基于链霉亲和素化胶乳的MMP-3抗体复合物及其试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种基于链霉亲和素化胶乳的MMP‑3抗体复合物及其试剂盒。具体地，本发明专利技术公开了一种MMP‑3单克隆抗体‑生物素‑链霉亲和素‑聚苯乙烯胶乳颗粒复合物，以及该复合物的制备方法和包含该复合物的检测试剂盒；所述试剂盒包含试剂R1和试剂R2；其中试剂R1含有缓冲液、电解质、增浊剂和防腐剂；试剂R2含有上述复合物、稳定剂、缓冲液、电解质、保护剂和防腐剂。本发明专利技术的试剂盒灵敏度高、稳定性好、精确度高，可用于各种生化分析仪器。

MMP-3 antibody complex and its kit based on streptavidin latex

【技术实现步骤摘要】
基于链霉亲和素化胶乳的MMP-3抗体复合物及其试剂盒
本专利技术属于体外诊断医学检验试剂领域，具体地本专利技术涉及一种基于链霉亲和素化胶乳的MMP-3(基质金属蛋白酶3)抗体复合物及其检测试剂盒。
技术介绍
基质金属蛋白酶(Matrixmetalloproteinases，MMPS)是一族需要Ca2+、Zn2+等金属离子作为辅助因子，具有降解细胞外基质为主功能的蛋白酶。其中基质金属蛋白酶的一个成员MMP-3(Matrixmetalloproteinase-3，MMP-3)与其组织抑制剂-1(Tissueinhibitorofmetalloproteinase-1，TIMP-1)共同维护细胞外基质稳态，达到动态平衡。有研究表明，检测MMP-3的水平与椎间盘突出和退变有关，并可作为检测强直性脊柱炎(AS)的有效指标。研究发现RA(类风湿关节炎)患者关节滑膜中MMP-3的含量明显增高，且关节滑膜中MMP-3蛋白和基因均处于过度表达状态，这提示MMP-3是降解软骨的指标之一，MMP-3是能提示RA患者中降解软骨的血清学指标。临床上MMP-3的正常人范围值在男：35.2～123.8ng/mL,女16.1～56.8ng/mL。胶乳增强免疫浊度测定法(简称LETIA)是近年来免疫检测领域出现的一种新的免疫检测技术，适用在自动、半自动生化分析仪以及荧光层析平台上，其基本原理是通过在高分子胶乳微球表面交联的抗体，而当抗原与交联有抗体的微球结合后，能够在短时间内迅速聚集在一起，改变反应溶液的吸光度。而且，反应液吸光度的改变与被测抗原的浓度在一定范围内具有线性关系，可用来反映被测抗原的浓度，这种凝集反应可以放大信号，便于半定量、定量检测。因此，如何制备出适合的胶乳(免疫胶乳)是胶乳增强免疫浊度测定的关键。目前所用的多数胶乳采用高分子材料加入氨基、羧基等表面官能团修饰的方法，这种单一官能团的胶乳粒子在偶联抗体时往往存在交联定向性差、容易发生凝集、形成试剂后与抗原反应无法形成3D结构等问题。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术上的不足，本专利技术的目的是提供一种稳定性强、非特异性结合降低、表面定向性好的胶乳颗粒。本专利技术的目的还在于提供一种灵敏度高、稳定性好且精度高的采用胶乳增强免疫比浊法测定MMP-3含量的试剂盒。本专利技术第一方面提供了一种MMP-3单克隆抗体-生物素-链霉亲和素-聚苯乙烯胶乳颗粒复合物，所述复合物由链霉亲和素化聚苯乙烯胶乳颗粒与生物素化MMP-3单克隆抗体通过生物素和链霉亲和素相连得到；其中，链霉亲和素化聚苯乙烯胶乳颗粒与生物素化MMP-3单克隆抗体的质量比为1：3。在另一优选例中，所述聚苯乙烯胶乳颗粒为羧化聚苯乙烯胶乳颗粒。在另一优选例中，所述聚苯乙烯胶乳颗粒为直径为200±30nm的聚苯乙烯胶乳颗粒。较佳地，为直径为200nm的聚苯乙烯胶乳颗粒。本专利技术第二方面本专利技术第一方面所述的的MMP-3单克隆抗体-生物素-链霉亲和素-聚苯乙烯胶乳颗粒复合物的制备方法，所述方法包括步骤：(1)将聚苯乙烯胶乳颗粒溶于在MES缓冲液中，得到胶乳溶液；将EDAC溶于水中，得到EDAC溶液；将上述胶乳溶液、EDAC溶液和链霉亲和素混合后进行反应，反应结束后，收集固体；然后将得到的固体重悬于MES缓冲液中，得到含有链霉亲和素化聚苯乙烯胶乳颗粒的MES缓冲液溶液；(2)用碳酸氢钠缓冲液对MMP-3单克隆抗体进行透析，得到MMP-3抗体溶液；将N-羟基琥珀酰亚胺生物素溶于DMSO中，得到N-羟基琥珀酰亚胺生物素溶液；将MMP-3抗体溶液和N-羟基琥珀酰亚胺生物溶液混合后进行反应，反应结束后，淬灭反应；然后用PBS缓冲液进行透析，得到含有生物素化MMP-3单克隆抗体的PBS缓冲液溶液；(3)将上述步骤得到的含有链霉亲和素化聚苯乙烯胶乳颗粒的MES缓冲液溶液与含有生物素化MMP-3单克隆抗体的PBS缓冲液溶液混合并进行交联，从而得到MMP-3单克隆抗体-生物素-链霉亲和素-聚苯乙烯胶乳颗粒复合物；其中，链霉亲和素化聚苯乙烯胶乳颗粒与生物素化MMP-3单克隆抗体的质量比为1：3。在另一优选例中，步骤(1)中，MES缓冲液为0.1M、pH为6.2的MES缓冲液。在另一优选例中，步骤(1)中，所述胶乳溶液的质量体积百分比浓度为0.5％。在另一优选例中，步骤(1)中，EDAC和水的质量体积比为0.03-0.04g/mL。在另一优选例中，步骤(1)中，链霉亲和素和聚苯乙烯胶乳颗粒的质量比为1:15。在另一优选例中，步骤(1)中，含有链霉亲和素化聚苯乙烯胶乳颗粒的MES缓冲液溶液的质量体积百分比浓度为0.5％。在另一优选例中，步骤(2)中，碳酸氢钠缓冲液为0.1mol/L、pH为8的碳酸氢钠缓冲液。在另一优选例中，步骤(2)中，MMP-3抗体溶液的浓度为5mg/ml。在另一优选例中，步骤(2)中，N-羟基琥珀酰亚胺生物素溶液的浓度为1mg/mL。在另一优选例中，步骤(2)中，N-羟基琥珀酰亚胺生物素和MMP-3单克隆抗体的质量比为1:25。在另一优选例中，步骤(2)还包括步骤：将得到的含有生物素化MMP-3单克隆抗体的PBS缓冲液溶液经过分子筛柱纯化，得到经纯化的含有生物素化MMP-3单克隆抗体的PBS缓冲液溶液。在另一优选例中，步骤(2)和步骤(3)之间还包括步骤：将经纯化的含有生物素化MMP-3单克隆抗体的PBS缓冲液溶液中加入了防腐剂。优选所述防腐剂为Proclin300。优选所述防腐剂的质量体积比浓度为1‰。在另一优选例中，步骤(2)中，经纯化的含有生物素化MMP-3单克隆抗体的PBS缓冲液溶液的浓度为5mg/mL。在另一优选例中，步骤(3)中，在交联反应结束后，还包括步骤：在反应混合物中，加入5％酪蛋白水溶液，使得酪蛋白的终浓度达到1％，进行封闭反应；封闭反应结束后，通过离心收集沉淀固形物，即得到MMP-3单克隆抗体-生物素-链霉亲和素-聚苯乙烯胶乳颗粒复合物。本专利技术第三方面提供了一种MMP-3检测试剂盒，所述试剂盒包含试剂R1和试剂R2；其中，所述试剂R1含有缓冲液、电解质、增浊剂和防腐剂；所述试剂R2含有权利要求1所述的MMP-3单克隆抗体-生物素-链霉亲和素-聚苯乙烯胶乳颗粒复合物、稳定剂、缓冲液、电解质、保护剂和防腐剂。在另一优选例中，所述缓冲液为pH为6.0的MES缓冲液。在另一优选例中，所述电解质各自独立地选自下组：氯化钠、氯化钾或其组合。在另一优选例中，所述电解质各自独立地为氯化钠。在另一优选例中，所述稳定剂选自下组：牛血清白蛋白、酪蛋白、脱脂奶粉或其组合。在另一优选例中，所述稳定剂为酪蛋白。在另一优选例中，所述增浊剂选自下组：聚乙二醇-8000、聚乙二醇-6000、聚乙二醇-4000或其组合。在另一优选例中，所述增浊剂为聚乙二醇-6000。在另一优选例中，所述防腐剂各自独立地选自下组：叠氮钠、Proclin本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种MMP-3单克隆抗体-生物素-链霉亲和素-聚苯乙烯胶乳颗粒复合物，其特征在于，所述复合物由链霉亲和素化聚苯乙烯胶乳颗粒与生物素化MMP-3单克隆抗体通过生物素和链霉亲和素相连得到；其中，链霉亲和素化聚苯乙烯胶乳颗粒与生物素化MMP-3单克隆抗体的质量比为1：3。/n

【技术特征摘要】
1.一种MMP-3单克隆抗体-生物素-链霉亲和素-聚苯乙烯胶乳颗粒复合物，其特征在于，所述复合物由链霉亲和素化聚苯乙烯胶乳颗粒与生物素化MMP-3单克隆抗体通过生物素和链霉亲和素相连得到；其中，链霉亲和素化聚苯乙烯胶乳颗粒与生物素化MMP-3单克隆抗体的质量比为1：3。


2.如权利要求1所述的MMP-3单克隆抗体-生物素-链霉亲和素-聚苯乙烯胶乳颗粒复合物的制备方法，其特征在于，所述方法包括步骤：
(1)将聚苯乙烯胶乳颗粒溶于在MES缓冲液中，得到胶乳溶液；将EDAC溶于水中，得到EDAC溶液；将上述胶乳溶液、EDAC溶液和链霉亲和素混合后进行反应，反应结束后，收集固体；然后将得到的固体重悬于MES缓冲液中，得到含有链霉亲和素化聚苯乙烯胶乳颗粒的MES缓冲液溶液；
(2)用碳酸氢钠缓冲液对MMP-3单克隆抗体进行透析，得到MMP-3抗体溶液；将N-羟基琥珀酰亚胺生物素溶于DMSO中，得到N-羟基琥珀酰亚胺生物素溶液；将MMP-3抗体溶液和N-羟基琥珀酰亚胺生物溶液混合后进行反应，反应结束后，淬灭反应；然后用PBS缓冲液进行透析，得到含有生物素化MMP-3单克隆抗体的PBS缓冲液溶液；
(3)将上述步骤得到的含有链霉亲和素化聚苯乙烯胶乳颗粒的MES缓冲液溶液与含有生物素化MMP-3单克隆抗体的PBS缓冲液溶液混合并进行交联，从而得到MMP-3单克隆抗体-生物素-链霉亲和素-聚苯乙烯胶乳颗粒复合物；其中，链霉亲和素化聚苯乙烯胶乳颗粒与生物素化MMP-3单克隆抗体的质量比为...

【专利技术属性】
技术研发人员：熊盛，周伟，毛晓波，石庆同，
申请(专利权)人：上海捷门生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31