一种检测2019新型冠状病毒的多重实时荧光定量PCR试剂盒、方法及引物探针组合物技术

本发明专利技术是一种用于同步检测2019新型冠状病毒ORF1ab基因、N基因、S基因和人B2M基因的多重反转录实时荧光定量PCR检测试剂盒及其专用引物和探针组合，该试剂盒采用单管四荧光通道同时检测三个2019新型冠状病毒基因和一个人内参基因，能检测呼吸道和血液样本中2019新型冠状病毒RNA的存在。本发明专利技术检测周期短、特异性强、灵敏度高、漏检率低、重复性好，能通过对人内参基因的检测结果对样本的提取和扩增过程进行质量监控，并通过dUTP‑UNG酶防污染体系降低由气溶胶污染导致的假阳性结果出现。

Novel coronavirus multidetector real-time PCR kit, method and primer probe for detection of 2019 new coronaviruses

【技术实现步骤摘要】
一种检测2019新型冠状病毒的多重实时荧光定量PCR试剂盒、方法及引物探针组合物
本专利技术涉及核酸检测
，具体涉及一种检测2019新型冠状病毒的多重实时荧光定量PCR试剂盒、方法及引物探针组合物。
技术介绍
人感染2019新型冠状病毒(SARS-CoV-2)后导致的肺炎称为新型冠状病毒肺炎(COVID-19)，常见体征包括呼吸道症状、发热、咳嗽、气促和呼吸困难，在重症病例中，感染可导致肺炎、严重急性呼吸综合征、肾衰竭甚至死亡，截止目前尚无特异性治疗方法，因此早发现早隔离是最为有效的遏制疫情发展的措施。国家卫健委发布的《新型冠状病毒感染的肺炎实验室检测技术指南》中明确指出，新型冠状病毒感染的检测方法为反转录实时荧光定量PCR，且检测方法主要针对新型冠状病毒基因组开放阅读框1ab(openreadingframe1ab，ORF1ab)和核壳蛋白(nucleocapsidprotein，N)，若同一份标本中新型冠状病毒两个靶标特异性反转录实时荧光定量PCR检测结果均为阳性，则判定病例为阳性，但是同时指南也指出，由于病毒变异导致阴性情况本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测2019新型冠状病毒的引物探针组合物，其特征在于，/n包括用于扩增2019新型冠状病毒ORF1ab基因、N基因、S基因和人B2M基因的引物、以及用于检测2019新型冠状病毒ORF1ab基因、N基因、S基因和人B2M基因的相应探针；/n所述用于扩增2019新型冠状病毒ORF1ab基因的正向引物序列为5’-TGTTAATGCCTATATTAACCTTGACCA-3’，如SEQ ID NO：1所示，用于扩增2019新型冠状病毒ORF1ab基因的反向引物序列为5’-GTGAGTTTTAACCTCTCTTCCGTG-3’，如SEQ ID NO：2所示；/n所述用于扩增2019新型冠状病毒N基...

【技术特征摘要】
1.一种检测2019新型冠状病毒的引物探针组合物，其特征在于，
包括用于扩增2019新型冠状病毒ORF1ab基因、N基因、S基因和人B2M基因的引物、以及用于检测2019新型冠状病毒ORF1ab基因、N基因、S基因和人B2M基因的相应探针；
所述用于扩增2019新型冠状病毒ORF1ab基因的正向引物序列为5’-TGTTAATGCCTATATTAACCTTGACCA-3’，如SEQIDNO：1所示，用于扩增2019新型冠状病毒ORF1ab基因的反向引物序列为5’-GTGAGTTTTAACCTCTCTTCCGTG-3’，如SEQIDNO：2所示；
所述用于扩增2019新型冠状病毒N基因的正向引物序列为5’-GACAAGGCGTTCCAATTAACAC-3’，如SEQIDNO：3所示，用于扩增2019新型冠状病毒N基因的反向引物序列为5’-GAGATCTTTCATTTTACCGTCACC-3’，如SEQIDNO：4所示；
所述用于扩增2019新型冠状病毒S基因的正向引物序列为5’-TCCATTTTTGGGTGTTTATTACCACA-3’，如SEQIDNO：5所示，用于扩增2019新型冠状病毒S基因的反向引物序列为5’-GTGAGACATATTCAAAAGTGCAATTATTCG-3’，如SEQIDNO：6所示；
所述用于扩增人B2M基因的正向引物序列为5’-GTTGAGTATGCCTGCCGTGT-3’，如SEQIDNO：7所示，用于扩增人B2M基因的反向引物序列为5’-ATGCGGCATCTTCAAACCT-3’，如SEQIDNO：8所示；
所述用于检测2019新型冠状病毒ORF1ab基因的探针序列为5’-TTGACACTGACTTAACAAAGCCTTACATTAAG-3’，如SEQIDNO：9所示；
所述用于检测2019新型冠状病毒N基因的探针序列为5’-ACTACCGAAGAGCTACCAGACGA-3’，如SEQIDNO：10所示；
所述用于检测2019新型冠状病毒S基因的探针序列为5’-AAACTCTGAACTCACTTTCCATCCAACT-3’，如SEQIDNO：11所示；
所述用于检测人B2M基因的探针序列为5’-ATGATGCTGCTTACATGTCTCGATCC-3’，如SEQIDNO：12所示。


2.如权利要求1所述的一种检测2019新型冠状病毒的引物探针组合物，其特征在于，用于检测2019新型冠状病毒ORF1ab基因的探针序列为如SEQIDNO：9所示，探针5’端添加荧光报告基团FAM，3’端添加荧光猝灭基团BHQ-1；用于检测2019新型冠状病毒N基因的探针序列如SEQIDNO：10所示，探针5’端添加荧光报道基团Cy5，3’端添加荧光猝灭就团BHQ-2；用于检测2019新型冠状病毒S基因的探针序列如SEQIDNO：11所示，探针5’端添加荧光报道基团ROX，3’端添加荧光猝灭基团BHQ-2；用于检测人B2M基因的探针序列如SEQIDNO：12所...

【专利技术属性】
技术研发人员：张迪骏，曾县平，张顺，吴勇，
申请(专利权)人：宁波海尔施基因科技有限公司，中国科学院大学宁波华美医院，
类型：发明
国别省市：浙江;33