单层致密奶牛乳腺上皮细胞培养方法技术

技术编号:24792632 阅读:30 留言:0更新日期:2020-07-07 20:09
本发明专利技术提供一种单层致密奶牛乳腺上皮细胞培养方法,所述方法包括在Transwell嵌套上室铺设胶原蛋白,并调整奶牛乳腺上皮细胞的培养基组成及培养时间。相较于现有的细胞培养方法,本发明专利技术成功构建了奶牛乳腺上皮屏障模型,可在研究奶牛患乳房炎时乳腺组织被破坏的机理、乳汁物质运输及不同物质对乳腺上皮屏障的保护作用等方面广泛应用。

【技术实现步骤摘要】
单层致密奶牛乳腺上皮细胞培养方法
本专利技术涉及生物
,具体地说,涉及一种单层致密奶牛乳腺上皮细胞培养方法。
技术介绍
在哺乳动物乳腺中,乳腺上皮细胞是乳腺表层的第一层细胞,不仅可以分泌乳汁还能对大肠杆菌等抗原产生先天性免疫反应。相邻的乳腺上皮细胞通过细胞连接复合体连接在一起,细胞连接复合体包括紧密连接(Tightjunction,TJ)、粘附连接(Adhesionjunction,AJ)和桥粒(Desmosome)。其中紧密连接位于上皮细胞最顶端的连接复合物,呈连续的带状结构,使相邻的上皮细胞互相紧密连接,限制水分子、离子、水和微生物的胞旁流动,是血乳屏障的重要组成部分。桥粒是一种坚韧、牢固的细胞连接结构,通过与中间纤维形成的网络支架相连,使相邻的细胞连接成一体,可以承受很大的拉力,且桥粒本身即具有很强的抗牵张力,使得细胞间的连接更为牢固。乳房炎是哺乳动物常见的一种危害较大的临床性疾病,奶牛乳腺感染细菌会扰乱其乳腺上皮细胞正常分泌乳汁的功能,导致乳汁中断。急性乳房炎常常损伤血乳屏障,而屏障功能被破坏后,乳汁中的成分如α-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.单层致密奶牛乳腺上皮细胞培养方法,其特征在于,将奶牛乳腺上皮细胞接种于上室铺设有胶原蛋白的带膜Transwell嵌套多孔板中,随后进行两阶段的细胞培养,即奶牛乳腺上皮细胞接种后48h内采用培养基1进行培养,随后72h采用培养基2进行培养;/n其中,培养基1为含有10%胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素、15ng/mL人表皮生长因子、1%ITS的DMEM/F12培养基;/n培养基2为含有5%胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素和1%ITS的DMEM/F12培养基;/nITS为含有1g/L胰岛素、0.55g/L转铁蛋白和0.00067g/L亚硒酸钠的溶液。...

【技术特征摘要】
1.单层致密奶牛乳腺上皮细胞培养方法,其特征在于,将奶牛乳腺上皮细胞接种于上室铺设有胶原蛋白的带膜Transwell嵌套多孔板中,随后进行两阶段的细胞培养,即奶牛乳腺上皮细胞接种后48h内采用培养基1进行培养,随后72h采用培养基2进行培养;
其中,培养基1为含有10%胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素、15ng/mL人表皮生长因子、1%ITS的DMEM/F12培养基;
培养基2为含有5%胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素和1%ITS的DMEM/F12培养基;
ITS为含有1g/L胰岛素、0.55g/L转铁蛋白和0.00067g/L亚硒酸钠的溶液。


2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,将奶牛乳腺上皮细胞以104~105个/孔接种于上室铺设有胶原蛋白的带膜Transwell嵌套多孔板的上室中,于37℃、5%CO2条件下培养。


3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,采用培养基1进行培养时,每24h更换一次培养基。


4.根据权利要求1所述的方法,其特...

【专利技术属性】
技术研发人员:李胜利郑宇慧刘钢王蔚曹志军杨红建王雅晶
申请(专利权)人:中国农业大学
类型:发明
国别省市:北京;11

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