一种包括HAPLN1作为有效成分的用于软骨再生的组合物制造技术

本发明专利技术涉及一种包括HAPLN1作为有效成分的用于软骨再生的组合物，根据本发明专利技术，HAPLN1蛋白具有促进软骨形成和关节软骨再生的能力，可以通过提高软骨细胞中TGF‑β受体I的表达水平来增加具有软骨形成能力的细胞的组成比并诱导软骨组织再生。因此，本发明专利技术的HAPLN1蛋白作为用于调节TGF‑β信号传导的新型组合物，可有效地用作用于软骨再生的药物组合物、用于软骨再生的保健食品组合物或用于软骨再生的试料组合物。

A composition for cartilage regeneration including hapln1 as an effective component

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】一种包括HAPLN1作为有效成分的用于软骨再生的组合物
本专利技术涉及一种包括透明质酸和蛋白聚糖连接蛋白1(hyaluronanandproteoglycanlinkprotein1，HAPLN1)作为有效成分的用于软骨再生的组合物。
技术介绍
在人体骨骼相遇的铰链部分，由透明软骨(hyalinecartilage)组成的关节软骨(articularcartilage)相互接触以施加内部压力和拉力，并且每个关节具有滑液囊(synovialcapsule)包含滑液(synovialfluid)的形式，从而减少由关节运动引起的摩擦力。关节软骨与生长板(growthplate)软骨一起对应于软骨的形式中透明软骨，这些软骨组织的细胞外基质(extracellularmatrix，ECM)以Ⅱ型胶原蛋白(typeⅡcollagen)、蛋白聚糖(aggrecan)、透明质酸(hyaluronan)、HAPLN1(hyaluronanandproteoglycanlinkprotein1)等作为主要成分具有聚集体(aggregate)结构。其中，已知多数蛋白聚糖与透明质酸链结合，并HAPLN1通过更牢固地结合其两者的键而起到在物理化学上稳定聚集体的作用。在膝关节中软骨厚度约为2mm，当该区域因外伤或疾病而受损1mm2至4mm2时，可以通过自然愈合来再生，但当受损约20mm2时，很难通过自生能力来再生，并且通常带来极大的痛苦。另外，当由于如肿瘤和坏死等的各种原因而完全丧失关节软骨时，为了恢复关节功能，进行例如将人工关节嵌入相应位置等的治疗。然而，由于人工关节为与关节功能类似的人工构造而已，因此对生物体来说是异物，从而难以保持生物相容性。另外，由于人工关节需要在生物体内的严格环境中进行复杂的运动，因此难以维持20年以上，在某些情况下，用作其材料的树脂或金属等的劣化、磨损粉末的产生等可以导致功能降低或疼痛，并且也不能说耐久性足够。因此，作为人工关节治疗的替代，需要一种用于再生关节软骨本身的技术。另外，根据最近的研究，已经报道了通过穿刺关节表面并将含有骨形成因子(bonemorphogeneticprotein，BMP)的胶原蛋白放置在所需区域来进行的关节软骨再生。然而，再生的关节软骨不与相邻的既有关节软骨连续形成，因此这不能说是完全的再生。此外，由于牛海绵状脑病(bovinespongiformencephalopathy，BSE)，所谓疯牛病之类的问题，胶原蛋白倾向于避免在生物体内应用。因此，需要开发仅使用公认的生物应用材料来再生软骨的新型组合物。
技术实现思路
技术问题本专利技术的一目的在于提供一种用于软骨再生的药物组合物。本专利技术的另一目的在于提供一种用于软骨再生的保健食品组合物。本专利技术的另一目的还在于提供一种用于软骨再生的试料组合物。本专利技术的另一目的还在于提供一种在体外(invitro)再生软骨组织的方法。技术方案为了实现所述目的，本专利技术提供一种包括透明质酸和蛋白聚糖连接蛋白1(hyaluronanandproteoglycanlinkprotein1，HAPLN1)作为有效成分的用于软骨再生的药物组合物、用于软骨再生的保健食品组合物或用于软骨再生的试料组合物。另外，本专利技术提供一种通过处理透明质酸和蛋白聚糖连接蛋白1(hyaluronanandproteoglycanlinkprotein1，HAPLN1)来在体外(invitro)再生软骨组织的方法。有益效果根据本专利技术，HAPLN1蛋白具有促进软骨形成和关节软骨再生的能力，可以通过提高软骨细胞中TGF-β受体I的表达水平来增加具有软骨形成能力的细胞的组成比并诱导软骨组织再生。因此，本专利技术的HAPLN1蛋白作为用于调节TGF-β信号传导的新型组合物，可有效地用作用于软骨再生的药物组合物、用于软骨再生的保健食品组合物或用于软骨再生的试料组合物。附图说明图1为确认由于对衰老小鼠的退化的生长板反复腹膜内给予HAPLN1蛋白而引起的软骨形成能力的图，图1(A)为通过番红O/固绿FCF(SafraninO/FastGreenFCF)染色法来确认组织中蛋白聚糖的图，图1(B)为通过免疫组织化学(immunohistochemistry)来确认具有软骨形成能力的软骨细胞的存在的图。图2为通过免疫荧光(immunofluorescence)来确认对小鼠受损膝关节组织关节腔内给予HAPLN1蛋白的软骨再生能力的图。图3为确认HAPLN1蛋白在人类关节软骨细胞促进软骨形成的能力的图，图3(A)为通过聚合酶链反应(polymerasechainreaction，PCR)来确认软骨特异性基因SOX9、软骨底物成分蛋白聚糖和Ⅱ型胶原蛋白的基因表达量的图，图3(B)为通过番红O/固绿FCF染色法来确认在细胞外基质积聚的蛋白聚糖的图。图4为确认HAPLN1蛋白在小鼠关节软骨细胞中的TGF-β信号传导调节能力的图，图4(A)为通过免疫印迹法(westernblot)来确认HAPLN1蛋白的TGF-β受体I调节能力的图，图4(B)和4(C)为通过聚合酶链反应和免疫印迹法来确认HAPLN1蛋白的TGF-β受体I稳定能力的图，图4(D)为通过免疫印迹法来确认由HAPLN1蛋白进行的细胞表面TGF-β受体I呈递能力的图。具体实施方式本专利技术的专利技术人已经确认在衰老的小鼠和关节软骨损伤的小鼠中由HAPLN1蛋白进行的促进软骨形成和软骨再生的能力。另外，由HAPLN1蛋白进行的促进软骨形成能力在软骨细胞中也有效，并且通过增加软骨细胞的TGF-β受体I的给予量来确认信号调节效果，从而完成了本专利技术。本专利技术提供一种包括透明质酸和蛋白聚糖连接蛋白1(hyaluronanandproteoglycanlinkprotein1，HAPLN1)作为有效成分的用于软骨再生的药物组合物。优选地，所述HAPLN1可以促进软骨形成并保护关节软骨。优选地，所述HAPLN1可以提高TGF-β受体I的表达水平，以增加具有软骨形成能力的细胞的组成比并诱导软骨组织再生。当本专利技术的组合物为药物组合物时，为了给药，除上述有效成分外，还可以包括药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。所述载体、赋形剂和稀释剂可以包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯胶、藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶细胞纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯(methylhydroxybenzoate)、羟基苯甲酸丙酯(propylhydroxybenzoate)、滑石粉、硬脂酸镁和矿物油。根据常规方法，本专利技术的药物组合物可以分别制成粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、混悬剂、乳剂、糖浆剂、气雾剂等的口服剂型、外用剂、栓剂或无菌注射溶液的形式以使用。具体地，当配制时，可以通过使用稀释剂或赋形剂如常用的填充剂、增重剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、表面活性剂等来制备本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种包括透明质酸和蛋白聚糖连接蛋白1(HAPLN1)作为有效成分的用于软骨再生的药物组合物。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170829 KR 10-2017-0109422;20180823 KR 10-2018-001.一种包括透明质酸和蛋白聚糖连接蛋白1(HAPLN1)作为有效成分的用于软骨再生的药物组合物。


2.根据权利要求1所述的用于软骨再生的药物组合物，其特征在于，所述HAPLN1促进软骨形成并保护关节软骨。


3.根据权利要求1所述的用于软骨再生...

【专利技术属性】
技术研发人员：金大敬，张智旻，
申请(专利权)人：哈普赛安思有限公司，
类型：发明
国别省市：韩国;KR