一株抗生链霉菌及其代谢产物的制备以及其在抗病菌方面的应用制造技术

本发明专利技术公开了一株抗生链霉菌及其代谢产物的制备以及其在抗病菌方面的应用。该菌株名称为Streptomyces antibioticus PPI‑16，保藏编号为GDMCC NO：60970，该菌株于2020年3月5日保藏于广州市先烈中路100号大院59号楼5楼的广东省微生物菌种保藏中心。本发明专利技术中的抗生链霉菌产生的活性化合物可以抑制多种病原真菌，如抑制黄瓜炭疽病菌、辣椒炭疽病菌、烟草炭疽病菌和白色念珠菌等，为抗生素研发提供新的资源。

【技术实现步骤摘要】
一株抗生链霉菌及其代谢产物的制备以及其在抗病菌方面的应用
本专利技术属于生物农药研究领域，特别涉及一株抗生链霉菌及其代谢产物的制备以及其在抗病菌方面的应用。
技术介绍
随着广谱抗生素及免疫抑制剂的广泛应用和侵入性治疗方法的开展，新的真菌病不断出现，一些古老的真菌病发病率开始上升，尤其是机会性真菌感染日益增多。真菌感染(特别是侵入性真菌感染)的发生率不断增大，对人类健康造成了严重危害。人类的真菌感染可分为3种：浅部真菌病、深部真菌病和系统性真菌病(Garber，2001)，其中最严重的、可危及生命的真菌感染是系统性真菌病(Meis，2001)。深部真菌病的病原菌主要是念珠菌属，尤其是白色念珠菌(Candidaalbicans)。它在念珠菌所有种中致病力最强，一旦机体的免疫力下降或者正常的菌群平衡被破坏，它就会在粘膜下大量繁殖，侵入深层组织，引起系统性念珠菌感染(Maertensetal.，2001)。医院真菌感染中占第一位的是念珠菌感染，感染后造成病死率达21％，念珠菌几乎可以侵犯全身所有脏器，各种念珠菌仍是造血干细胞移植最常见的真菌感染源(周绮等，2000)。尽管机体终生都被白色念珠菌这种机会性致病菌致敏，但是并没有因此发展成免疫耐受，所以念珠菌感染的发病率呈不断上升趋势，在免疫抑制患者中念珠菌的发病率列居第一位(Radentz，1989)。近20年来白色念珠菌感染增长了40倍以上，已成为医院感染的主要死亡原因之一(廖万青，1985)。因此，寻找念珠菌新生物药剂十分有意义。辣椒和黄瓜炭疽病是生产上普遍发生且危害严重的真菌病害，可造成烂叶、烂果、植株死亡。目前生产上主要利用多菌灵、代森锰锌等化学药剂进行防治，但农药残留及环境污染等负面效应也逐步增长。因此，寻找防治炭疽病新生物药剂十分必要。
技术实现思路
本专利技术的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一株抗生链霉菌。本专利技术的另一目的在于提供上述抗生链霉菌的代谢物的制备方法。本专利技术的再一目的在于提供上述抗生链霉菌及其代谢物的应用。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：一株抗生链霉菌，名称为StreptomycesantibioticusPPI-16(抗生链霉菌PPI-16)，保藏编号为GDMCCNO：60970，该菌株于2020年3月5日保藏于广州市先烈中路100号大院59号楼5楼的广东省微生物菌种保藏中心。一种所述抗生链霉菌的孢子。所述的抗生链霉菌的孢子的制备方法，将所述的抗生链霉菌接种到培养基上，于28～30℃条件下进行培养，得到抗生链霉菌的孢子。所述的培养基的组成成分为：可溶性淀粉1～5g，葡萄糖2～10g，酵母提取物1～3g，蛋白胨1～2g，KNO30.5～1g，K2HPO40.1～0.5g，NaCl0.1～0.5g，FeSO40.005～0.01g，MgSO4·7H2O0.01～0.05g，琼脂10～15g，pH7.2～7.4，加水定容至1000mL。所述的可溶性淀粉优选为可溶性玉米淀粉。所述的培养的时间为3～5天。一种抗生链霉菌的代谢物，为通过培养所述的抗生链霉菌和/或所述的抗生链霉菌的孢子获得。所述的抗生链霉菌的代谢物的制备方法，包括如下步骤：(1)将所述的抗生链霉菌接种到斜面培养基上，于28～30℃条件下进行培养；(2)将斜面培养基上的菌株接种到发酵培养基中进行发酵培养，过滤除去菌体，得到发酵液；然后将发酵液浓缩，得到浓缩液；浓缩液用乙酸乙酯萃取后再次浓缩，得到发酵浓缩物；(3)将发酵浓缩物采用硅胶柱进行色谱分离，然后用体积比为3:20的乙酸乙酯与石油醚进行清洗，再用体积比为1:1的乙酸乙酯与石油醚进行洗脱，并收集洗脱液(棕色油状物)，得到抗生链霉菌的代谢物。步骤(1)中所述的斜面培养基为：可溶性淀粉1～5g，葡萄糖2～10g，酵母提取物1～3g，蛋白胨1～2g，KNO30.5～1g，K2HPO40.1～0.5g，NaCl0.1～0.5g，FeSO40.005～0.01g，MgSO4·7H2O0.01～0.05g，琼脂10～15g，pH7.2～7.4，加水定容至1000mL。所述的可溶性淀粉优选为可溶性玉米淀粉。步骤(1)中所述的培养的时间为3～5天。步骤(2)中所述的发酵培养基为：KNO30.5～1g，K2HPO40.1～0.5g，MgSO4·7H2O0.1～0.5g，FeSO40.005～0.01g，海水晶0.1～0.5g，可溶性淀粉2～10g，葡萄糖5～10g，酵母膏15～20g，定容至1000mL，pH7.2～7.4。所述的可溶性淀粉优选为可溶性玉米淀粉。步骤(2)中所述的发酵培养的条件为：室温发酵培养5～7天；优选为：室温发酵培养5天。所述的室温优选为28～30℃；更优选为28℃。步骤(2)中所述的浓缩优选为采用加热的方式进行浓缩。步骤(2)中所述的浓缩优选为浓缩至发酵液体积的1/20～3/1。步骤(2)中所述的再次浓缩优选为浓缩至原体积的1/3～1/5。步骤(2)中所述的乙酸乙酯与浓缩液的体积比为1:1。步骤(3)中所述的硅胶柱中的硅胶为200～300目硅胶。所述的抗生链霉菌的代谢物的制备方法，在步骤(3)之后还包括如下步骤：将步骤(3)中得到的抗生链霉菌的代谢物通过高效液相色谱进行分离，得到抗霉素A1(AntimycinA1)；其中高效液相色谱的流动相为甲醇与体积百分数为0.5％的甲酸水溶液按体积比4:1得到的混合溶液。所述的抗生链霉菌，抗生链霉菌的孢子，以及抗生链霉菌的代谢物中的至少一种在生产抗霉素A1(AntimycinA1)中的应用。所述的抗生链霉菌，抗生链霉菌的孢子，以及抗生链霉菌的代谢物中的至少一种在防治真菌感染中的应用。所述的真菌为植物炭疽病菌或白色念珠菌。所述的植物炭疽病菌包括黄瓜炭疽病菌、辣椒炭疽病菌和烟草炭疽病菌等。本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：本专利技术筛选得到一株新的菌株(抗生链霉菌PPI-16)，该菌株能够产生新的活性化合物，可以抑制多种病原真菌，如抑制黄瓜炭疽病菌、辣椒炭疽病菌、烟草炭疽病菌和白色念珠菌生长繁殖等，为新抗生素研发提供新的资源，另外，本专利技术还提供了该抗生链霉菌PPI-16发酵产生的活性物质的发酵技术。附图说明图1是抗生链霉菌PPI-16的孢子照片图。图2是抗生链霉菌PPI-16的孢子丝照片图。图3是抗生链霉菌PPI-1616SrDNAPCR产物的凝胶电泳图(M：Marker；泳道1和2：抗生链霉菌PPI-16的16SrDNA)。图4是抗生链霉菌PPI-16的有效成分结晶体图。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备。下列实施例中未注明具体实验条本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株抗生链霉菌，其特征在于：名称为Streptomyces antibioticus PPI-16，保藏编号为GDMCC NO：60970，该菌株于2020年3月5日保藏于广州市先烈中路100号大院59号楼5楼的广东省微生物菌种保藏中心。/n

【技术特征摘要】
1.一株抗生链霉菌，其特征在于：名称为StreptomycesantibioticusPPI-16，保藏编号为GDMCCNO：60970，该菌株于2020年3月5日保藏于广州市先烈中路100号大院59号楼5楼的广东省微生物菌种保藏中心。


2.一种权利要求1所述的抗生链霉菌的孢子。


3.权利要求2所述的抗生链霉菌的孢子的制备方法，其特征在于：将权利要求1所述的抗生链霉菌接种到培养基上，于28～30℃条件下进行培养，得到抗生链霉菌的孢子；
所述的培养基的组成成分为：可溶性淀粉1～5g，葡萄糖2～10g，酵母提取物1～3g，蛋白胨1～2g，KNO30.5～1g，K2HPO40.1～0.5g，NaCl0.1～0.5g，FeSO40.005～0.01g，MgSO4·7H2O0.01～0.05g，琼脂10～15g，pH7.2～7.4，加水定容至1000mL；
所述的培养的时间为3～5天。


4.一种抗生链霉菌的代谢物，其特征在于：为通过培养权利要求1所述的抗生链霉菌和/或权利要求2所述的抗生链霉菌的孢子获得。


5.权利要求4所述的抗生链霉菌的代谢物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将权利要求1所述的抗生链霉菌接种到斜面培养基上，于28～30℃条件下进行培养；
(2)将斜面培养基上的菌株接种到发酵培养基中进行发酵培养，过滤除去菌体，得到发酵液；然后将发酵液浓缩，得到浓缩液；浓缩液用乙酸乙酯萃取后再次浓缩，得到发酵浓缩物；
(3)将发酵浓缩物采用硅胶柱进行色谱分离，然后用体积比为3:20的乙酸乙酯与石油醚进行清洗，再用体积比为1:1的乙酸乙酯与石油醚进行洗脱，并收集洗脱液，得到抗生链霉菌的代谢物。


6.根据权利要求5所述的抗生链霉菌的代谢物的制备方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的斜面培养基为：可溶性淀粉1～5g，葡萄糖2～10g，酵母提取物1～3g，蛋白胨1～2g，KNO3...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨祁云，林壁润，路征，张景欣，孙大元，吕永华，沈会芳，蒲小明，
申请(专利权)人：广东省农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：广东;44