调节嵌合抗原受体制造技术

本发明专利技术涉及用于调节嵌合抗原受体免疫效应细胞的组合物和方法领域，例如T细胞(CAR‑T)，调节相关的不良炎症反应的疗法，例如细胞因子释放综合征和肿瘤溶解综合征，使用靶向蛋白质降解。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】调节嵌合抗原受体相关申请案本申请主张2017年2月8日提交的临时美国申请案第62/456,649和2017年2月9日提交的临时美国申请案第62/457,124的权益。这些申请的全部内容通过引用方式而并入以于此用于所有目的。引用方式而并入名称为“16010-024WO1_sequencelisting_projectfile_ST25.txt”的文本文件的内容在2018年1月24日创建，并且大小为360千字节，通过引用方式整体并入本文。
本专利技术的目的在于通过在嵌合抗原受体(CAR)或工程化T细胞受体(TCR)允许调节CAR或TCR表达，从而调节CAR-T细胞或TCR-T细胞激活，以响应相关的副作用，例如脱靶效应和炎症反应，例如作为细胞因子释放综合征和肿瘤溶解综合征时，包含可调节和靶向的蛋白质降解元件来改善工程化免疫效应细胞(例如嵌合抗原受体T细胞(CAR-T))的安全性。
技术介绍
遗传工程免疫效应细胞的过继转移旨在快速建立T细胞介导的肿瘤免疫。在该方法中，患者自身的T细胞或其他免疫效应细胞被靶向通过转基因编码的嵌合抗原受体(CAR)或工程化T细胞受体(TCR)与肿瘤细胞结合。当在T细胞中表达时，CAR以独立于抗原加工的机制有效地将T细胞特异性和细胞毒性重引导到肿瘤细胞。通过这种方法，CART细胞克服了免疫耐受性问题以及抗原的主要组织相容性复合物(MHC)呈现的要求。CAR是合成的工程化受体，其含有编码与细胞内T细胞信号传导序列连接的基于抗体的识别结构域的序列。第一代CAR包括衍生自抗体并针对肿瘤靶抗原的细胞外单链可变片段(scFv)，其与细胞内CD3信号传导模块连接。第二代和第三代CAR已经发展到现在包括多个共刺激性结构域，包括但不限于4-1BB和CD28。早期临床试验的结果已经确定了CAR-T疗法的治疗功效，包含在许多癌症(包括淋巴瘤)(Tilletal.,“CD20-specificadiptiveimmunotherapyforlymphimausingachimericantigenreceptorwithbothCD28and4-1BBdomains:pilotclinicaltrialresults.”“Blood119(2012):3940-3950)，慢性淋巴细胞白血病(CLL)(Porteretal.,“ChimericantigenreceptormodifiedT-cellsinchroniclymphochleukemia.”NEJM365(2011):725-733)，急性淋巴细胞白血病(ALL)(Gruppetal,“ChimericantigenreceptormodifiedT-cellsforacutelymphoidleukemia.”NEJM368(2013):1509-1518)，和神经母细胞瘤(Louisetal.,“Antitumoractivityandlong-termdateofchimericantigenreceptor-positiveT-cellsinpatientswithneuroblastoma.”Blood118(2011):6050-6056)等中。在2014年11月，FDA授予JunoTherapeutic,Inc.的JCAR015孤儿(orphan)状态。KitePharma,Inc.的用于难治性侵袭性非霍奇金淋巴瘤的KTE-C19最近也获得了FDA和欧洲药品管理局的认可。宾夕法尼亚大学/诺华公司的CTL019forALL也获得了突破性的地位。最近，已经提出了含有靶向实体瘤如黑素瘤和胃肠道肿瘤的γδ受体的CAR-T细胞。Mirzaeietal.,“Prospectsforchimericantigenreceptor(CAR)γδTcells:ApotentialgamechangerforadoptiveTcellcancerimmunotherapy,”CancerLetters380(2016):413-423。然而，CART细胞疗法并非没有明显的副作用。虽然CAR-T的大多数不良事件是可以忍受和可接受的，但在许多情况下，CART细胞的给药导致严重的全身性炎症反应，包括细胞因子释放综合征和肿瘤溶解综合征(Xuetal.,“Efficacyandsafetyofadoptiveimmunotherapyusinganti-CD19chimericantigenreceptortransducedT-cells:asystemicreviewofphaseIclinicaltrials.”LeukemiaLymphoma54(2013):255-260；Minagawaetal.,”SeatbeltsinCARtherapy:howsafeareCARS？”Pharmaceuticals8(2015)：230-249)。例如，在2010年，两例死亡归因于在临床设定中施用CART细胞后细胞因子释放综合征的发展(Brentjensetal.,“TreatmentofchroniclymphocyticleukemiawithgeneticallytargetedautologousT-cells:casereportofanunforeseenadverseeventinaphaseIclinicaltrial.”Mol.Ther.18(2010):666-668；Morganetal.,，“CasereportofaseriousadverseeventfollowingtheadministrationofT-cellstransducedwithachimericantigenreceptorrecognizingERBB2.”Mol.Ther.18(2010):843-851)。细胞因子释放综合征(CRS)是一种临床上表现为发热，恶心，头痛，心动过速，低血压，缺氧以及心脏和/或神经系统表现的炎症反应。严重的细胞因子释放综合征被描述为细胞因子风暴，并且可能是致命的。CRS被认为是多种细胞类型(如单核细胞和巨噬细胞，T细胞和B细胞)持续激活的结果，其特征通常在于刺激后1至2小时内TNFα和IFNγ水平的增加，接着白细胞介素(IL)-6和IL-10增加，在某些情况下，IL-2和IL-8增加(Doesseggeretal.,“Clinicaldevelopmentmethodologyforinfusion-relatedreactionswithmonoclonalantibodies.”Nat.Clin.Transl.Immuno.4(2015):e39)。肿瘤溶解综合征(TLS)是一种代谢综合征，其由化疗突然杀死肿瘤细胞引起，随后释放细胞内容物，释放大量钾，磷和核酸进入体循环。核酸对尿酸的分解代谢导致高尿酸血症；尿酸排泄量的显着增加可导致肾小管中尿酸的沉淀和肾血管收缩，自身调节受损，肾血流减少，氧化和炎症，导致急性肾损伤。磷酸钙沉积在肾小管中的高磷血症也可引起急性肾损伤。高浓度的尿酸和磷增加本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种免疫效应细胞，包括：/na.嵌合抗原受体多肽，其中该嵌合抗原受体多肽包括：/ni.细胞外配体结合结构域；/nii.跨膜结构域；和/niii.包含至少一个细胞内信号传导结构域的细胞质结构域；和/nb.细胞质共刺激性多肽，其中该细胞质共刺激多肽包括：/ni.至少一个细胞内信号传导结构域；和/nii.异双功能性化合物靶向蛋白质，其能够被异双功能性化合物结合；/n其中该异双功能性化合物能够i)通过该异双功能性化合物靶向蛋白结合细胞质共刺激性多肽和ii)以使该细胞质共刺激性多肽接近泛素连接酶的方式，结合该泛素连接酶；/n其中当该细胞质共刺激性多肽被该异双功能性化合物结合时，能够泛素化，然后被蛋白酶体降解。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170208 US 62/456,649;20170209 US 62/457,1241.一种免疫效应细胞，包括：
a.嵌合抗原受体多肽，其中该嵌合抗原受体多肽包括：
i.细胞外配体结合结构域；
ii.跨膜结构域；和
iii.包含至少一个细胞内信号传导结构域的细胞质结构域；和
b.细胞质共刺激性多肽，其中该细胞质共刺激多肽包括：
i.至少一个细胞内信号传导结构域；和
ii.异双功能性化合物靶向蛋白质，其能够被异双功能性化合物结合；
其中该异双功能性化合物能够i)通过该异双功能性化合物靶向蛋白结合细胞质共刺激性多肽和ii)以使该细胞质共刺激性多肽接近泛素连接酶的方式，结合该泛素连接酶；
其中当该细胞质共刺激性多肽被该异双功能性化合物结合时，能够泛素化，然后被蛋白酶体降解。


2.如权利要求1所述的免疫效应细胞，其中该异双功能性化合物靶向蛋白质是衍生自选自SEQ.ID.NO.:3至8、24至67以及95至115的氨基酸序列。


3.如权利要求1和2中任一项所述的免疫效应细胞，其中该免疫效应细胞是T细胞。


4.如权利要求1和2中任一项所述的免疫效应细胞，其中该免疫效应细胞是天然杀伤(NK)细胞。


5.如权利要求1至4中任一项所述的免疫效应细胞，其中该免疫效应细胞是同种异体免疫效应细胞。


6.如权利要求1至4中任一项的免疫效应细胞，其中该免疫效应细胞是自体免疫效应细胞。


7.如权利要求1至6中任一项的免疫效应细胞，其中该异双功能性化合物靶向蛋白质是非內源性蛋白质。


8.如权利要求1至6中任一项的免疫效应细胞，其中该异双功能性化合物靶向蛋白质是衍生自内源表达蛋白质的修饰的氨基酸序列的蛋白质，其中该异双功能性化合物仅结合衍生自该修饰的氨基酸序列的蛋白质，而非内源表达的蛋白质。


9.如权利要求1至8中任一项所述的免疫效应细胞，其中该跨膜结构域是CD8α铰链结构域。


10.如权利要求1至9中任一项所述的免疫效应细胞，其中该至少一個细胞内信号传导结构域选自CD3ζ、CD28、4-1BB、OX40、CD27、ICOS、DAP-10和DAP-12信号传导结构域。


11.如权利要求1至10中任一项所述的免疫效应细胞，其中该细胞外配体结合结构域结合肿瘤抗原。


12.如权利要求1至10中任一项所述的免疫效应细胞，其中该细胞外配体结合结构域是肿瘤标志物的配体。


13.如权利要求1至12中任一项所述的免疫效应细胞，其中该泛素连接酶是小脑蛋白。


14.如权利要求1至12中任一项所述的免疫效应细胞，其中该泛素连接酶是VHL。


15.一种用于下调表达嵌合抗原受体多肽和细胞质共刺激性多肽的免疫效应细胞的激活的治疗系统，该系统包括：
a.如权利要求1至14中任一项所述的免疫效应细胞；和
b.异双功能性化合物，其能够i)通过该异双功能性化合物靶向蛋白结合该免疫效应细胞的该细胞质共刺激性多肽和ii)以使该细胞质共刺激性多肽接近泛素连接酶的方式，结合该泛素连接酶；
其中当该细胞质共刺激性多肽被该异双功能性化合物结合时，能够泛素化，然后被蛋白酶体降解。


16.一种用于降解在免疫效应细胞中表达的细胞质共刺激性多肽的治疗系统，该系统包括：
a.如权利要求1至14中任一项所述的免疫效应细胞；和
b.异双功能性化合物，其能够i)通过该异双功能性化合物靶向蛋白结合该免疫效应细胞的该细胞质共刺激性多肽和ii)以使该细胞质共刺激性多肽接近泛素连接酶的方式，结合该泛素连接酶；
其中当该细胞质共刺激性多肽被该异双功能性化合物结合时，能够泛素化，然后被蛋白酶体降解。


17.一种用于减少与表达嵌合抗原受体和细胞质共刺激性多肽的激活的免疫效应细胞相关的细胞因子释放综合征的治疗系统，该系统包括：
a.如权利要求1至14中任一项所述的免疫效应细胞；和
b.异双功能性化合物，其能够i)通过该异双功能性化合物靶向蛋白结合该免疫效应细胞的该细胞质共刺激性多肽和ii)以使该细胞质共刺激性多肽接近泛素连接酶结合的方式，结合该泛素连接酶；
其中当该细胞质共刺激性多肽被该异双功能性化合物结合时，能够泛素化，然后被蛋白酶体降解。


18.一种用于降低与表达嵌合抗原受体多肽和细胞质共刺激性多肽的激活的免疫效应细胞相关的免疫应答的治疗系统，该系统包括：
a.如权利要求1至14中任一项所述的免疫效应细胞；和
b.异双功能性化合物，其能够i)通过该异双功能性化合物靶向蛋白结合该免疫效应细胞的该细胞质共刺激性多肽和ii)以使该细胞质共刺激性多肽接近泛素连接酶结合的方式，结合该泛素连接酶；
其中当该细胞质共刺激多肽被该异双功能性化合物结合时，能够泛素化，然后被蛋白酶体降解。


19.一种减少受试者中由表达嵌合抗原受体多肽和细胞质共刺激性多肽的激活的免疫效应细胞引起的不良免疫应答的方法，包括：
向经历不良免疫应答的该受试者给药...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·布拉德纳，J·罗伯茨，B·纳贝特，G·温特，A·J·菲利普斯，T·P·赫弗南，D·巴克利，
申请(专利权)人：达纳法伯癌症研究所有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US