结合到RSV G蛋白的人类抗体制造技术

本发明专利技术提供了结合到RSV的G蛋白并且能够中和RSV的分离的抗体和抗原结合片段。

Human antibody binding to RSV G protein

【技术实现步骤摘要】
结合到RSVG蛋白的人类抗体本申请是2014年4月14日提交的题为“结合到RSVG蛋白的人类抗体”的中国专利申请201480021357.6的分案申请。专利
本专利技术涉及医学。本专利技术尤其涉及特异性结合到呼吸道合胞体病毒(RSV)的附着糖蛋白(G蛋白)并且中和RSV的抗体和抗原结合片段。本专利技术还涉及使用抗RSV抗体的诊断、预防以及治疗方法。专利技术背景人类呼吸道合胞体病毒(RSV)是副粘病毒科(Paramyxoviridae)的一种负义单链RNA病毒，该科还包括常见呼吸道病毒，如导致麻疹和腮腺炎的呼吸道病毒。存在两种原始RSV亚型：亚型A和亚型B。RSV在上呼吸道中复制并且然后蔓延到下气道，导致细支气管炎或肺炎。该病毒引起炎症、气道水肿、粘液产生增加以及呼吸上皮破裂。估计全世界有6400万例呼吸道疾病和160,000例死亡可归因于RSV诱发的疾病。严重RSV感染最通常出现在儿童和婴儿中、尤其早产儿中。潜在健康问题(如慢性肺病或先天性心脏病)可能会显著增加重病的风险。RSV感染还可能会在年老者、患有慢性肺病的个体以及免疫功能不全的成人(如骨髓移植接受者)中引起重病。已经研究若干用以预防和治疗RSV感染的方法。从供体分离的静脉注射免疫球蛋白(RSV-IGIV；)和单克隆抗体帕利珠单抗已经得到批准用于在高风险早产儿中进行RSV预防。然而，用于RSV的疫苗或可商购治疗仍不可获得。仅利巴韦林得到批准用于治疗RSV感染。为了有效用于治疗RSV感染，高剂量、重复给药和/或大量的抗体产品(如帕利珠单抗)因低有效性而是所需的。RSV具有两种主要表面糖蛋白，F和G。F蛋白介导融合，使得病毒进入到细胞的细胞质中并且促进体外合胞体的形成。F蛋白序列在RSV株之中是充分(约90％)保守的(约翰逊(Johnson)和柯林斯(Collins)，《普通病毒学杂志》(JGenVirol)，(1988)69:2623-2628)。唯一市售的单克隆抗体帕利珠单抗针对RSV的F蛋白。RSV的G蛋白是一种严重糖基化并且充当附着蛋白的表面蛋白。与F蛋白对比，G蛋白在病毒株中除中央保守域(CCD)外相当可变，该中央保守域包含RSVA2株的G蛋白的氨基酸残基153-184或其他病毒株中的相对应的氨基酸残基。中央保守域和相邻区(残基145-193)以刚性和重O-糖基化粘蛋白样区为边界。中央保守域的N末端那一半含有一个在多于700种病毒株之中保守的小区。C末端那一半含有4个以1-4、2-3布局连接的保守半胱氨酸并且折叠为一个胱氨酸套索。尽管使用针对G蛋白的抗体进行的被动免疫一般由于在病毒株中缺乏序列保守性而被视为不切实际的，但中和结合到RSVG蛋白的单克隆抗体是已知的。安德森L.J.(Anderson,L.J.)等人(《病毒学杂志》(J.Virol.)(1988)62:4232-4238)描述了F和G鼠类单克隆抗体混合物的中和能力，这些抗体之一与G蛋白结合(即131-2G)相关。这种抗体的抗原位点后来由萨伦德(Sullender)定义(《病毒学》(Virol.)(1995)209:70-79)。发现这种抗体结合代表RSV的主要病毒株的RSV组A和B。另外，WO2009/055711披露了与RSVA2的G蛋白的位置160-176内的保守基元具有免疫反应性并且针对RSVA和B亚型具有中和活性的抗体，如3D3和3G12。这些抗体已经显示识别中央保守域中的线性表位，但尚未在优选动物模型(即棉花大鼠)中进行测试用于评估RSV抗体和疫苗。鉴于特别是在幼儿和年老者中由RSV引起的呼吸道疾病的严重程度，持续需要用以预防和治疗RSV感染的有效手段。专利技术概述本专利技术提供了特异性结合到RSVG蛋白并且能够中和RSV的分离的抗体和其抗原结合片段。这些抗体和抗原结合片段优选地能够特异性结合到并且中和亚型A和B的RSV。优选地，这些抗体是人类抗体。这些抗体结合到该RSVG蛋白的中央保守未糖基化区(也称为中央保守域，CCD)中的表位。这些抗体和抗原结合片段对于该G蛋白具有高亲和力并且具有有力的中和能力。这些本专利技术的抗体和抗原结合片段单独和与其他诊断、预防和/或治疗剂组合可用作诊断、预防和/或治疗剂。本专利技术进一步提供了组合物，这些组合物包含一种或多种本专利技术的抗体和/或其抗原结合片段。本专利技术还提供了使用这些抗RSV抗体的诊断、预防以及治疗方法。预防和治疗方法包括将这些抗RSV抗体和/或其抗原结合片段给予人类受试者用于预防或治疗一种RSV感染和RSV介导的疾病或病状和/或改善一种RSV感染的一种或多种症状。多种不同抗RSV抗体和/或其抗原结合片段和/或与其他抗RSV抗体的组合可以用于组合疗法。还提供了包含这些抗RSV抗体和/或其抗原结合片段与其他预防或治疗剂组合的组合物。本专利技术还提供了编码这些抗体或其抗原结合片段的核酸分子。这些本专利技术的抗体是独特的，在于在一种体外中和分析中，针对RSVA和B型这些抗体比任何已知抗RSVG抗体、特别是比已知抗RSVG单克隆抗体3D3更有力。这些本专利技术的抗体结合到该RSVG蛋白上的独特表位。在某些实施例中，这些抗体包含一个在其氨基酸序列中包含一种CXXXXC基元的重链CDR3。在某些实施例中，这些抗体和其抗原结合片段是独特的，在于它们与抗RSVF抗体叠加和/或协同地起作用。附图说明图1示出了针对RSVGa和RSVGb蛋白的结合特征曲线。在ELISA分析中测试IgG结合到重组RSVGa和Gb蛋白的能力。开口圈(虚线)表示结合到Ga(RSVA/长)并且闭口圈(实线)表示结合到Gb(RSVB/B1)。图2示出了针对RSV-A和RSV-B株的中和特征曲线。在中和分析中测试IgG中和RSV-A和RSV-B株的能力。开口圈(虚线)表示中和RSV-A(RSVA/A2)并且闭口圈(实线)表示中和RSV-B(RSVB/18537)。图3示出了RSVG特异性单克隆抗体与RSVG肽的结合(ELISA)。跨越中央保守域的短和长RSVG肽(表15)在一种ELISA中用于结合实验，其中RSVG特异性mAb的浓度不同：CB017.5(闭口深灰色圈)、CB030.1(开口深灰色圈)或无mAb(闭口浅灰色圈)。图4：通过PepScan进行的最小表位定位。RSVG蛋白特异性抗体与中央区(RSV-GA型和B型的残基145-201)的所有完全重叠5聚体(mer)、8聚体、10聚体、14聚体、18聚体、25聚体以及32聚体肽的结合活性。与一种肽的结合活性以与PepScanELISA信号成比例的垂直线形式示出。图5：RSVG蛋白中央区的丙氨酸扫描(PepScan)。对应于A型(左图)和B型(右图)的RSV-G中央域的残基161-192的肽的所有位置处的丙氨酸取代。A型的位置180处的丙氨酸被甘氨酸取代。初始肽的反应性以灰色条形式示出。图6示出了单克隆抗体与RSVG蛋白中央区的天然存在的变体的结合。mAbCB017.5和CB030.1与对应于可用的A型(上图)和B型(本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.能够特异性结合到呼吸道合胞体病毒(RSV)的G蛋白并且能够中和RSV A和B株的抗体，其中该抗体结合到该RSV G蛋白的中央保守域内的一种表位，其中所述表位包含RSV G蛋白RSV A2株的氨基酸160-169的一个或多个氨基酸残基和氨基酸184-192的一个或多个氨基酸残基或其他病毒株中的相对应的氨基酸，其中该抗体选自下组，该组由以下各项组成：/na)一种抗体，包含SEQ ID NO:1的重链CDR1区、SEQ ID NO:2的重链CDR2区、以及SEQ IDNO:3的重链CDR3区，SEQ ID NO:4的轻链CDR1区、SEQ ID NO:5的轻链CDR2区、以及SEQ IDNO:6的轻链CDR3区；/nb)一种抗体，包含SEQ ID NO:13的重链CDR1区、SEQ ID NO:14的重链CDR2区、以及SEQID NO:15的重链CDR3区，SEQ ID NO:16的轻链CDR1区、SEQ ID NO:17的轻链CDR2区、以及SEQ ID NO:18的轻链CDR3区；/nc)一种抗体，包含SEQ ID NO:19的重链CDR1区、SEQ ID NO:20的重链CDR2区、以及SEQID NO:21的重链CDR3区，SEQ ID NO:22的轻链CDR1区、SEQ ID NO:23的轻链CDR2区、以及SEQ ID NO:24的轻链CDR3区；/nd)一种抗体，包含SEQ ID NO:25的重链CDR1区、SEQ ID NO:26的重链CDR2区、以及SEQID NO:27的重链CDR3区，SEQ ID NO:28的轻链CDR1区、SEQ ID NO:29的轻链CDR2区、以及SEQ ID NO:30的轻链CDR3区；/ne)一种抗体，包含SEQ ID NO:31的重链CDR1区、SEQ ID NO:32的重链CDR2区、以及SEQID NO:33的重链CDR3区，SEQ ID NO:34的轻链CDR1区、SEQ ID NO:35的轻链CDR2区、以及SEQ ID NO:36的轻链CDR3区；/nf)一种抗体，包含SEQ ID NO:37的重链CDR1区、SEQ ID NO:38的重链CDR2区、以及SEQID NO:39的重链CDR3区，SEQ ID NO:40的轻链CDR1区、SEQ ID NO:41的轻链CDR2区、以及SEQ ID NO:42的轻链CDR3区；/ng)一种抗体，包含SEQ ID NO:43的重链CDR1区、SEQ ID NO:44的重链CDR2区、以及SEQID NO:45的重链CDR3区，SEQ ID NO:46的轻链CDR1区、SEQ ID NO:47的轻链CDR2区、以及SEQ ID NO:48的轻链CDR3区；/nh)一种抗体，包含SEQ ID NO:49的重链CDR1区、SEQ ID NO:50的重链CDR2区、以及SEQID NO:51的重链CDR3区，SEQ ID NO:52的轻链CDR1区、SEQ ID NO:53的轻链CDR2区、以及SEQ ID NO:54的轻链CDR3区；i)一种抗体，包含SEQ ID NO:55的重链CDR1区、SEQ ID NO:56的重链CDR2区、以及SEQ ID NO:57的重链CDR3区，SEQ ID NO:58的轻链CDR1区、SEQ ID NO:59的轻链CDR2区、以及SEQ ID NO:60的轻链CDR3区；/nj)一种抗体，包含SEQ ID NO:61的重链CDR1区、SEQ ID NO:62的重链CDR2区、以及SEQID NO:63的重链CDR3区，SEQ ID NO:64的轻链CDR1区、SEQ ID NO:65的轻链CDR2区、以及SEQ ID NO:66的轻链CDR3区；以及/nk)一种抗体，包含SEQ ID NO:67的重链CDR1区、SEQ ID NO:68的重链CDR2区、以及SEQID NO:69的重链CDR3区，SEQ ID NO:70的轻链CDR1区、SEQ ID NO:71的轻链CDR2区、以及SEQ ID NO:72的轻链CDR3区。/n...

【技术特征摘要】
20130805 EP 13179242.6;20130415 US 61/812,1181.能够特异性结合到呼吸道合胞体病毒(RSV)的G蛋白并且能够中和RSVA和B株的抗体，其中该抗体结合到该RSVG蛋白的中央保守域内的一种表位，其中所述表位包含RSVG蛋白RSVA2株的氨基酸160-169的一个或多个氨基酸残基和氨基酸184-192的一个或多个氨基酸残基或其他病毒株中的相对应的氨基酸，其中该抗体选自下组，该组由以下各项组成：
a)一种抗体，包含SEQIDNO:1的重链CDR1区、SEQIDNO:2的重链CDR2区、以及SEQIDNO:3的重链CDR3区，SEQIDNO:4的轻链CDR1区、SEQIDNO:5的轻链CDR2区、以及SEQIDNO:6的轻链CDR3区；
b)一种抗体，包含SEQIDNO:13的重链CDR1区、SEQIDNO:14的重链CDR2区、以及SEQIDNO:15的重链CDR3区，SEQIDNO:16的轻链CDR1区、SEQIDNO:17的轻链CDR2区、以及SEQIDNO:18的轻链CDR3区；
c)一种抗体，包含SEQIDNO:19的重链CDR1区、SEQIDNO:20的重链CDR2区、以及SEQIDNO:21的重链CDR3区，SEQIDNO:22的轻链CDR1区、SEQIDNO:23的轻链CDR2区、以及SEQIDNO:24的轻链CDR3区；
d)一种抗体，包含SEQIDNO:25的重链CDR1区、SEQIDNO:26的重链CDR2区、以及SEQIDNO:27的重链CDR3区，SEQIDNO:28的轻链CDR1区、SEQIDNO:29的轻链CDR2区、以及SEQIDNO:30的轻链CDR3区；
e)一种抗体，包含SEQIDNO:31的重链CDR1区、SEQIDNO:32的重链CDR2区、以及SEQIDNO:33的重链CDR3区，SEQIDNO:34的轻链CDR1区、SEQIDNO:35的轻链CDR2区、以及SEQIDNO:36的轻链CDR3区；
f)一种抗体，包含SEQIDNO:37的重链CDR1区、SEQIDNO:38的重链CDR2区、以及SEQIDNO:39的重链CDR3区，SEQIDNO:40的轻链CDR1区、SEQIDNO:41的轻链CDR2区、以及SEQIDNO:42的轻链CDR3区；
g)一种抗体，包含SEQIDNO:43的重链CDR1区、SEQIDNO:44的重链CDR2区、以及SEQIDNO:45的重链CDR3区，SEQIDNO:46的轻链CDR1区、SEQIDNO:47的轻链CDR2区、以及SEQIDNO:48的轻链CDR3区；
h)一种抗体，包含SEQIDNO:49的重链CDR1区、SEQIDNO:50的重链CDR2区、以及SEQIDNO:51的重链CDR3区，SEQIDNO:52的轻链CDR1区、SEQIDN...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·瓦迪亚，R·A·威廉森，J·P·M·朗热戴克，G·帕斯夸尔，A·万特沃特，
申请(专利权)人：扬森疫苗与预防公司，
类型：发明
国别省市：荷兰;NL