抗VEGF单域抗体及其人源化、单域抗体和IgG1-Fc构建的融合蛋白和应用制造技术

本发明专利技术公开了抗VEGF单域抗体及其人源化、单域抗体和IgG1‑Fc构建的融合蛋白和应用。本发明专利技术筛选得到一组VEGF的单域抗体，其活性高、具有较强的中和或结合能力。该组单域抗体能特异性结合人VEGF165和VEGF121抗原、结合细胞表面表达VEGF的肿瘤细胞株，有效阻断VEGF抗原与VEGFR结合以及产生相应的信号级联效应。本发明专利技术进一步将单域抗体进行人源化改造得到提高亲和力提高的人源化抗体。本发明专利技术还将单域抗体或人源化的单域抗体与IgG‑Fc构建得到的融合蛋白。本发明专利技术的人源化单域抗体和/或融合蛋白可用于检测或诊断VEGF、阻断VEGF与VEGFR之间相互作用以及用于治疗VEGF表达异常相关疾病。

【技术实现步骤摘要】
抗VEGF单域抗体及其人源化、单域抗体和IgG1-Fc构建的融合蛋白和应用
本专利技术涉及单域抗体，尤其涉及抗VEGF的单域抗体以及用该单域抗体或人源化的单域抗体与IgG1-Fc融合构建的融合蛋白，本专利技术进一步涉及它们在检测VEGF以及治疗VEGF表达异常相关疾病中的应用，属于抗VEGF的单域抗体、人源化的单域抗体及其应用领域。
技术介绍
血管内皮生长因子(VascularEndothelialGrowthFactor,VEGF)家族是一类多功能的细胞因子,在血管生成和淋巴管生成中具有直接和间接的调控作用,可促进内皮细胞增殖、促进血管生成以及增加血管的通透性。VEGF家族包括VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D等，其中VEGF-A编码区域，经转录、剪接等步骤后形成5种单体,因单体中所含氨基酸数目不同，分别被命名为VEGF121、VEGF145、VEGF165、VEGF189和VEGF206，相应的含有121个、145个、165个、189个和206个氨基酸。在8个外显子中，1～5被认为具有重要意义，因其能够编码VEG本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一组抗VEGF的单域抗体，所述单域抗体均由框架区和3个互补决定区组成，其特征在于，所述单域抗体选自NBV1、NBV2、NBV3、NBV4、NBV5、NBV6、NBV7、NBV8、NBV9、NBV10、NBV11、NBV12、NBV13、NBV14、NBV15、NBV16、NBV17、NBV18、NBV19、NBV20、NBV21、NBV22、NBV23、NBV24、NBV25、NBV26、NBV27、NBV28、NBV29、NBV30、NBV31、NBV32、NBV33、NBV34、NBV35、NBV36、NBV37、NBV38、NBV39、NBV40、NBV41或NBV42中的任何一种；...

【技术特征摘要】
1.一组抗VEGF的单域抗体，所述单域抗体均由框架区和3个互补决定区组成，其特征在于，所述单域抗体选自NBV1、NBV2、NBV3、NBV4、NBV5、NBV6、NBV7、NBV8、NBV9、NBV10、NBV11、NBV12、NBV13、NBV14、NBV15、NBV16、NBV17、NBV18、NBV19、NBV20、NBV21、NBV22、NBV23、NBV24、NBV25、NBV26、NBV27、NBV28、NBV29、NBV30、NBV31、NBV32、NBV33、NBV34、NBV35、NBV36、NBV37、NBV38、NBV39、NBV40、NBV41或NBV42中的任何一种；
其中，单域抗体NBV1的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.1、SEQIDNo.2和SEQIDNo.3所示；单域抗体NBV2的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.4、SEQIDNo.5和SEQIDNo.6所示；单域抗体NBV3的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.7、SEQIDNo.8和SEQIDNo.9所示；单域抗体NBV4的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.10、SEQIDNo.11和SEQIDNo.12所示；单域抗体NBV5的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.13、SEQIDNo.14和SEQIDNo.15所示；单域抗体NBV6的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.16、SEQIDNo.17和SEQIDNo.18所示；单域抗体NBV7的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.19、SEQIDNo.20和SEQIDNo.21所示；单域抗体NBV8的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.22、SEQIDNo.23和SEQIDNo.24所示；单域抗体NBV9的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.25、SEQIDNo.26和SEQIDNo.27所示；单域抗体NBV10的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.28、SEQIDNo.29和SEQIDNo.30所示；单域抗体NBV11的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.31、SEQIDNo.32和SEQIDNo.33所示；单域抗体NBV12的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.34、SEQIDNo.35和SEQIDNo.36所示；单域抗体NBV13的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.37、SEQIDNo.38和SEQIDNo.39所示；单域抗体NBV14的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.40、SEQIDNo.41和SEQIDNo.42所示；单域抗体NBV15的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.43、SEQIDNo.44和SEQIDNo.45所示；单域抗体NBV16的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.46、SEQIDNo.47和SEQIDNo.48所示；单域抗体NBV17的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.49、SEQIDNo.50和SEQIDNo.51所示；单域抗体NBV18的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.52、SEQIDNo.53和SEQIDNo.54所示；单域抗体NBV19的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.55、SEQIDNo.56和SEQIDNo.57所示；单域抗体NBV20的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.58、SEQIDNo.59和SEQIDNo.60所示；单域抗体NBV21的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.61、SEQIDNo.62和SEQIDNo.63所示；单域抗体NBV22的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.64、SEQIDNo.65和SEQIDNo.66所示；单域抗体NBV23的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.67、SEQIDNo.68和SEQIDNo.69所示；单域抗体NBV24的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.70、SEQIDNo.71和SEQIDNo.72所示；单域抗体NBV25的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.73、SEQIDNo.74和SEQIDNo.75所示；单域抗体NBV26的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.76、SEQIDNo.77和SEQIDNo.78所示；单域抗体NBV27的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.79、SEQIDNo.80和SEQIDNo.81所示；单域抗体NBV28的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.82、SEQIDNo.83和SEQIDNo.84所示；单域抗体NBV29的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.85、SEQIDNo.86和SEQIDNo.87所示；单域抗体NBV30的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.88、SEQIDNo.89和SEQIDNo.90所示；单域抗体NBV31的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.91、SEQIDNo.92和SEQIDNo.93所示；单域抗体NBV32的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.94、SEQIDNo.95和SEQIDNo.96所示；单域抗体NBV33的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.97、SEQIDNo.98和SEQIDNo.99所示；单域抗体NBV34的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.100、SEQIDNo.101和SEQIDNo.102所示；单域抗体NBV35的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.103、SEQIDNo.104和SEQIDNo.105所示；单域抗体NBV36的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.106、SEQIDNo.107和SEQIDNo.108所示；单域抗体NBV37的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.109、SEQIDNo.110和SEQIDNo.111所示；单域抗体NBV38的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.112、SEQIDNo.113和SEQIDNo.114所示；单域抗体NBV39的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.115、SEQIDNo.116和SEQIDNo.117所示；单域抗体NBV40的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.118、SEQIDNo.119和SEQIDNo.120所示；单域抗体NBV41的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.121、SEQIDNo.122和SEQIDNo.123所示；单域抗体NBV42的3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQIDNo.124、SEQIDNo.125和SEQIDNo.126所示；
或者将上述所示的任何一种氨基酸序列中的一个或多个氨基酸进行缺失、取代、插入和/或添加所得到的蛋白突变体，该蛋白突变体与突变前的蛋白具有相同的功能；或者与上述所示的任何一种氨基酸序列至少有90％以上同一性的氨基酸序列。


2.按照权利要求1所述的单域抗体，其特征在于，单域NBV1的氨基酸序列为SEQIDNo.127所示，单域NBV2的氨基酸序列为SEQIDNo.128所示，单域NBV3的氨基酸序列为SEQIDNo.129所示，单域NBV4的氨基酸序列为SEQIDNo.130所示，单域NBV5的氨基酸序列为SEQIDNo.131所示，单域NBV6的氨基酸序列为SEQIDNo.132所示，单域NBV7的氨基酸序列为SEQIDNo.133所示，单域NBV8的氨基酸序列为SEQIDNo.134所示，单域NBV9的氨基酸序列为SEQIDNo.135所示，单域NBV10的氨基酸序列为SEQIDNo.136所示，单域NBV11的氨基酸序列为SEQIDNo.137所示，单域NBV12的氨基酸序列为SEQIDNo.138所示，单域NBV13的氨基酸序列为SEQIDNo.139所示，单域NBV14的氨基酸序列为SEQIDNo.140所示，单域NBV15的氨基酸序列为SEQIDNo.141所示，单域抗体NBV16的氨基酸序列为SEQIDNo.142所示，单域抗体NBV17的氨基酸序列为SEQIDNo.143所示，...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶青，
申请(专利权)人：北京纽安博生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11