一种混菌发酵生产β-丙氨酸的方法技术

本发明专利技术公开了一种混菌发酵生产β‑丙氨酸的方法。该方法包括以下步骤：构建重组菌株E.coli BL‑pET28a‑aspC；构建E.coli BL‑pET28a‑panD葡萄糖代谢缺陷型菌株；选取重组菌株E.coli BL‑pET28a‑aspC和E.coli BL‑pET28a‑panD加入发酵培养基中，以葡萄糖和甘油为碳源生产β‑丙氨酸。与现有技术相比，本发明专利技术通过将aspC和panD分开表达在两个细胞中，利用混菌发酵的方式，降低了生产成本，相比于利用E.coli BL‑pET28a‑panD单一发酵生产，β‑丙氨酸的摩尔收率提高了40%。

【技术实现步骤摘要】
一种混菌发酵生产β-丙氨酸的方法
本专利技术涉及β-丙氨酸制备
，具体涉及一种混菌发酵生产β-丙氨酸的方法。
技术介绍
β-丙氨酸是唯一一种天然β型氨基酸，无毒、略具有甜味。常温下，比较稳定，但是加热易分解。β-丙氨酸暴露在空气中时，易吸潮，因此需要干燥密封储存。它能与水混溶，微溶于乙醇，不溶于乙醚和丙酮。在生物体中，有着很重要的生理功能，并且是泛酸合成过程中不可或缺的媒介。近年来，β-丙氨酸在医药、化工、美容、食品、环境等方面都有着很广泛的用途，有报道称β-丙氨酸是未来全球12种最具潜力的三碳化工产品之一。主要有以下作用：(1)β-丙氨酸用于合成维生素B5，维生素B5是合成乙酰辅酶A与酰基载体蛋白的重要中间体。它是由D-泛酸和β-丙氨酸通过缩合反应合成的，此反应是由泛酸合成酶进行调控，泛酸合成酶也是乙酰辅酶A的主要组成部分。维生素B5的主要功能是：辅助细胞的形成，维持中枢神经系统的正常发育；参与抗体的合成。由于泛酸不稳定，所以其主要以D-泛酸钙、D-泛酸钠两种形式存在，其中D-泛酸钙的应用最广。目前全球对D-泛酸钙的年需求量为8本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种混菌发酵生产β-丙氨酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n步骤1，构建重组菌株E.coli BL-pET28a-aspC；/n步骤2，构建E.coli BL-pET28a-panD葡萄糖代谢缺陷型菌株；/n步骤3，选取重组菌株E.coli BL-pET28a-aspC和E.coli BL-pET28a-panD加入发酵培养基中，以葡萄糖和甘油为碳源，培养至OD约为0.6时用IPTG诱导，继续培养生产β-丙氨酸。/n

【技术特征摘要】
1.一种混菌发酵生产β-丙氨酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1，构建重组菌株E.coliBL-pET28a-aspC；
步骤2，构建E.coliBL-pET28a-panD葡萄糖代谢缺陷型菌株；
步骤3，选取重组菌株E.coliBL-pET28a-aspC和E.coliBL-pET28a-panD加入发酵培养基中，以葡萄糖和甘油为碳源，培养至OD约为0.6时用IPTG诱导，继续培养生产β-丙氨酸。


2.根据权利要求1所述的一种混菌发酵生产β-丙氨酸的方法，其特征在于，步骤1中E.coliBL-pET28a-aspC构建方法为：选取第一引物，通过PCR复制大肠杆菌MG1655上的天冬氨酸酶，再与载体pET28a连接，并转入克隆载体Trans1-T1，经过LB平板初筛后，挑点进行菌落PCR验证后测序。


3.根据权利要求1所述的一种混菌发酵生产β-丙氨酸的方法，其特征在于，步骤2中E.coliBL-pET28a-panD葡萄糖代谢缺陷型菌株构建方法为：第一步，选取第二引物，通过PCR复制C...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈可泉，许晟，冯娇，王昕，
申请(专利权)人：南京凯诺生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32