一种用于检测可溶性转铁蛋白受体sTfR的测定试剂盒及其制备使用方法技术

本发明专利技术提供了一种用于检测可溶性转铁蛋白受体sTfR的测定试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分；试剂R1包括缓冲液、表面活性剂、防腐剂、螯合剂，溶剂为去离子水；试剂R2包括缓冲液、抗sTfR抗体胶乳颗粒、防腐剂、助悬剂，溶剂为去离子水。本发明专利技术还提供了一种用于检测可溶性转铁蛋白受体sTfR的测定试剂盒的制备使用方法。本发明专利技术的优点在于：本发明专利技术基于胶乳增强免疫比浊法，操作简单、检测速度快；此外，相比其他试剂盒，本发明专利技术试剂盒的稳定性得到了大大的提高。

A kit for the determination of sTfR and its preparation

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测可溶性转铁蛋白受体sTfR的测定试剂盒及其制备使用方法
本专利技术涉及生物化学
，尤其涉及一种用于检测可溶性转铁蛋白受体sTfR的测定试剂盒及其制备使用方法。
技术介绍
血清sTfR的存在是由Kohgo在1986年首次证实的，此后，sTfR在贫血中的临床诊断价值日益受到重视，其作为一项评估组织细胞铁消耗的指标，有着重要应用价值。铁缺乏症是体内缺铁发展不同阶段的总称，根据病理、生理和临床表现，分为储铁缺乏(irondepletion,ID)、缺铁性红细胞生成(irondeficienterythropoiesis，IDE)和缺铁性贫血(irondeficiencyanemia，IDA)三个连续发展的阶段，可见IDA是体内慢性渐进性缺铁的发展结果。血清铁(SI)、总铁结合力(TIBC)、转铁蛋白饱和度(TS)、转铁蛋白(TF)、血清铁蛋白(SF)是诊断缺铁性贫血(IDA)传统的常用的铁参数。这些铁参数的诊断标准有较多争议的问题，有时会给临床带来一些困惑。自从1986年Kohgo应用放免法检出人血清中存在少量sTfR后，人们对sTfR进行了大量的研究，越来越多的研究证明sTfR在缺铁性贫血中的诊断价值，几乎所有的研究都提示：在机体铁缺乏时，sTfR是升高的。Skikne等研究发现：在储存铁减少阶段，SF迅速降低，而sTfR仅轻微升高，随着储存铁耗竭而组织缺铁时，sTfR迅速升高，并与组织缺铁的严重程度呈正相关。当组织缺铁达5mg/L(相当于丢失1-2U全血)时，sTfR升至正常的2倍，而其他铁参数如红细胞游离原卟啉(FEP)、TS、S1、TIBC等均未见明显改变，而发展到IDA时，sTfR可上升至正常的2-3倍。因此，可认为sTfR是唯一能对红细胞生成缺铁期(IDE)做出诊断的敏感指标，可反映造血组织早期缺铁。有些学者还对sTfR和几种传统的铁参数在缺铁性贫血中的诊断价值做了比较，从ROCAUC看，以sTfR的诊断价值最大。可溶性转铁蛋白受体(sTfR)比常规铁代谢参数更有优势，其稳定性和可靠性好，除了无性别和年龄差异、生理波动和日间差异小以外，其浓度不受各种疾病因素的干扰，不仅能用于IDA的早期诊断，还可以区别在炎症作用下血清铁蛋白升高的贫血患者，特别是在鉴别复杂类型的贫血方面有着重大意义。目前，可溶性转铁蛋白受体(sTfR)的检测方法多是基于普通的免疫比浊法和酶联免疫吸附法(ELISA)。普通的免疫比浊法是利用反应中的抗原抗体反应形成免疫复合物，在一定时间内复合物聚合出现浊度，该检测方法要求反应时形成的免疫复合物的数量和分子量达到一定的高度，不然就很难测出。酶联免疫吸附法(ELISA)是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术，该方法检测操作繁琐、自动化程度低、耗时长，不利于快速检测。胶乳增强免疫比浊法是将待测物质相对应的抗体包被在胶乳颗粒上，使抗原抗体结合物的体积增大，光通过之后，透射光和散射光的强度变化更为显著，从而提高试验的敏感性。此方法操作步骤简便，几分钟就能获得测试结果，也避免了许多人为操作带来的误差和外界环境因素的干扰，能较准确真实的反映被测物质的含量。不过，胶乳增强免疫比浊法检测sTfR试剂盒仍存在一定的稳定性问题。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种基于胶乳增强免疫比浊法，并且稳定性好的用于检测可溶性转铁蛋白受体sTfR的测定试剂盒及其制备使用方法。本专利技术采用以下技术方案解决上述技术问题：一种用于检测可溶性转铁蛋白受体sTfR的测定试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：试剂R2：作为本专利技术的优选方式之一，所述试剂R1中，缓冲液具体为Tris缓冲液，表面活性剂为吐温20，防腐剂为Proclin300，螯合剂为乙二胺四乙酸二钠。作为本专利技术的优选方式之一，所述试剂R1的pH值为7.2-8.0。作为本专利技术的优选方式之一，所述试剂R2中，缓冲液具体为磷酸盐缓冲液，防腐剂为Proclin300，助悬剂为聚乙二醇。作为本专利技术的优选方式之一，所述试剂R2中，抗sTfR抗体胶乳颗粒的粒径为50-150nm，采用的抗sTfR抗体为sTfR单克隆抗体或sTfR多克隆抗体。作为本专利技术的优选方式之一，所述试剂R2的pH值为7.2-8.0。作为本专利技术的优选方式之一，所述抗sTfR抗体胶乳颗粒的获取方法如下：(1)清洗：取氨基胶乳微球颗粒溶液用PBS溶液稀释，震荡混合均匀，离心弃上清液，保留沉淀；(2)活化：在沉淀中加入活化剂活化，震荡混合均匀，再离心弃上清液，保留沉淀；(3)偶联：在沉淀中加入PBS溶液稀释，震荡混合均匀后再加入抗sTfR抗体，震荡混合均匀；再离心弃上清液，保留沉淀；(4)封闭：在沉淀中加入封闭液，震荡混合均匀，即得包被抗sTfR抗体的胶乳颗粒溶液。作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(1)中氨基胶乳微球颗粒为直径为50-150nm的氨基基团胶乳微球颗粒。作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(2)中的活化剂与步骤(4)中的封闭液均为PBS溶液。一种上述用于检测可溶性转铁蛋白受体sTfR的测定试剂盒的制备方法，包括如下具体步骤：(1)配制试剂R1：按照试剂R1的组分含量称取原料，并将各原料溶解于去离子水中；搅拌均匀后，用盐酸或氢氧化钠调pH，最终再用去离子水定容，制得试剂R1；(2)配制试剂R2：按照试剂R2的组分含量称取原料，并将“抗sTfR抗体胶乳颗粒”以外的各原料溶解于去离子水中；搅拌均匀后，用盐酸或氢氧化钠调pH，接着加入制备好的抗sTfR抗体胶乳颗粒，搅拌均匀后再用去离子水定容，制得试剂R2。一种上述用于检测可溶性转铁蛋白受体sTfR的测定试剂盒的使用方法，包括如下具体步骤：(1)吸取3μL样本，加入150μL试剂R1，混匀并置于37℃孵育5min，读取吸光度A1；(2)读取吸光度A1后，加入30μL试剂R2，混匀并置于37℃孵育5min，读取吸光度A2；(3)按照ΔA＝A2-A1来计算ΔA，根据ΔA测算样本中sTfR含量。本专利技术相比现有技术的优点在于：(1)本专利技术基于胶乳增强免疫比浊法，操作简单、检测速度快、稳定性好；(2)本专利技术的检测试剂盒用到的胶乳微球颗粒优选直径为50-150nm的氨基基团胶乳微球颗粒，合适的粒径能有效的提高检测试剂盒的稳定性、灵敏度、线性范围；(3)本专利技术的检测试剂盒中，抗体包被在微球上的化学偶联法将二者用化学键结合在一起，化学键的稳定性较强，能保证抗体包被在微球上的稳定性，给试剂盒的稳定性带来了大大的提高。附图说明图1是实施例7中本专利技术各实施例试剂盒的标准工作曲线图；图2是实施例7中本专利技术试剂盒与Roche公司可溶性转铁蛋白受体检测试剂盒测定人血清中可溶性转铁蛋白受本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测可溶性转铁蛋白受体sTfR的测定试剂盒，其特征在于，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：/n试剂R1：/n

【技术特征摘要】
1.一种用于检测可溶性转铁蛋白受体sTfR的测定试剂盒，其特征在于，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：



其溶剂为去离子水；
试剂R2：



其溶剂为去离子水。


2.根据权利要求1所述的用于检测可溶性转铁蛋白受体sTfR的测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中，缓冲液具体为Tris缓冲液，表面活性剂为吐温20，防腐剂为Proclin300，螯合剂为乙二胺四乙酸二钠。


3.根据权利要求1所述的用于检测可溶性转铁蛋白受体sTfR的测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R1的pH值为7.2-8.0。


4.根据权利要求1所述的用于检测可溶性转铁蛋白受体sTfR的测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R2中，缓冲液具体为磷酸盐缓冲液，防腐剂为Proclin300，助悬剂为聚乙二醇。


5.根据权利要求1所述的用于检测可溶性转铁蛋白受体sTfR的测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R2中，抗sTfR抗体胶乳颗粒的粒径为50-150nm，采用的抗sTfR抗体为sTfR单克隆抗体或sTfR多克隆抗体。


6.根据权利要求1所述的用于检测可溶性转铁蛋白受体sTfR的测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R2的pH值为7.2-8.0。


7.根据权利要求1-6任一所述的用于检测可溶性转铁蛋白受体sTfR的测定试剂盒，其特征在于，所述抗sTfR抗体胶乳颗粒的获取方法如下：
(1)清洗：取氨基胶乳微球颗粒溶液用PBS溶液稀释，震荡混合均匀，离心弃上清...

【专利技术属性】
技术研发人员：芮双印，符修乐，鲁萍，
申请(专利权)人：安徽大千生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34