内胚层干细胞规模化制备功能性肝母细胞与肝实质细胞的方法及其应用技术

本发明专利技术提供了内胚层干细胞规模化制备功能性肝母细胞与肝实质细胞的方法及其应用，具体地，本发明专利技术提供了一种诱导人类内胚层干细胞分化为肝母细胞和/或肝实质细胞的方法，包括步骤：在第一培养基、第二培养基、第三培养基的存在下，在培养体系中培养内胚层干细胞，从而获得功能性的肝母细胞和/或肝实质细胞。本发明专利技术的功能性的肝母细胞和/或肝实质细胞具有非常高的分化率和纯度，并且，本发明专利技术的肝实质细胞还具有有效的治疗肝脏相关疾病的作用。

【技术实现步骤摘要】
内胚层干细胞规模化制备功能性肝母细胞与肝实质细胞的方法及其应用
本专利技术涉及生物技术和细胞治疗领域。具体地，本专利技术涉及内胚层干细胞规模化制备功能性肝母细胞与肝实质细胞的方法及其应用。
技术介绍
肝脏是人体内的最大分泌腺体，其同时具有内分泌和外分泌功能。内分泌功能主要为分泌多种激素如胰岛素样生长因子、血管紧张肽原、促血小板生成素。与之对应的外分泌功能则为胆汁的合成。肝实质细胞以胆固醇为原料，经多个步骤合成初级胆汁酸，其中关键酶为胆固醇7α-羟化酶。将胆固醇转化为胆汁酸，这是肝脏清除胆固醇的主要方式。此外，肝脏在人体内的重要作用还表现在：(1)糖原储存，肝脏将血液中多余的葡萄糖以肝糖原的形式储存，为机体大量耗能之时提供能量；(2)药物代谢及解毒功能，肝脏内药物代谢及解毒酶类分为①药物代谢一相酶，其主要家族为CYP450超家族，其参与外源及内源有机物质的氧化作用；②药物代谢二相酶，其主要是以一相酶反应产物为底物进行结合反应的催化酶类；③药物代谢三相酶，其主要作用为将肝脏细胞内代谢有毒物质转出肝脏；(3)调节胆固醇的合成和转运；(4)尿素本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种诱导人类内胚层干细胞分化为肝母细胞和/或肝实质细胞的方法，其特征在于，包括步骤：/n(a)在第一培养条件下，在培养体系中培养内胚层干细胞，从而获得经肝脏特化的肝向内胚层(Hepatic Endoderm)细胞；其中，所述培养体系包括bFGF、VEGF、EGF、和BMP4因子；/n(b)在适合培养的条件下，在培养体系中培养步骤(a)获得的肝向内胚层(HepaticEndoderm)细胞，从而获得肝母细胞；和/n(c)在第二培养条件下，在培养体系中培养步骤(b)获得的肝母细胞，从而获得肝实质细胞；其中，所述培养体系包括HGF、OSM、Dex、Compound E、和/或A83。/n

【技术特征摘要】
1.一种诱导人类内胚层干细胞分化为肝母细胞和/或肝实质细胞的方法，其特征在于，包括步骤：
(a)在第一培养条件下，在培养体系中培养内胚层干细胞，从而获得经肝脏特化的肝向内胚层(HepaticEndoderm)细胞；其中，所述培养体系包括bFGF、VEGF、EGF、和BMP4因子；
(b)在适合培养的条件下，在培养体系中培养步骤(a)获得的肝向内胚层(HepaticEndoderm)细胞，从而获得肝母细胞；和
(c)在第二培养条件下，在培养体系中培养步骤(b)获得的肝母细胞，从而获得肝实质细胞；其中，所述培养体系包括HGF、OSM、Dex、CompoundE、和/或A83。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(b)中，所述培养体系为含有第二培养基和添加物的培养液，所述添加物包括bFGF、VEGF、EGF、HGF、OSM、和Dex因子。


3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(a)－(c)中，所述培养体系中还含有促进分化的其他物质，选自下组：基质胶(Matrigel)、层粘连蛋白(Laminin)、基底膜提取物(BasementMembraneExtracts)、或其组合。


4.一种肝母细胞，其特征在于，所述肝母细胞为封闭的具有中空结构的单层细胞球囊，其中，所述肝母细胞的球囊直径大小300－500μm，球囊表面肝母细胞大小60-80μm，细胞层厚度6－12μm。


5.一种肝实质细胞，其特征在于，所述肝实质细胞为封闭的具...

【专利技术属性】
技术研发人员：程新，冯思思，吴佳颖，邓小刚，
申请(专利权)人：中国科学院分子细胞科学卓越创新中心，
类型：发明
国别省市：上海;31