一种肌酸激酶同工酶测定试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种肌酸激酶同工酶测定试剂盒，涉及生物检测技术领域。包括彼此独立的试剂R1和试剂R2，其成分为：试剂R1：咪唑醋酸；D‑葡萄糖；醋酸镁L；己糖激酶；N‑乙酰半胱氨酸；二磷酸腺苷(ADP)；氧化型辅酶Ⅱ(NADP+)；叠氮钠；乙二胺四乙酸(EDTA)；葡萄糖‑6‑磷酸脱氢酶；腺苷5’‑一磷酸双钠盐(AMP)；二腺苷五磷酸盐(P

A kit for the determination of creatine kinase isoenzyme

【技术实现步骤摘要】
一种肌酸激酶同工酶测定试剂盒
本专利技术涉及生物检测
，具体涉及一种肌酸激酶同工酶测定试剂盒。
技术介绍
肌酸激酶(CreatineKinase，CK)是细胞能量代谢的关键酶，其活性测定是临床骨骼肌疾病、心肌疾病的诊断依据。CK由M、B亚基组成，有三种亚基(同工酶)组合CK-MM、CK-MB、CK-BB，肌肉型(MM)主要存在于各种肌肉细胞中，脑型(BB)主要存在于脑细胞中，杂化型(MB)主要存在于心肌细胞中，肌酸激酶MB同工酶(CK-MB)是心肌酶谱中最有特异性的酶。肌酸激酶的同工酶在临床诊断中有十分重要的意义，在各种病变包括肌肉萎缩和心肌梗塞发生时，人的血清中肌酸激酶水平迅速提高，认为在心肌梗塞的诊断中测定肌酸激酶的活性比做心电图更为可靠。心肌梗死时，肌酸激酶在起病6小时内升高，24小时达高峰，3-4日内恢复正常。其中肌酸激酶的同工酶CK-MB诊断的特异性最高。肌酸激酶因其具有重要的生理功能和临床应用价值已引起人们广泛的重视和深入的研究。临床上用于检测肌酸激酶同工酶(CK-MB)的方法有免疫比浊法、酶联免疫吸附法和免疫抑制法等。酶联免疫吸附法检测耗时且操作复杂，不适用于大批量快速检测。胶乳增强免疫比浊法反应后会产生胶乳颗粒物的沉淀，不利于仪器的清洗，且检测精度差。目前，常规的CK-MB的测定主要采用的是免疫抑制法，它测定的是CK-MB的活力。CK-BB在正常人体内的含量微乎其微，因此该法忽略CK-BB的存在，假设血清中只有CK-MM和CK-MB。在试剂中加入抗CK-M亚单位的多克隆抗体，从而抑制CK-MM和CK-MB中M亚单位活性，测得结果相当于CK-MB中B亚单位活性，将结果乘以2即相当于CK-MB活力。此方法迅速、简洁、省时、有较高的敏感性，但是在检测过程中影响因素较多，因此如何对试剂盒进行改进从而更好的发挥此方法的便捷性，成为研究的重要方向。中国专利申请201610359612.9中公开了一种测定肌酸激酶同工酶(CK-MB)的试剂盒。该专利技术针对现有技术中检测肌酸激酶同工酶存在过程复杂、不适用于大批量快速检测的问题，提出以下的解决方案：一种测定肌酸激酶同工酶(CK-MB)的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，其中试剂R1含有缓冲液20-180mmol/L、葡萄糖10-60mmol/L、ADP0.1-4.0mmol/L、NADP1-7mmol/L、NAC5-35mmol/L、HK0.01-4.00KU/L、G-6-PD0.01-3.00KU/L、其余为纯化水；其中试剂R2包含缓冲液20-180mmol/L、CrP10-50mmol/L、防腐剂0.01-1.0g/L、抗CK-M抗体>2100U/L、其余为纯化水。该专利技术具有准确度高、操作方便等优点，该试剂盒中所含试剂种类较多，因此会导致试剂盒稳定性较差，试剂盒的稳定性是评价试剂盒的重要性能之一，而本专利技术并没有对试剂盒的稳定性进行研究。中国专利申请201811323078.1中公开了一种肌酸激酶及其同工酶测定试剂及其试剂盒，肌酸激酶及其同工酶测定试剂含有离子液体1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐，用于CK或者CK同工酶测定的试剂盒由离子液体1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐、活化剂、螯合剂、防腐剂、缓冲液及CK或者CK同工酶活性测定试剂组成。该专利技术可用于全自动生化分析仪检测，操作简便，可在CK及其同工酶测定试剂长期保存后仍保证试剂测定的准确性，可显著延长试剂使用期限，但是由于离子液体的存在会使检测试剂盒中存在多种离子，因此会在一定程度上影响检测的精密性。因此，开发一种准确度高、精密度好、稳定性强的肌酸激酶同工酶测定试剂盒，成为本领域研究的重中之重，本专利技术在实施过程中意外地发现控制试剂盒中各组分之间的质量比可以在不减弱试剂盒检测准确性以及试剂稳定性的前提下，提高了检测的精密性。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是在不减弱试剂盒检测准确性以及试剂稳定性的前提下，提高了检测的精密性，因此提供了一种准确度高、精密度好、稳定性强的肌酸激酶同工酶测定试剂盒。本专利技术解决上述技术问题提供的技术方案是：本专利技术公开了一种肌酸激酶同工酶测定试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2，其的成分及相应含量为：试剂R1：优选地，所述的肌酸激酶同工酶测定试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2，其成分及相应含量为：试剂R1：试剂R2：磷酸肌酸25-40mmol/L；叠氮钠0.8-1g/L；抗人CK-M抗体1500-2000μg/L。再优选地，所述的肌酸激酶同工酶测定试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2，其成分及相应含量为：试剂R2：磷酸肌酸30-40mmol/L；叠氮钠0.9-1g/L；抗人CK-M抗体1600-1800μg/L。本专利技术在实施过程中意外地发现控制试剂盒中各组分之间的质量比可以在不减弱试剂盒检测准确性以及试剂稳定性的前提下，提高了检测的精密性，本专利技术提供的试剂盒不需要添加其他稳定剂，从而在一定程度上消除了添加的组分对试剂盒稳定性的影响。其中，所述的己糖激酶与葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的浓度比为1-3：1，优选为1-2：1，再优选为2：1。所述的N-乙酰半胱氨酸与腺苷5’-一磷酸双钠盐的浓度比为2-14：1，优选为4-10：1；再优选为4-6：1，再优选为5：1。所述的醋酸镁和乙二胺四乙酸的浓度比为1-5：1；优选为1-3：1，再优选为3：1。优选地，所述的肌酸激酶同工酶测定试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2，其成分及相应含量为：试剂R1：试剂R2：磷酸肌酸35mmol/L；叠氮钠1g/L；抗人CK-M抗体1800μg/L。另一方面，本专利技术还提供了上述肌酸激酶同工酶测定试剂盒的使用方法：本试剂盒适用于杜邦AR、日立7080/7170/7600/7180、迈瑞BS320、迪瑞CS600、雅培C8000/16000、东芝TBA40FR/2000FR/FX8、奥林巴斯AU2700、贝克曼AU5800/DXC800、西门子ADVIA2400、罗氏C501/701/702、罗氏P800等全自动生化分析仪。该测定试剂盒的测定方法为速率法，反应方向为升反应(1)将200μL试剂R1和10μL待测样本混合均匀，37℃孵育5min后得到反应液1，测定吸光度A1，测定主波长为340nm、次波长为546nm；(2)加入50μL试剂R2混合均匀，反应2min，得到反应液2，测定吸光度A2，测定主波长为340nm、次波长为546nm；(3)按照步骤(1)-(2)，对不同浓度的肌酸激酶同工酶标准品的吸光度进行测定，得到吸光度A空白和A标准；(4)以标准品的吸光度变化值ΔA(A标准-A空白)为纵坐标，以相应的标准品浓度c为横坐标，绘制标准曲线，得到标准曲线方程；...

【技术保护点】
1.一种肌酸激酶同工酶测定试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2，其成分及相应含量为：/n试剂R1：/n

【技术特征摘要】
1.一种肌酸激酶同工酶测定试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2，其成分及相应含量为：
试剂R1：



试剂R2：
磷酸肌酸20-50mmol/L；
叠氮钠0.5-2g/L；
抗人CK-M抗体1000-3000μg/L。


2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2，其成分及相应含量为：
试剂R1：






试剂R2：
磷酸肌酸25-40mmol/L；
叠氮钠0.8-1g/L；
抗人CK-M抗体1500-2000μg/L。


3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2，其成分及相应含量为：



试剂R2：
磷酸肌酸30-40mmol/L；
叠氮钠0.9-1g/L；
抗人CK-M抗体1600-1800μg/L。


4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述的己糖激酶与葡...

【专利技术属性】
技术研发人员：商忆文，林耀文，
申请(专利权)人：浙江夸克生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33