一种海鲈仔鱼细胞系的构建方法技术

本发明专利技术提供了一种海鲈仔鱼细胞系的构建方法，包括以下步骤：(1)原代培养：将海鲈仔鱼组织进行胰酶消化获得细胞悬浮液，加入原代细胞培养液培养原代细胞；(2)传代培养：传代1‑10代时，传代细胞培养液中的胎牛血清浓度为20％；传代11‑20代时，传代细胞培养液中的胎牛血清浓度为15％；传代20代以后，传代细胞培养液中的胎牛血清浓度为10％；(3)收集传代细胞，获得所述海鲈仔鱼细胞系。通过本发明专利技术的构建方法获得的海鲈仔鱼细胞系生长状态良好，细胞增殖稳定不仅可以连续传代，并可超低温冻存和复苏，可用于外源基因表达以及病毒感染分离等研究。

【技术实现步骤摘要】
一种海鲈仔鱼细胞系的构建方法
本专利技术属于海水鱼类细胞培养
，具体涉及利用海鲈仔鱼构建海鲈仔鱼细胞系的方法。
技术介绍
海鲈属于鲈形目、海鲈属，为肉食性鱼类。海鲈为广盐、广温性鱼类，通常生活在河口地区，也有直接进入淡水湖泊。目前，我国海鲈年产量约25万吨，主要集中产地在广州珠三角斗门地区，成为广东省珠海市斗门区海水养殖的一项支柱产业。然而，随着海鲈养殖规模的扩大、集约化程度提高及养殖环境恶化等问题，由细菌性、病毒性或寄生虫等病原引起的疾病日益频繁爆发，病害问题已经逐渐成为制约海鲈养殖产业健康发展的主要瓶颈。虹彩病毒是海鲈病毒性疾病的主要病原之一，研究病毒感染致病机理、病毒与宿主细胞相互作用将为阐明病原特性提供重要的理论信息，而研制高效的疫苗是从根本上预防和解决海鲈病毒性疾病的有效途径。鱼类细胞系作为一种体外培养系统，最初主要应用于病毒的分离鉴定、病毒纯化及病毒疫苗的制备。但因其重复性好，条件可控等诸多优点，随着生物技术的发展及交叉学科的相互渗透，鱼类细胞系的应用也日趋广泛，逐渐广泛应用于鱼类病毒分子生物学、免疫学、毒理学、遗传发本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种海鲈仔鱼细胞系的构建方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：/n(1)原代培养：将海鲈仔鱼组织进行胰酶消化获得细胞悬浮液，加入原代细胞培养液培养原代细胞；/n(2)传代培养：传代1-10代时，传代细胞培养液中的胎牛血清浓度为20％；传代11-20代时，传代细胞培养液中的胎牛血清浓度为15％；传代20代以后，传代细胞培养液中的胎牛血清浓度为10％；/n(3)收集传代细胞，获得所述海鲈仔鱼细胞系。/n

【技术特征摘要】
1.一种海鲈仔鱼细胞系的构建方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)原代培养：将海鲈仔鱼组织进行胰酶消化获得细胞悬浮液，加入原代细胞培养液培养原代细胞；
(2)传代培养：传代1-10代时，传代细胞培养液中的胎牛血清浓度为20％；传代11-20代时，传代细胞培养液中的胎牛血清浓度为15％；传代20代以后，传代细胞培养液中的胎牛血清浓度为10％；
(3)收集传代细胞，获得所述海鲈仔鱼细胞系。


2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述海鲈仔鱼选自孵化3-4天的海鲈仔鱼。


3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述原代细胞培养液和传代细胞培养液采用的基础培养基均为L-15培养基。


4.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述原代培养包括以下步骤：将海鲈仔鱼组织经胰酶消化获得的细胞悬浮液，离心，收集沉淀，加入原代细胞培养液重悬沉淀，移入培养瓶中，28℃培养，每隔2-3天按半量换液方式更换培养液，10天后开始传代培养。


5.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述传代1-10代时，传代细胞培养液的配方为：基...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄友华，黄晓红，秦启伟，魏京广，周胜，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东;44