特异性高表达的试剂。作为本专利技术的第三个方面，精子特异miRNAs在制备用于预测或评估辅助生殖体外受精过程中精子生育力的分子标志物的应用，所述精子特异miRNAs为hsa-miR-191-5p、hsa-miR-499a-5p、hsa-miR-132-3p或hsa-miR-29a-3p中的一种或几种。本专利技术的有益效果是：hsa-miR-191-5p、hsa-miR-499a-5p、hsa-miR-132-3p或hsa-miR-29a-3p可以作为精子特异性的分子标志物用于预测精子生育力，从而为IVF中的男性不育治疗以及临床诊断提供可靠的科学依据与个性化治疗的思路，具体体现在：1、由于精子特异miRNAs可以在L-GQE中特异性低表达或特异性高表达，因此可以通过制备辅助生殖体外受精的监测试剂、诊断试剂或者制备用于预测或评估辅助生殖体外受精过程中精子生育力的分子标志物，结合高通量测序的方法进行检测，其检测结果更为真实、全面、可靠；2、精子特异miRNAs作为制备辅助生殖体外受精的监测试剂、诊断试剂或者制备用于预测或评估辅助生殖体外受精过程中精子生育力的分子标志物，可以检测精子中的miRNA表达水平，从胚胎质量的角度对精子的生育力进行预测，而不仅仅是精子质量，患者获得高优质胚胎率的可能性可以达到71.54％，因此采用上述的监测试剂、诊断试剂或者分子标志物可以及早地发现潜在的男性不育靶点，并进行个性化的干预和治疗，并最终提高IVF的生育结局；3、精子特异miRNAs作为制备辅助生殖体外受精的监测试剂、诊断试剂或者制备用于预测或评估辅助生殖体外受精过程中精子生育力的分子标志物，可以在IVF治疗开始时，即对精子样本进行检测，并可进行相应的个性化的治疗与干预，可降低患者诊疗成本。附图说明图1为实施例1的操作流程图。图2为实施例1的miRNAs高通量测序结果图。图3为实施例1的特异性表达miRNAs高通量测序的结果图。图4为4个miRNAs对87例样本的区分效率的示意图，其中横坐标TPR为truepositiverate，真正确率；纵坐标FPR为falsepositiverate，假正确率。具体实施方式以下结合具体实施例，对本专利技术作进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本专利技术而非用于限定本专利技术的范围。为了便于研究精子miRNAs作为精子特异性分子标志物，本实施例选取接受IVF治疗的正常精子样本，根据其对应的优质胚胎率(GQE率)将其分为高GQE(≥75％；highrateofGQE,H-GQE)组与低GQE组(≤25％；lowrateofGQE,L-GQE)，分析miRNAs变化与优质胚胎率之间的关系，寻找可以作为男性不育检测指标的miRNAs。实施例1本实施例的操作流程图如图1所示。1、样本入组情况本实施例本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.精子特异miRNAs在制备辅助生殖体外受精的诊断试剂中的应用，所述精子特异miRNAs为hsa-miR-191-5p、hsa-miR-499a-5p、hsa-miR-132-3p或hsa-miR-29a-3p中的一种或几种。/n

【技术特征摘要】
1.精子特异miRNAs在制备辅助生殖体外受精的诊断试剂中的应用，所述精子特异miRNAs为hsa-miR-191-5p、hsa-miR-499a-5p、hsa-miR-132-3p或hsa-miR-29a-3p中的一种或几种。


2.如权利要求1所述的精子特异miRNAs在制备辅助生殖体外受精的诊断试剂中的应用，其特征在于，所述诊断试剂为检测生物样品中hsa-miR-191-5p、hsa-miR-499a-5p、hsa-miR-132-3p和/或hsa-miR-29a-3p在低优质胚胎率中的特异性低表达或特异性高表达情况。


3.精子特异miRNAs在制备辅助生殖体外受精的诊断试剂盒中的应用，所述精子特异miRNAs为hsa-miR-191-5p、hsa-m...

【专利技术属性】
技术研发人员：施惠娟，吴立刚，刘伟，华敏敏，
申请(专利权)人：上海市计划生育科学研究所，中国科学院上海生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：上海;31