一种基于循环酶速率法测定HCY的试剂盒及其制备使用方法技术

本发明专利技术涉及生物检测试剂制备领域，提供了一种基于循环酶速率法测定HCY的试剂盒，包括试剂R1和试剂R2。试剂R1包括缓冲液、S‑腺苷甲硫氨酸、NADH、三(2‑羧乙基)膦氯化氢、防腐剂、稳定剂、表面活性剂。试剂R2包括缓冲液、无机盐、S‑腺苷同型半胱氨酸水解酶、a‑酮戊二酸、谷氨酸脱氢酶、HCY甲基转移酶、腺苷脱氨酶、防腐剂、稳定剂、表面活性剂。本发明专利技术还提供了一种基于循环酶速率法测定HCY的试剂盒的制备使用方法。本发明专利技术试剂盒用于测定HCY的含量，其操作简便、检测速度快、精密度高、易于自动化，且适于大批量标本同时检测。

A kit for Hcy determination based on circulating enzyme rate method and its preparation and use

【技术实现步骤摘要】
一种基于循环酶速率法测定HCY的试剂盒及其制备使用方法
本专利技术涉及生物检测试剂制备领域，尤其涉及一种基于循环酶速率法测定HCY的试剂盒及其制备使用方法。
技术介绍
同型半胱氨酸(HCY)在血浆中分两种形式存在：“氧化型同型半胱氨酸”和“还原型同型半胱氨酸”。还原型同型半胱氨酸中游离的巯基具有高度活性，其容易氧化，从而形成二硫化物的形式。氧化型是同型半胱氨酸在血浆中的主要存在形式，以二硫化物形式或是与蛋白质共价结合的形式存在。HCY可使氧化自由基大量产生引起内皮细胞损伤，使脂质过氧化和氧化型的低密度增加，从而对血管造成的损伤和破坏。在HCY的作用下，破损的血管壁生成了斑块，促进动脉粥状硬化。HCY主要临床应用如下：1、心血管病防治(1)HCY升高与动脉粥样硬化(AS)的关系1969年就曾有人从尸检中发现2例血浆HCY浓度超过正常人几十倍的病人存在广泛的动脉粥样硬化和动脉血栓。临床上发现，高胱氨酸尿症病人早年多因全身动脉粥样硬化和血栓形成死于脑梗塞和心肌梗塞，这与血中HCY升高有关。(2)HCY水平与心血管疾病的危险性通过血管内超声观察AS斑块情况观察到，当血浆HCY浓度<8umol/L时，斑块较小(0.17-0.76mm)；当血浆HCY浓度>8umol/L时，斑块明显增大(0.27-1.04，p<0.001)，表明与冠状动脉病变程度呈正相关。轻度、中度HCY水平升高可使心血管疾病死亡危险性增加4-6倍，血浆总HCY水平每升高5μmol/L，则CHD危险性男性增加60％，女性增加80％。2、HCY与神经系统疾病脑血管病是目前严重危害人类健康的主要疾病。近年来，随着分子生物学的深入发展，HCY在脑卒中的作用日益受到重视，普遍认为血浆HCY>15umol/L为高HCY血症，普通人群血浆HCY水平升高者只有不到5％，而在脑卒中患者中可达30-40％HCY的升高是与中风有重要关联的危险因子。美国最新的数据显示中年后期男性中风发病率，处于55-64这个年龄段的男性相对于45-54年龄段的男性而言，前者患中风的几率是后者的三倍。高HCY是造成老年痴呆症与帕金森的重要因素。3、糖尿病及并发症防治国内外大量研究结果显示，血浆HCY水平可作为2-型糖尿病患者患大血管疾病的独立危险因素。监测糖尿病患者HCY水平，有利于对其预后的评估。HCY升高在糖尿病伴肾脏、视网膜及血管并发症的患者更为严重。高HCY血症也能促进糖尿病微血管并发症的发生与发展。4、慢性肾衰并发症防治慢性肾功能衰竭(CRF)患者普遍有高HCY血症，其发生率是正常人33倍。尿毒症时，一方面肝脏蛋氨酸腺苷转移酶活性升高，导致S-腺苷蛋氨酸水平升高；另一方面肾功能下降，使HCY代谢的必需产物-丝氨酸合成减少，导致HCY代谢受抑制引起HCY的堆积。5、肺血栓栓塞症防治研究表明，高HCY血症(>20μmol/L)使得深静脉血栓的危险性明显增大，高HCY血症可使深静脉血栓发生率增加4倍。高HCY是我国汉族人群肺血栓栓塞症(PTE)发病的一个独立的危险因子，降低HCY可降低国人静脉血栓栓塞症(VTE)的危险。目前，HCY的常用检测方法要有色谱法(HPLC、GC-MS)、荧光偏振免疫检测法(FPLA)、酶联免疫法、化学发光法和循环酶法。其中，色谱法具有很高的准确度和稳定性，但其处理标本的能力有限，临床实验室未配备设备及操作人员，常作为同型半胱氨酸检测的参考方法；荧光偏振免疫检测法成本高，需专用仪器；酶联免疫法灵敏度高、特异性强，但其精密度差，耗费人力，操作时间长，不适宜做单个标本和急诊标本；化学发光法成本高，需专用仪器；循环酶法可在大型生化分析仪上使用，操作简单，结果准确可靠，且可和其他参数进行同时分析，是目前最为常用的临床检测方法。据此，目前急需一种基于循环酶速率法测定HCY的试剂盒及其制备使用方法。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种操作简便、检测速度快、精密度高、易于自动化，且适于大批量标本同时检测的基于循环酶速率法测定HCY的试剂盒及其制备使用方法。本专利技术采用以下技术方案解决上述技术问题：一种基于循环酶速率法测定HCY的试剂盒，包括试剂R1和试剂R2；所述试剂R1包括的成分及相应含量为：缓冲液5-10g/L，S-腺苷甲硫氨酸(SAM)5-15g/L，NADH10-30g/L，三(2-羧乙基)膦氯化氢(TCEP)10-25g/L，防腐剂1-3mL/L，稳定剂3-14g/L，表面活性剂0.5-2.5mL/L，溶剂为纯化水；所述试剂R2包括的成分及相应含量为：缓冲液2-10g/L，无机盐5-15g/L，S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(SAHase)2-8.5g/L，a-酮戊二酸5-10g/L，谷氨酸脱氢酶(GLDH)2-11g/L，HCY甲基转移酶(HMTase)0.5-5g/L，腺苷脱氨酶(ADA)0.5-1.5g/L，防腐剂1-3mL/L，稳定剂20-46g/L，表面活性剂1-7mL/L，溶剂为纯化水。作为本专利技术的优选方式之一，在所述试剂R1中：所述缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、甘氨酸缓冲液、2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸缓冲液中的一种；所述防腐剂为Proclin300、庆大霉素和硫柳汞中的一种；所述稳定剂为BSA、甘氨酸和蔗糖中的一种；所述表面活性剂为吐温-20、吐温-80、曲拉通X-100中的一种或多种。作为本专利技术的优选方式之一，所述试剂R1的pH为6.1-6.6。作为本专利技术的优选方式之一，在所述试剂R2中：所述缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、甘氨酸缓冲液、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸缓冲液中的一种；所述无机盐为氯化钠、氯化镁、氯化钾、氯化锌、氯化钙中的一种或多种；所述防腐剂为Proclin300、庆大霉素和硫柳汞中的一种；所述稳定剂为BSA、甘氨酸和蔗糖中的一种；所述表面活性剂为吐温-20、吐温-80、曲拉通X-100中的一种或多种。作为本专利技术的优选方式之一，所述试剂R2的pH为6.5-7.7。一种上述基于胶乳增强免疫比浊法测定HCY的试剂的制备方法，包括如下步骤：(1)配制试剂R1：按照试剂R1的组分含量称取各原料，并置于装有0.7L纯化水的烧杯中，依次称取溶解，搅拌均匀；然后，将pH调节到目标值；最后，将溶液转移到容量瓶中定溶至1L，再用0.22um滤膜过滤，贴上标签，置于2-8℃保存；(3)配制试剂R2：按照试剂R2的组分含量称取各原料，并置于装有0.7L纯化水的烧杯中，依次称取溶解，搅拌均匀；然后，将pH调节到目标值；最后，将溶液转移到容量瓶中定溶至1L，再用0.22um滤膜过滤，贴上标签，置于2-8℃保存。一种上述基于循环酶速率法测定HCY的试本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于循环酶速率法测定HCY的试剂盒，其特征在于，包括试剂R1和试剂R2；/n所述试剂R1包括的成分及相应含量为：缓冲液5-10g/L，S-腺苷甲硫氨酸5-15g/L，NADH10-30g/L，三(2-羧乙基)膦氯化氢10-25g/L，防腐剂1-3mL/L，稳定剂3-14g/L，表面活性剂0.5-2.5mL/L，溶剂为纯化水；/n所述试剂R2包括的成分及相应含量为：缓冲液2-10g/L，无机盐5-15g/L，S-腺苷同型半胱氨酸水解酶2-8.5g/L，a-酮戊二酸5-10g/L，谷氨酸脱氢酶2-11g/L，HCY甲基转移酶0.5-5g/L，腺苷脱氨酶0.5-1.5g/L，防腐剂1-3mL/L，稳定剂20-46g/L，表面活性剂1-7mL/L，溶剂为纯化水。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于循环酶速率法测定HCY的试剂盒，其特征在于，包括试剂R1和试剂R2；
所述试剂R1包括的成分及相应含量为：缓冲液5-10g/L，S-腺苷甲硫氨酸5-15g/L，NADH10-30g/L，三(2-羧乙基)膦氯化氢10-25g/L，防腐剂1-3mL/L，稳定剂3-14g/L，表面活性剂0.5-2.5mL/L，溶剂为纯化水；
所述试剂R2包括的成分及相应含量为：缓冲液2-10g/L，无机盐5-15g/L，S-腺苷同型半胱氨酸水解酶2-8.5g/L，a-酮戊二酸5-10g/L，谷氨酸脱氢酶2-11g/L，HCY甲基转移酶0.5-5g/L，腺苷脱氨酶0.5-1.5g/L，防腐剂1-3mL/L，稳定剂20-46g/L，表面活性剂1-7mL/L，溶剂为纯化水。


2.根据权利要求1所述的基于循环酶速率法测定HCY的试剂盒，其特征在于，在所述试剂R1中：
所述缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、甘氨酸缓冲液、2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸缓冲液中的一种；
所述防腐剂为Proclin300、庆大霉素和硫柳汞中的一种；
所述稳定剂为BSA、甘氨酸和蔗糖中的一种；
所述表面活性剂为吐温-20、吐温-80、曲拉通X-100中的一种或多种。


3.根据权利要求1所述的基于循环酶速率法测定HCY的试剂盒，其特征在于，所述试剂R1的pH为6.1-6.6。


4.根据权利要求1所述的基于循环酶速率法测定HCY的试剂盒，其特征在于，在所述试剂R2中：
所述缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、甘氨酸缓冲液、3-(N-吗啉基)-2-...

【专利技术属性】
技术研发人员：芮双印，任传伍，
申请(专利权)人：安徽大千生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34