一种用于模拟肝癌环境的脱细胞化支架模板制造技术

本发明专利技术公开了一种用于模拟肝癌环境的脱细胞化支架模板，其是先将新鲜动物肝脏切片经过脱细胞化，以保持原有的网状结构与肌原蛋白，然后将肝细胞LO2和肝癌细胞HepG2共同种植于肝脏脱细胞化支架（DECM）模板上，以模拟肝脏肿瘤病变的实际体内环境。本发明专利技术所得脱细胞化支架模板安全无毒、生物相容性好、价格低廉，便于操作，在其体系中引入待测试的磁性靶向药物载体，可精确地模拟药物在体内对肝癌的治疗，减少实验动物的过度使用并有效降低科研成本。

【技术实现步骤摘要】
一种用于模拟肝癌环境的脱细胞化支架模板
本专利技术属于生物材料制备和生物医学应用领域，具体涉及一种用于模拟肝癌环境的脱细胞化支架模板，其可用于肝癌药物靶向治疗的研究。
技术介绍
成熟的纳米载药体系在面对测试其治疗效果时，通常需要进行动物实验（LiY，J.Z.etal.ACSAppliedMaterials&Interfaces，2017，9(41)：35604-35612）。此类实验研究会对动物造成巨大的伤害，剥夺了动物的生存权利，因此涉及动物实验的科研伦理和道德一直被社会各界广泛关注。更有甚者，一些激进的动物权利保护者更是要求全面停止动物实验，这将对医学、生物等学科的科研活动带来极大的不便甚至阻碍科学研究的进步。当然除此之外，大多数动物实验往往存在着测试周期很长、成本高居不下、无法高通量地完成实验测试等缺陷。专利CN106148270A公开了一种用于生物人工肝支持系统的3D微肝组织单元的构建方法，其特征是采用海藻酸钠-聚阳离子制备的囊泡包封猪肝脏脱细胞支架成分，并复合肝细胞、血管内皮细胞及成纤维细胞，通过细胞自组装来构建功能性3D微肝本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于模拟肝癌环境的脱细胞化支架模板，其特征在于：其制备方法包括以下步骤：/n（1）将新鲜动物肝脏反复冻融，切片后用去离子水反复洗涤，然后用氨水和Triton X-100的混合溶液进行脱细胞处理，再用去离子水磁力搅拌洗涤至中性，pH=7.4的PBS溶液浸泡，得到脱细胞支架前体P-DECM；/n（2）将步骤（1）制得的P-DECM用圆形模具取出一个圆柱体，冷冻后切成圆片，得到DECM；/n（3）将步骤（2）得到的DECM吸附在载玻片上，将PDMS固化在DECM边缘形成“河堤”， 并在DECM中放置一个直径为DECM直径一半的圆环，使DECM分割为内圆和外环两部分；/n（4）在内圆部分种植H...

【技术特征摘要】
1.一种用于模拟肝癌环境的脱细胞化支架模板，其特征在于：其制备方法包括以下步骤：
（1）将新鲜动物肝脏反复冻融，切片后用去离子水反复洗涤，然后用氨水和TritonX-100的混合溶液进行脱细胞处理，再用去离子水磁力搅拌洗涤至中性，pH=7.4的PBS溶液浸泡，得到脱细胞支架前体P-DECM；
（2）将步骤（1）制得的P-DECM用圆形模具取出一个圆柱体，冷冻后切成圆片，得到DECM；
（3）将步骤（2）得到的DECM吸附在载玻片上，将PDMS固化在DECM边缘形成“河堤”，并在DECM中放置一个直径为DECM直径一半的圆环，使DECM分割为内圆和外环两部分；
（4）在内圆部分种植HepG2细胞，在外环部分种植LO2细胞，然后在DECM上加入DMEM培养基，在37℃、5%CO2环境中孵育24h至细胞贴壁；
（5）取出放置在DECM中的圆环，加入待测试的靶向药物载体，进行药物靶向治疗的研究。


2.根据权利要求1所述的脱细胞化支架模板，其特征在于：步骤（1）新鲜动物肝脏反复冻融的次数为1~10次，切片的厚度为0.5~5.5cm；
脱细胞处理时，所用混合溶液中氨水的体积浓度为0.01%~20%，TritonX-100的体积浓度为0.1%~30%，搅拌时间为1h~7d，搅拌速度为50~1200rpm；
去离子水洗涤的次数为1~20次，磁力搅拌转速为50~1200rpm。


3.根据权利要求1所述的脱细胞化支架模板，其特征在于：步骤（2）中所得DECM的厚度为1µm~5cm，其直径应小于所使用载玻片的直径。


4.根据权利要求1所述的脱细胞化支架模板，其特征在于：当步骤（5）所用靶向药物载体兼具磁性时，则将一圆形吸铁石隔着载玻片置于HepG2细胞所在位置，以进行药物磁性靶向研究；
所述圆形吸铁石的直径应与圆环直径一致。


5.根据权利要求4所述的脱细胞化支架模板，其特征在于：具有磁性的靶向药物载体的制备方法为：
a）将DPPC、DPPE、DPPA、DSPE-PEG2000、顺磁性纳米材料溶于甲醇和氯仿的混合...

【专利技术属性】
技术研发人员：张进，林哲，郑辉东，何晶晶，刘宁，李飞翰，
申请(专利权)人：福州大学，
类型：发明
国别省市：福建;35