一种抗人CKMB的抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种新颖的包含CKMB抗原结合结构域的分离的结合蛋白，并对该结合蛋白的制备、应用等方面进行研究。所述结合蛋白活性强，与人CKMB蛋白具有很高的亲和力，可广泛应用于CKMB蛋白的检测领域。

An antibody against human CKMB and its application

【技术实现步骤摘要】
一种抗人CKMB的抗体及其应用
本专利技术涉及生物技术和医学
，尤其是涉及一种抗人CKMB的抗体及其应用。
技术介绍
肌酸激酶同工酶(creatinekinaseisoenzymes，CK)有四种同功酶形式：肌肉型(MM)、脑型(BB)、杂化型(MB)和线粒体型(MiMi)。MM型主要存在于各种肌肉细胞中，是由两个相同的亚基组成的二聚体，BB型主要存在于脑细胞中，MB型主要存在于心肌细胞中，MiMi型主要存在于心肌和骨骼肌线粒体中。CKMB(杂化型肌酸激酶同工酶)通常分为MB1与MB2两个异型，在心肌细胞中，CKMB主要以MB2的形式存在，一旦心肌细胞发生损伤就会释放MB2，使血清中的CKMB水平在短时间内迅速升高，其升高时间通常于发病6h内，且在24h左右达到峰值，并于72h后逐渐降低，直至恢复正常水平，这表明CK-MB可于早期反映出心肌受损情况。由于CKMB在诊断急性心肌梗死中的敏感性和特异性比较高，经过多年的深入研究和临床分析，血清中CKMB升高已成为公认的诊断急性心肌梗死和确认有无心肌坏死的重要指标，具有较高的诊断准确率，可在临床中推广使用。特别是各级医院中对于急性心肌梗死患者的溶栓治疗以及急诊经皮冠状动脉介入治疗的使用越来越广泛，这就要求必须要对急性心肌梗死进行早期诊断。目前在临床实验室多采用免疫抑制法测定CKMB，该方法简单迅速，但特异性差。其检测原理是通过抗CK-M抗体，使M亚基活性受到抑制，对B亚基的活性进行检测，因为CKBB在健康人体中的含量极少，可直接忽略，将所测结果乘以2，即可获得血液中CKMB的活性。该方法具有操作简单、检测速度快、成本低等优势，在临床实验室检验中被广泛应用。但后来发现，肌肉分解和一些非心脏疾病均可导致B亚基含量升高从而带来CKMB的假性增加，因此，酶质量法在准确性上有更明显的优势。酶质量法采用化学免疫发光技术进行定量检测，以双抗体夹心法为主，使抗人CKMB抗体包被于磁微粒等固相载体，其标记物为酶标抗人CKMB抗体，对CKMB进行定量分析检测。该检测方法对抗原抗体反应具有较高的特异性，与CKBB及CKMM无交叉反应，具有更高的灵敏度，不受血清中巨CK及其他酶类等因素的影响。要实现对CKMB快速、准确的检测必须要有对CKMB高度灵敏、高特异性的单克隆抗体。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术涉及一种新颖的包含CKMB抗原结合结构域的分离的结合蛋白，并对该结合蛋白的制备、应用等方面进行研究。所述抗原结合结构域包括选自下述氨基酸序列的至少一个互补决定区，或与下述氨基酸序列的互补决定区具有至少80％的序列同一性且与CKMB具有KD≤8.57×10-9mol/L的亲和力；互补决定区CDR-VH1为G-X1-S-X2-T-T-G-X3-D-R，其中，X1是I、V或L，X2是L或I，X3是S或T；互补决定区CDR-VH2为I-X1-Y-S-G-T-X2-T-Y-N-P-S-X3-T-S，其中，X1是F或Y，X2是L、V或I，X3是L、V或I；互补决定区CDR-VH3为R-E-X1-T-Y-Y-X2-Y-G-Y-F-D-V-X3-G，其中，X1是K或R，X2是P、A或G，X3是F或W；互补决定区CDR-VL1为H-X1-S-X2-N-I-N-X3-W-L-S，其中，X1是A或G，X2是N或Q，X3是I、V或L；互补决定区CDR-VL2为K-X1-S-D-X2-H-T，其中，X1是A或G，X2是I、V或L；互补决定区CDR-VL3为Q-X1-Q-S-Y-X2-W-T-X3-G，其中，X1是G或A，X2是G、A或P，X3是W或F。一个重要优点在于，所述结合蛋白活性强，与CKMB具有很高的亲和力。附图说明为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为本专利技术抗CKMB的重组抗体的单克隆抗体电泳图。具体实施方式本专利技术可通过后续对于本专利技术一些实施方案描述以及其中所包括的实施例的详细内容而更容易被了解。在进一步叙述本专利技术之前，应明了本专利技术不会被局限于所述特定实施方案中，因为这些实施方案必然是多样的。亦应明了本说明书中所使用的用语仅是为了阐述特定实施方案，而非作为限制，因为本专利技术的范围将会被仅仅界定在所附的权利要求中。除非本文另有定义，连同本专利技术使用的科学和技术术语应具有本领域普通技术人员通常理解的含义。术语的含义和范围应当清晰，然而，在任何潜在不明确性的情况下，本文提供的定义优先于任何字典或外来定义。在本申请中，除非另有说明，“或”的使用意味着“和/或”。此外，术语“包括”及其他形式的使用是非限制性的。一般地，连同本文描述的细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学以及蛋白和核酸化学和杂交使用的命名法和其技术是本领域众所周知和通常使用的那些。除非另有说明，本专利技术的方法和技术一般根据本领域众所周知，且如各种一般和更具体的参考文献中所述的常规方法来进行，所述参考文献在本说明书自始至终引用和讨论。酶促反应和纯化技术根据制造商的说明书、如本领域通常实现的或如本文所述来进行。连同本文描述的分析化学、合成有机化学以及医学和药物化学使用的命名法、以及其实验室程序和技术是本领域众所周知和通常使用的那些。为了本专利技术可以更容易地理解，选择的术语在下文定义。术语“氨基酸”表示天然存在或非天然存在的梭基α-氨基酸。术语“氨基酸”用在本申请中可以包括天然存在的氨基酸和非天然存在的氨基酸。天然存在的氨基酸包括丙氨酸(三字母密码：A1a，单字母密码：A)，精氨酸(Arg，R)，天冬酰胺(Asn，N)，天冬氨酸(Asp，D)，半胱氨酸(Cys，c)，谷氨酰胺(G1n，Q)，谷氨酸(G1u，E)，甘氨酸(G1y，G)，组氨酸(His，H)，异亮氨酸(I1e，I)，亮氨酸(Leu，L)，赖氨酸(Lys，K)，甲硫氨酸(Met，M)，苯丙氨酸(Phe，F)，脯氨酸(Pro，P)，丝氨酸(Ser，S)，苏氨酸(Thr，T)，色氨酸(Trp，W)，酪氨酸(Tyr，Y)，和缬氨酸(Va1，V)。非天然存在的氨基酸包括但不限于α-氨基己二酸，氨基丁酸，瓜氨酸，高瓜氨酸，高亮氨酸，高精氨酸，羟基脯氨酸，正亮氨酸，吡啶基丙氨酸，肌氨酸等等。术语“分离的结合蛋白”是这样的蛋白，其由于衍生起源或来源不与天然结合的组分结合，所述天然结合的组分在其天然状态下与其伴随；基本上不含来自相同物种的其他蛋白；由来自不同物种的细胞表达；或在自然界中不存在。因此，化学合成或在不同于其天然起源的细胞的细胞系统中合成的蛋白将是与其天然结合的组分“分离的”。还可以通过分离，使用本领域众所周知的蛋白纯化技术，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种包含抗原结合结构域的分离的结合蛋白，其特征在于，所述抗原结合结构域包括选自下述氨基酸序列的至少一个互补决定区，或与下述氨基酸序列的互补决定区具有至少80％的序列同一性且与CKMB具有K

【技术特征摘要】
1.一种包含抗原结合结构域的分离的结合蛋白，其特征在于，所述抗原结合结构域包括选自下述氨基酸序列的至少一个互补决定区，或与下述氨基酸序列的互补决定区具有至少80％的序列同一性且与CKMB具有KD≤8.57×10-8mol/L的亲和力；
互补决定区CDR-VH1为G-X1-S-X2-T-T-G-X3-D-R，其中，
X1是I、V或L，X2是L或I，X3是S或T；
互补决定区CDR-VH2为I-X1-Y-S-G-T-X2-T-Y-N-P-S-X3-T-S，其中，
X1是F或Y，X2是L、V或I，X3是L、V或I；
互补决定区CDR-VH3为R-E-X1-T-Y-Y-X2-Y-G-Y-F-D-V-X3-G，其中，
X1是K或R，X2是P、A或G，X3是F或W；
互补决定区CDR-VL1为H-X1-S-X2-N-I-N-X3-W-L-S，其中，
X1是A或G，X2是N或Q，X3是I、V或L；
互补决定区CDR-VL2为K-X1-S-D-X2-H-T，其中，
X1是A或G，X2是I、V或L；
互补决定区CDR-VL3为Q-X1-Q-S-Y-X2-W-T-X3-G，其中，
X1是G或A，X2是G、A或P，X3是W或F。


2.根据权利要求1所述的结合蛋白，其特征在于，
所述互补决定区CDR-VH1中，X3是S；
所述互补决定区CDR-VH2中，X1是Y；
所述互补决定区CDR-VH3中，X3是W；
所述互补决定区CDR-VL1中，X1是A；
所述互补决定区CDR-VL2中，X1是A；
所述互补决定区CDR-VL3中，X1是G；
进一步地，所述互补决定区CDR-VH1中，X1是I，X2是L；
进一步地，所述互补决定区CDR-VH1中，X1是I，X2是I；
进一步地，所述互补决定区CDR-VH1中，X1是V，X2是L；
进一步地，所述互补决定区CDR-VH1中，X1是V，X2是I；
进一步地，所述互补决定区CDR-VH1中，X1是L，X2是L；
进一步地，所述互补决定区CDR-VH1中，X1是L，X2是I；
进一步地，所述互补决定区CDR-VH2中，X2是L，X3是L；
进一步地，所述互补决定区CDR-VH2中，X2是L，X3是V；
进一步地，所述互补决定区CDR-VH2中，X2是L，X3是I；
进一步地，所述互补决定区CDR-VH2中，X2是V，X3是L；
进一步地，所述互补决定区CDR-VH2中，X2是V，X3是V；
进一步地，所述互补决定区CDR-VH2中，X2是V，X3是I；
进一步地，所述互补决定区CDR-VH2中，X2是I，X3是L；
进一步地，所述互补决定区CDR-VH2中，X2是I，X3是V；
进一步地，所述互补决定区CDR-VH2中，X2是I，X3是I；
进一步地，所述互补决定区CDR-VH3中，X1是K，X2是P；
进一步地，所述互补决定区CDR-VH3中，X1是K，X2是A；
进一步地，所述互补决定区CDR-VH3中，X1是K，X2是G；
进一步地，所述互补决定区CDR-VH3中，X1是R，X2是P；
进一步地，所述互补决定区CDR-VH3中，X1是R，X2是A；
进一步地，所述互补决定区CDR-VH3中，X1是R，X2是G；
进一步地，所述互补决定区CDR-VL1中，X2是N，X3是I；<...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔鹏，何志强，孟媛，钟冬梅，周全兴，梁碧，游辉，马秋燕，李蔚芝，
申请(专利权)人：东莞市朋志生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44