人主动脉瓣膜间质细胞的分离及培养方法技术

本发明专利技术公开了人主动脉瓣膜间质细胞的分离和培养方法，该方法有效结合磁力转子机械分离方法和胶原酶消化方法分离组织，采用200目细胞筛过滤消化液，过滤好的消化液1000rpm离心5min，收集获得细胞沉淀并重悬浮，接种至培养瓶，置于37℃、5％CO

Isolation and culture of human aortic valve stromal cells

【技术实现步骤摘要】
人主动脉瓣膜间质细胞的分离及培养方法
本专利技术属于人细胞分离及培养
，涉及人主动脉瓣膜间质细胞的分离及培养方法。
技术介绍
近年来，随着生活水平和医疗水平的提升，人口预期寿命逐渐延长，钙化性主动脉瓣疾病(CAVD)患病率也日益增高，严重影响了人们健康。人的主动脉瓣膜间质细胞作为人的主动脉瓣膜的主要构成细胞，是体外研究钙化性主动脉瓣疾病的最佳的细胞。由于主动脉瓣膜间质细胞再生能力较弱的特性，目前研究者主要采用原代细胞分离方法分离离体的人主动脉瓣来获得人主动瓣膜间质细胞，并通过原代培养获得稳定的有限细胞系。目前国内外瓣膜间质细胞的分离多采用胶原酶消化序贯分离法，但耗时较长，效率低。
技术实现思路
根据上述问题，本专利技术提供了人主动脉瓣膜间质细胞的分离和培养方法，该方法结合磁力转子机械分离方法和胶原酶消化方法，其操作简单，细胞产量和成活率高，是一种较为理想的人主动脉瓣间质细胞分离培养的方法，可以满足多种生理生化实验的要求。其技术方案如下：本专利技术的目的之一是提供人主动脉瓣膜间质细胞的分离本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.人主动脉瓣膜间质细胞的分离及培养方法，其特征在于，采用磁力转子机械分离方法和/或胶原酶消化方法分离主动脉瓣膜间质细胞。/n

【技术特征摘要】
1.人主动脉瓣膜间质细胞的分离及培养方法，其特征在于，采用磁力转子机械分离方法和/或胶原酶消化方法分离主动脉瓣膜间质细胞。


2.根据权利要求1所述的间质细胞分离及培养方法，其特征在于，所述磁力转子机械分离方法通过恒温磁力搅拌器实现，搅拌器上烧杯内水温恒定在37℃，搅拌器的转子转速为50-60次/分钟，第一次搅拌时长为30min，以后每次搅拌时长为1小时。


3.根据权利要求1或2所述的间质细胞分离及培养方法，其特征在于，所述胶原酶消化方法，初次使用的胶原酶终浓度为2.5mg/mL，以后每次使用的胶原酶终浓度为0.8mg/mL。


4.根据权利要求3所述间质细胞分离及培养方法，其特征在于，采用磁力转子机械分离方法和/或胶原酶消化方法分离人主动脉瓣膜间质细胞，弃去第一次沉淀，收集以后每次获得的细胞沉淀。


5.根据权利要求4所述的间质细胞分离及培养方法，其特征在于，具体步骤包括：
(1)打开恒温磁力搅拌器，在搅拌器上准备37℃烧杯恒温水；
(2)于超净台内，在血清瓶里使用M199混合培养基，配制5mL胶原酶I终浓度为2.5mg/mL的消化液；
(3)选取新鲜刚离体人主动脉瓣膜标本，剪去周围的肌肉、软组织，超净台内用4℃预冷无菌含双抗(100u/ml的青霉素，100u/ml的链霉素)的PBS(PH为7.4)反复轻柔吹洗3遍；
(4)在4℃预冷的PBS中将组织剪成3mm×3mm×3mm的碎块，将碎块转移至步骤(2)的血清瓶中；
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【专利技术属性】
技术研发人员：曾庆春，许顶立，孟宪忠，敖丽华，詹琼，赖文岩，谭燕，任昊，彭新，
申请(专利权)人：南方医科大学南方医院，
类型：发明
国别省市：广东;44