高效液相色谱检测维生素B1的EP杂质及降解杂质的方法技术

本发明专利技术公开了高效液相色谱检测维生素B1的EP杂质的方法，其特征在于，选用Merck Lichrospher 100 RP18色谱柱，以庚烷磺酸钠溶液和甲醇为流动相，流动相的流速设置为0.9ml/min～1.1ml/min，采用梯度洗脱，所述庚烷磺酸钠溶液浓度为18mmol/L～22mmol/L，其PH值为2.6～3.0。本发明专利技术的有益效果是，利用方便快捷的高效液相色谱法，对维生素B1的EP杂质进行检测，重复性、准确度均十分良好，有利于药品的质量控制；采用碱性溶液进行降解，降解效果佳。

Determination of EP impurities and degradation impurities in vitamin B1 by HPLC

【技术实现步骤摘要】
高效液相色谱检测维生素B1的EP杂质及降解杂质的方法
本专利技术涉及药物分析
，特别是高效液相色谱检测维生素B1的EP杂质及降解杂质的方法。
技术介绍
维生素B1，化学名为氯化3-[(4-氨基-2-甲基-5-嘧啶基)-甲基]-5-2-羟乙基)-4-甲基噻唑鎓盐酸盐，其化学结构如下：维生素B1又称硫胺素，是最早被人们提纯的水溶性维生素，具有维持正常糖代谢及神经传导的功能，用于治疗脚气和中枢神经及胃肠病、心脏活动失调等疾病。维生素B1已被中国药典、欧洲药典、日本药典收录，除欧洲药典提供的有关物质检测方法对单个已知杂质(杂质A、杂质B、杂质C)进行分离并单独控制外，其他各国药典均未对单个杂质进行分离并控制；其中，欧洲药典对物质检测方法为，采用色谱柱规格为：MerckLichrospher100RP18，250×4mm，5μm，其中流动相A为3.764g/L己烷磺酸钠溶液(用磷酸调节pH值至3.1)，流动相B为甲醇，其检测波长为248nm，流速为1.0ml/min，柱温为45℃，进样量为25μl，其梯度洗脱程序见附图1；系统适用性溶液配制：分别取维生素B1及欧洲药典杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、杂质G、杂质H对照品适量，加5％乙酸溶液溶解并稀释制成每1ml中约含HCC3.5mg，各有关物质均约20μg的溶液，作为系统适用性溶液；按照上述检测条件，量取系统适用性溶液25μl，注入液相色谱仪，记录色谱图(见附图2)，结果表明，杂质B与杂质D重合，维生素B1主峰及各杂质均拖尾严重，主峰拖尾因子为5.6，杂质最大拖尾因子为2.3。因此欧洲药典有关物质方法控制的杂质A、杂质B、杂质C实际上也并不是维生素B1的降解杂质，不便于人们进行适用，为了保证维生素B1生产及存储过程中的质量，需寻找一种可对其降解杂质进行控制的方法，便于我们使用的需要。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决目前市场上并没有对维生素B1的杂质进行准确且有效分离的问题，因此我们设计了一种高效检测维生素B1的EP杂质及降解杂质的方法，具体为高效液相色谱检测维生素B1的EP杂质及降解杂质的方法。实现上述目的本专利技术的技术方案为，高效液相色谱检测维生素B1的EP杂质的方法，选用MerckLichrospher100RP18色谱柱，以庚烷磺酸钠溶液和甲醇为流动相，流动相的流速设置为0.9ml/min～1.1ml/min，采用梯度洗脱，所述庚烷磺酸钠溶液浓度为18mmol/L～22mmol/L，其PH值为2.6～3.0；其中，流动相的流速优选为1.0mL/min，所述庚烷磺酸钠溶液浓度优选20mmol/L，PH值优选为2.8。对方案的进一步补充，所述庚烷磺酸钠溶液中含有0.5％三乙胺。对方案的进一步补充，所述MerckLichrospher100RP18色谱柱选用：内径为4mm，长度为250mm，填料粒径为5μm的MerckLichrospher100RP18色谱柱。对方案的进一步补充，其进样量为25μL，柱温为38℃～42℃。对方案的进一步补充，选用紫外检测器，其检测波长为246nm～250nm。对方案的进一步补充，供试品溶液维生素B1的浓度为1.5mg/mL。降解杂质的方法，取维生素B1样品约30mg，精密称定，置20mL量瓶中，加2mL浓度为1mol/L的氢氧化钠，90℃加热2h，用2mL浓度为1mol/L的盐酸中和，用15％甲醇稀释至刻度，摇匀。其有益效果在于，利用方便快捷的高效液相色谱法，对维生素B1的EP杂质进行检测，重复性、准确度均十分良好，有利于药品的质量控制；采用碱性溶液进行降解，降解效果佳。附图说明图1是本专利技术
技术介绍
中的欧洲药典检测条件的梯度洗脱程序；图2是本专利技术
技术介绍
中的欧洲药典检测条件下系统适用性溶液的色谱图；图3是本专利技术检测条件下系统适用性溶液的色谱图；图4是本专利技术实施例1中氧化降解溶液的色谱图；图5是本专利技术实施例2中碱降解溶液的色谱图。具体实施方式首先说明本专利技术的设计初衷，是由于目前市场上并没有对维生素B1的杂质进行准确且有效分离的问题，为了保证维生素B1生产及存储过程中的质量更佳，本专利技术提供了一种高效液相色谱检测维生素B1的EP杂质及降解杂质的方法。下面通过具体的实施例，对本专利技术做详细的描述：实施例1色谱条件：色谱柱：MerckLichrospher100RP18，粒径5μm，柱规格(250×4mm)；检测器：紫外检测器，检测波长248nm，流动相：庚烷磺酸钠溶液和甲醇；庚烷磺酸钠溶液的浓度：20mmol/L；庚烷磺酸钠溶液PH值为2.8；流速：1.0mL/min；柱温：40℃；进样量：25μL梯度洗脱比例：如下表1所示；表1梯度洗脱比例时间(分钟)庚烷磺酸钠溶液(％)甲醇(％)08515257525307030455050505050528515608515系统适用性溶液配制：分别取维生素B1及欧洲药典杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、杂质G、杂质H对照品适量，加15％甲醇溶解并稀释制成每1mL中约含HCC1.5mg，各有关物质均约1.5μg的溶液，作为系统适用性溶液(杂质控制限度：0.1％)。检测方式，量取系统适用性溶液25μl，注入液相色谱仪，记录色谱图(见附图3)，结果表明，主峰与各杂质峰形良好，各杂质与维生素B1均能有效地分离。降解杂质的方法(氧化降解溶液配制)：取维生素B1约30mg，精密称定，置20ml量瓶中，加30％过氧化氢溶液2ml，90℃水浴破坏0.5h，冷却后用15％甲醇稀释至刻度，摇匀。按本专利技术的检测方法，量取降解溶液25μl，注入液相色谱仪，记录色谱图(如附图4)。实施例2检测杂质的方法与实施例1相同；降解杂质的方法(碱降解溶液配制)：取维生素B1样品约30mg，精密称定，置20ml量瓶中，加1mol/L氢氧化钠2ml，90℃加热2h，用1mol/L盐酸2ml中和，用15％甲醇稀释至刻度，摇匀。按本专利技术的检测方法，量取降解溶液25μl，注入液相色谱仪，记录色谱图(如附图5)。根据实施例1与实施例2的色谱图对比可知，维生素B1在碱性条件下更易降解，主要降解产物相对维生素B1保留时间为0.93，与欧洲药典杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、杂质G、杂质H均可有效分离。上述技术方案仅体现了本专利技术技术方案的优选技术方案，本
的技术人员对其中某些部分所可能做出的一些变动均体现了本专利技术的原理本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.高效液相色谱检测维生素B1的EP杂质的方法，其特征在于，选用Merck Lichrospher100 RP18色谱柱，以庚烷磺酸钠溶液和甲醇为流动相，流动相的流速设置为0.9ml/min～1.1ml/min，采用梯度洗脱，所述庚烷磺酸钠溶液浓度为18mmol/L～22mmol/L，其PH值为2.6～3.0。/n

【技术特征摘要】
1.高效液相色谱检测维生素B1的EP杂质的方法，其特征在于，选用MerckLichrospher100RP18色谱柱，以庚烷磺酸钠溶液和甲醇为流动相，流动相的流速设置为0.9ml/min～1.1ml/min，采用梯度洗脱，所述庚烷磺酸钠溶液浓度为18mmol/L～22mmol/L，其PH值为2.6～3.0。


2.根据权利要求1所述的高效液相色谱检测维生素B1的EP杂质的方法，其特征在于，所述庚烷磺酸钠溶液中含有0.5％三乙胺。


3.根据权利要求1所述的高效液相色谱检测维生素B1的EP杂质的方法，其特征在于，所述MerckLichrospher100RP18色谱柱选用：内径为4mm，长度为250mm，填料粒径为5μm的MerckLichrospher10...

【专利技术属性】
技术研发人员：茅燕鸿，吉丽峰，姜春阳，谢军，李惠，
申请(专利权)人：江苏海悦康医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32