法布里德巴利酵母、包含其的微生物制剂及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种法布里德巴利酵母D‑1，保藏编号为CGMCC No.16712，保藏日期为2018年11月6日，分类名称为Debaryomyces fabryi。本发明专利技术还涉及该法布里德巴利酵母D‑1在普洱生茶发酵中的应用。经本发明专利技术的法布里德巴利酵母菌株D‑1发酵的发酵普洱茶呈现花果浓香，汤色变深，儿茶素含量减少，冲泡后茶汤的抗氧化能力提高，饮用后有益于人体健康。

【技术实现步骤摘要】
法布里德巴利酵母、包含其的微生物制剂及其应用
本专利技术涉及微生物发酵领域，具体而言，涉及一种法布里德巴利酵母(Debaryomycesfabryi)、包含该酵母的微生物制剂，及它们在茶叶发酵中的应用。
技术介绍
普洱茶通常可被简单的分为普洱生茶和普洱熟茶两种。普洱生茶，是指用云南大叶种晒青毛茶为原料，以自然的方式陈放，不经过人工“发酵”、“渥堆”处理，仅经过加工整理、修饰形状的各种云南茶叶。普洱生茶因陈放而更有价值。陈期五年后，普洱生茶野性开始减退，茶汤如半发酵的乌龙茶，汤色浅栗红亮。随着陈放时间延长，在不同时期自然发酵出荷香、樟香、兰香等不同香气。汤色也从栗红色转为深栗色，茶底从栗色陈化至深褐色。茶味也随时间而慢慢醇滑、厚重，使其风味更加柔和。为了缩短陈化时间，加速物质间转化，科学家们应用各种发酵技术通过接种不同菌种模拟其自然发酵过程。目前对于改善普洱茶发酵特征所涉及的菌株主要有多菌种(包含酵母和霉菌)复合发酵，用以加快发酵过程及提高茶叶的香气、滋味以及汤色。但由于复合菌种成分复杂，且多数为酵母菌与霉菌复配而成，其发酵条件难于控制，尤其是在同样发酵条件下使霉菌孢子合理萌发且不过量，是近几年来茶叶发酵领域技术的难点和痛点。因此，对于现有发酵技术中存在的难控制、易污染、风味不稳定等核心问题，亟待一种新型简单的发酵技术以克服上述问题，生产出宜于操控、风味独特、茶味醇滑的新型普洱茶。采用单菌发酵，工艺操作简单、可控，是解决上述问题的有效途径。酵母菌是普洱茶中的优势菌株，研究人员利用纯种酵母菌进行普洱茶发酵，如赵腾飞等用从渥堆发酵中筛选了5种酵母对普洱茶进行纯种发酵，但是结果显示酵母菌纯菌发酵对普洱茶的作用没有自然发酵(多种微生物发酵)的作用明显，降低其中茶多酚(具有很强的抗氧化性)和可溶性糖(缓解茶汤苦涩味、刺激作用)的含量，发酵得到的普洱茶口感不佳(“酵母菌纯种发酵普洱茶初探”，赵腾飞等，食品科技，2012年)。因此，利用单菌纯种发酵仍然存在发酵效果不如自然发酵的缺点。法布里德巴利酵母(Debaryomycesfabryi)是普洱茶渥堆过程中普遍存在的一种酵母，由于其含量低且不易分离，常常被科学家忽视。本专利技术人从渥堆发酵普洱茶中分离筛选出一株法布里德巴利酵母，将其人工接种于普洱生茶，能够获得发酵生产品质、抗氧化性优于传统普洱生茶和自然发酵茶的优质发酵普洱茶。
技术实现思路
第一方面，本专利技术提供了一种法布里德巴利酵母D-1(DebaryomycesfabryiD-1)，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏编号为CGMCCNo.16712，保藏日期为2018年11月6日，分类名称为Debaryomycesfabryi。第二方面，本专利技术提供了一种微生物制剂，所述微生物制剂包含第一方面所述的法布里德巴利酵母D-1。第三方面，本专利技术提供了第一方面所述的法布里德巴利酵母D-1或第二方面所述的微生物制剂在制备具有抗氧化作用的茶叶中的应用。其中，所述具有抗氧化作用的茶叶为发酵普洱茶。第四方面，本专利技术提供了一种制备发酵普洱茶的方法，所述方法包括将本专利技术的法布里德巴利酵母D-1或微生物制剂接种至普洱生茶，然后进行纯种发酵。有益效果使用本专利技术的法布里德巴利酵母D-1对普洱生茶进行纯种发酵，可降低普洱生茶中的儿茶素，使普洱生茶苦涩的味道迅速转化；并使经其发酵的发酵普洱茶在冲泡后的茶汤呈现花果浓香，汤色变深，苦涩味变淡，味道更为柔和细腻，以及抗氧化能力提高50％以上，具有明显的抗氧化作用，饮用后有益于人体健康。本专利技术制备发酵普洱茶的方法采用本专利技术的法布里德巴利酵母D-1或本专利技术的微生物制剂进行纯种发酵，工艺操作简单、可控，仅需自然干燥即可完成发酵普洱茶的制作，无需进行二次发酵，大大缩短了工艺时间，便于企业推广应用，具有良好的应用前景。附图说明图1为法布里德巴利酵母的18SrDNA序列。图2是普洱生茶和自然发酵茶与发酵普洱茶茶汤中的抗氧化能力的对比图表。具体实施方式以下对本专利技术的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本专利技术，并不用于限制本专利技术。在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。在本专利技术中，术语“OTUs(OperationTaxonomyUnits)”是指操作分类单元。在本专利技术中，不同的18SrRNA序列的相似性高于97％即可聚类为一个OTU，每一个OTU代表一个微生物物种。在本专利技术中，术语“物种注释”是指对样本OTU中种属的构成进行柱状图可以得到物种组成柱状图，显示组间或组内样品物种分布情况。在本专利技术中，术语“渥堆”或“渥堆发酵”是指具有本领域众所周知定义的一种普洱茶发酵过程，通常是指以微生物自身代谢活动为中心，通过胞外酶和湿热环境的协调作用，使茶叶的化学成分发生复杂的变化，进而塑造普洱茶特殊的品质风味的过程。在本专利技术中，术语“纯种发酵”是指在无菌条件下向毛茶/生茶中人工接种一种微生物进行发酵的过程，也称为“单菌发酵”或“单菌纯种发酵”。本专利技术中，术语“毛茶”是指：新鲜茶叶经过杀青，揉捻，干燥等工序后制成的茶叶。在本专利技术中，术语“生茶”是指：新鲜茶叶采摘后以自然的方式陈放，未经过渥堆发酵处理的茶。在本专利技术中，术语“自然发酵茶”是指：新鲜茶叶采摘后，经杀青，揉捻，干燥，增温渥堆，毛茶分级筛选，风干陈化，筛分拼配后制成的茶。在本专利技术中，术语“普洱生茶”是指用云南大叶种晒青毛茶为原料，以自然的方式陈放，不经过“人工发酵”、“渥堆”处理的普洱茶。本专利技术中，术语“普洱熟茶”是指用云南大叶种晒青毛茶为原料，经过渥堆发酵，以人工方式速成发酵而制成的普洱茶。在本文中，将普洱生茶经人工接种菌种发酵后获得普洱茶的称为“发酵普洱茶”。本专利技术中，本专利技术人从对普洱生茶的渥堆发酵过程中分离、筛选出一株酵母，对该菌株的18srDNA序列(SEQIDNO:1)进行扩增、测序以及比对，发现该菌株与DebaryomycesfabryiJCM2166(GenBank:＝AB013567.1)同源性最高，同源性为99％，因此在分类学上属于法布里德巴利酵母，将其命名为法布里德巴利酵母D-1。因此，在一个实施方式中，本专利技术提供了一种用于茶叶发酵的法布里德巴利酵母D-1，保藏编号为CGMCCNo.16712，保藏日期为2018年11月6日。使用该法布里德巴利酵母菌株D-1对普洱生茶进行纯种发酵，可降低普洱生茶中的儿茶素，使普洱生茶苦涩的味道迅速转化；并使由其发酵后的发酵普洱茶经冲泡后的茶汤呈现鲜甜果香，汤色变深，苦涩味变淡，味道更为柔和细腻，以及本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于茶叶发酵的法布里德巴利酵母(Debaryomyces fabryi)D-1，其保藏编号为CGMCC No.16712。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于茶叶发酵的法布里德巴利酵母(Debaryomycesfabryi)D-1，其保藏编号为CGMCCNo.16712。


2.一种微生物制剂，所述微生物制剂包含权利要求1所述的法布里德巴利酵母D-1。


3.如权利要求2所述的微生物制剂，其中，所述微生物制剂为冻干菌剂，优选处于干粉状的冻干菌剂。


4.制备权利要求2或3所述的微生物制剂的方法，所述方法包括如下步骤：
1)将权利要求1所述的法布里德巴利酵母D-1接种至酵母培养基中进行培养，获得所述法布里德巴利酵母D-1的培养液；
2)从步骤1)中获得的所述培养液中收集所述法布里德巴利酵母D-1的菌体；以及
3)将所述菌体与冻干保护剂混合后经真空干燥，以制成所述微生物制剂。


5.如权利要求4所述的方法，其中，在步骤1)中，将所述法布里德巴利酵母D-1在YPD液体培养基中于28-32℃、优选30℃，150-250rpm、优选200rpm下培养至少12h、优选至少24h，并且在培养过程中维持pH为6-7、优选6.5。


6.如权利要求4或5所述的方法，其中，在步骤2)中，所述菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑晓卫，焦琳，陈博，张子剑，杨鑫，金渭武，
申请(专利权)人：中粮营养健康研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11