一种酶法生产左旋多巴的转化及提取方法技术

本发明专利技术提供一种酶法生产左旋多巴的转化及提取方法，该方法按如下步骤进行：1.酪氨酸酚裂解酶的制备：发酵液离心收集大肠杆菌，用磷酸盐缓冲液重悬菌体后通过高压均质机进行破壁处理；将破壁液过陶瓷膜，除去菌体碎片，收集滤液；将滤液过超滤膜，除去胞内小分子杂质，收集截留液；将截留液经脱色树脂处理，收集流出液，获得酪氨酸酚裂解酶。2.酶转化生产左旋多巴：按照3000‑10000U/L向反应体系中加入酪氨酸酚裂解酶，加入反应底料，并在转化过程中分批次补加邻苯二酚、丙酮酸钠和氯化铵，转化液中左旋多巴的产量为120‑150g/L。3.左旋多巴的提取：将转化液调整pH至3‑4，4‑8℃静置8‑16h；离心收集沉淀，用5‑10倍体积的纯水打浆后抽滤，重复此步骤2‑5次；抽干后用乙醇淋洗晶体1‑5次，抽滤至干；晶体置于40‑80℃干燥1‑4h，获得左旋多巴产品。左旋多巴含量达到98%以上，总收率达到80%以上。

【技术实现步骤摘要】
一种酶法生产左旋多巴的转化及提取方法
本专利技术涉及生物工程
，尤其是一种利用酪氨酸酚裂解酶转化生产左旋多巴的转化及提取方法。
技术介绍
左旋多巴（L-DOPA）又名3,4-二羟基苯丙氨酸，可以通过血脑屏障，在中枢神经脱羧酶的作用下转化为多巴胺，从而使脑组织中多巴胺含量增加以达到治疗帕金森综合征的目的。1970年，被美国食品药品监督管理局（FDA）批准为治疗帕金森综合征的药物。迄今为止，左旋多巴在国内外一直是治疗帕金森综合征的首选和最有效的药物。上世纪60年代，国外许多学者开始致力于微生物酶法合成L-DOPA的研究，与植物提取法和化学合成法相比，酶法转化生产左旋多巴是一种反应条件温和、对环境友好的制备方法。通过微生物发酵制备酪氨酸酚裂解酶（TPL），TPL可催化邻苯二酚、丙酮酸钠和氯化铵生成左旋多巴，转化过程一般采用全细胞、游离酶或固定化酶，转化液大多经过调节至强酸后固液分离、活性炭脱色、多次酸碱法重结晶等步骤获得到左旋多巴产品。酪氨酸酚裂解酶法制备左旋多巴，主要面临过量的邻苯二酚抑制TPL酶活力、转化过程中左旋多巴易被氧本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种酶法生产左旋多巴的转化及提取方法，其特征在于该方法所述的酪氨酸酚裂解酶的制备按如下步骤进行：/na.破壁：发酵液离心收集大肠杆菌，用发酵液体积10-20%的0.2M的磷酸缓冲液（pH7.2）重悬菌体，通过高压均质机进行破壁处理；/nb.微滤：将a步骤获得的破壁液过陶瓷膜，陶瓷膜孔径为50-200nm，收集滤液；/nc.超滤：将滤液过超滤膜，超滤膜截留分子量为100-150KD，收集截留液；/nd.脱色：将c步骤获取的截留液经脱色树脂处理，流速为0.5-5BV，控制流出液T

【技术特征摘要】
1.一种酶法生产左旋多巴的转化及提取方法，其特征在于该方法所述的酪氨酸酚裂解酶的制备按如下步骤进行：
a.破壁：发酵液离心收集大肠杆菌，用发酵液体积10-20%的0.2M的磷酸缓冲液（pH7.2）重悬菌体，通过高压均质机进行破壁处理；
b.微滤：将a步骤获得的破壁液过陶瓷膜，陶瓷膜孔径为50-200nm，收集滤液；
c.超滤：将滤液过超滤膜，超滤膜截留分子量为100-150KD，收集截留液；
d.脱色：将c步骤获取的截留液经脱色树脂处理，流速为0.5-5BV，控制流出液T450大于95%，收集流出液，获得酪氨酸酚裂解酶。


2.根据权利要求1所述的酪氨酸酚裂解酶的制备，其特征在于a步骤所述的高压均质机破壁压力为500-1000bar，处理时间为10-40min。


3.根据权利要求1所述的酪氨酸酚裂解酶的制备，其特征在于c步骤所述的脱色树脂为离子交换型脱色树脂、大孔吸附型脱色树脂中的一种或者两种的树脂的混合。


4.一种酶法生产左旋多巴的转化及提取方法，其特征在于该方法所述的酶转化生产左旋多巴按照如下步骤进行：在反应体系中加入底料，按照3000-10000U/L加入酪氨酸酚裂解酶；每10-40min，每升转化液补加邻苯二酚1-5g、丙酮酸钠1-5g；每2-4h，每升转化液补加氯化铵5-30g；整个转化过程中通小量氮气保持正压，全...

【专利技术属性】
技术研发人员：任明，刘建民，孙荣，张雷，
申请(专利权)人：山东惠仕莱生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37