【技术实现步骤摘要】
单层致密奶牛乳腺上皮细胞培养方法
本专利技术涉及生物
,具体地说,涉及一种单层致密奶牛乳腺上皮细胞培养方法。
技术介绍
在哺乳动物乳腺中,乳腺上皮细胞是乳腺表层的第一层细胞,不仅可以分泌乳汁还能对大肠杆菌等抗原产生先天性免疫反应。相邻的乳腺上皮细胞通过细胞连接复合体连接在一起,细胞连接复合体包括紧密连接(Tightjunction,TJ)、粘附连接(Adhesionjunction,AJ)和桥粒(Desmosome)。其中紧密连接位于上皮细胞最顶端的连接复合物,呈连续的带状结构,使相邻的上皮细胞互相紧密连接,限制水分子、离子、水和微生物的胞旁流动,是血乳屏障的重要组成部分。桥粒是一种坚韧、牢固的细胞连接结构,通过与中间纤维形成的网络支架相连,使相邻的细胞连接成一体,可以承受很大的拉力,且桥粒本身即具有很强的抗牵张力,使得细胞间的连接更为牢固。乳房炎是哺乳动物常见的一种危害较大的临床性疾病,奶牛乳腺感染细菌会扰乱其乳腺上皮细胞正常分泌乳汁的功能,导致乳汁中断。急性乳房炎常常损伤血乳屏障,而屏障功能被破坏后 ...
【技术保护点】
1.单层致密奶牛乳腺上皮细胞培养方法,其特征在于,将奶牛乳腺上皮细胞接种于上室铺设有胶原蛋白的带膜Transwell嵌套多孔板中,随后进行两阶段的细胞培养,即奶牛乳腺上皮细胞接种后48h内采用培养基1进行培养,随后72h采用培养基2进行培养;/n其中,培养基1为含有10%胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素、15ng/mL人表皮生长因子、1%ITS的DMEM/F12培养基;/n培养基2为含有5%胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素和1%ITS的DMEM/F12培养基;/nITS为含有1g/L胰岛素、0.55g/L转铁蛋白和0.00067g ...
【技术特征摘要】
1.单层致密奶牛乳腺上皮细胞培养方法,其特征在于,将奶牛乳腺上皮细胞接种于上室铺设有胶原蛋白的带膜Transwell嵌套多孔板中,随后进行两阶段的细胞培养,即奶牛乳腺上皮细胞接种后48h内采用培养基1进行培养,随后72h采用培养基2进行培养;
其中,培养基1为含有10%胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素、15ng/mL人表皮生长因子、1%ITS的DMEM/F12培养基;
培养基2为含有5%胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素和1%ITS的DMEM/F12培养基;
ITS为含有1g/L胰岛素、0.55g/L转铁蛋白和0.00067g/L亚硒酸钠的溶液。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,将奶牛乳腺上皮细胞以104~105个/孔接种于上室铺设有胶原蛋白的带膜Transwell嵌套多孔板的上室中,于37℃、5%CO2条件下培养。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,采用培养基1进行培养时,每24h更换一次培养基。
4.根据权利要求1所述的方法,其特...
【专利技术属性】
技术研发人员:李胜利,郑宇慧,刘钢,王蔚,曹志军,杨红建,王雅晶,
申请(专利权)人:中国农业大学,
类型:发明
国别省市:北京;11
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。