一种肝细胞培养基、培养方法及其用途技术

本发明专利技术涉及原代细胞体外培养领域，特别是涉及一种肝细胞培养基、培养方法及其用途。所述肝细胞培养基包括增殖培养基，所述增殖培养基包括以下成分：液体基础培养基、半乳糖、胰岛素‑转铁蛋白‑亚硒酸钠、脯氨酸、烟酰胺、鸟氨酸、转化生长因子α、表皮生长因子、地塞米松、Y‑27632、A‑83‑01、CHIR99021。本发明专利技术建立了原代肝细胞的长期体外扩增体系；肝细胞传代扩增培养时完全分化而不发生细胞退分化或转分化，降低了致癌风险，而且诱导成熟的肝细胞与原代肝细胞的肝功能差异小。

A culture medium, method and application of hepatocytes

【技术实现步骤摘要】
一种肝细胞培养基、培养方法及其用途
本专利技术涉及原代细胞体外培养领域，特别是涉及一种肝细胞培养基、培养方法及其用途。
技术介绍
肝细胞的体外培养对于推进肝脏细胞疗法、肝细胞死亡和肝脏再生机制以及肝脏疾病药物研究等都具有重要的意义。目前已经报道了几种可以对肝细胞进行体外培养的方法，如TakeshiKatsuda课题组在2016年报道，可以通过在培养基中添加化学小分子Y-27632、A-83-01和CHIR99021实现大鼠和小鼠肝细胞的体外扩增，培养的细胞退分化为具有双潜能性的肝祖细胞，经过进一步诱导可以分化为肝细胞或胆管细胞。2018年，中国科学院上海生化细胞研究所惠利健课题组发现并报道，HM培养基可以诱导人肝细胞在体外以双潜能的形式传代扩增培养。2019年，北京大学邓宏魁教授实验室报道了一种通过添加5种小分子化合物使原代肝实质细胞在体外长期(大于4周)稳定培养的技术，然而该技术只能用于维持培养中的肝细胞的性能，而不能用于肝细胞的体外扩增。前期的这些报道揭示了肝细胞体外扩增培养的挑战性。目前已建立的肝细胞体外培养系统还不能实现真正的肝本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肝细胞培养基，其特征在于，所述肝细胞培养基包括增殖培养基，所述增殖培养基以增殖培养基总量为基础计，包括以下成分：/n

【技术特征摘要】
1.一种肝细胞培养基，其特征在于，所述肝细胞培养基包括增殖培养基，所述增殖培养基以增殖培养基总量为基础计，包括以下成分：





2.根据权利要求1所述的肝细胞培养基，还进一步包括成熟培养基，所述成熟培养基以成熟培养基的总量为基础计，包括以下成分：





3.根据权利要求2所述的肝细胞培养基，其特征在于，所述腺苷酸环化酶激活剂为弗斯可林。


4.根据权利要求3所述的肝细胞培养基，其特征在于，所述弗斯可林的浓度为0.1μM-100μM，优选为1～50μM。


5.根据权利要求1或2所述的肝细胞培养基，其特征在于，所述液体基础培养基为MEM、DMEM、DMEM/F12、RPMI1640、F12中的一种或几种。


6.根据权利要求1或2所述的肝细胞培养基，其特征在于，还包括以下项中的一种或几种：
1)所述半乳糖的浓度为1.0～2.0g/L，优选为1.6～2g/L；
2)所述脯氨酸的浓度为：0.1～1.0g/L，优选为0.1～0.5g/L；
3)所述鸟氨酸的浓度为：0.01～0.3g/L，优选为0.05～0.15g/L；...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄鹏羽，毛一雷，庄绪冉，刘俊来，彭文博，
申请(专利权)人：上海科技大学，中国医学科学院北京协和医院，
类型：发明
国别省市：上海;31