引物探针组合物及其在制备副流感病毒分型检测试剂盒中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种引物探针组合物在制备副流感病毒分型检测试剂盒的应用，该引物探针植物组合物至少包括用于检测副流感病毒4a型的引物和探针，以及用于检测副流感病毒4b型的引物和探针；本发明专利技术所述的引物探针组合物能够对副流感病毒4a型和4b型进行特异性分型，且检测灵敏度高，据检测，该引物探针组合物对副流感病毒4a型的最低检出限为4.8

【技术实现步骤摘要】
引物探针组合物及其在制备副流感病毒分型检测试剂盒中的应用


[0001]本专利技术属于病毒检测
，特别涉及一种引物探针组合物及其在制备副流感病毒分型检测试剂盒中的应用。

技术介绍

[0002]副流感病毒是属于副黏病毒属的一类有包膜的单股负链RNA病毒，是一种常见的呼吸道感染病原体，主要引起婴幼儿及儿童严重的下呼吸道感染疾病，目前缺乏有效的治疗药物和病毒疫苗。
[0003]根据遗传性和抗原性，副流感病毒可以分为1型、2型、3型和4型，1
‑
3型副流感病毒是较为常见的引起婴幼儿急性呼吸道感染的重要病原体，4型仅会引起症状较轻的婴幼儿呼吸道感染，且4型又可进一步分为4a型和4b型。副流感病毒所引起的感染症状和流感病毒较为相似，仅依靠临床症状及常规的检测方法进行病毒病原的确定并不可靠。因此早期快速对呼吸道病毒感染的病原进行诊断能够及时指导临床治疗，为合理选择抗病毒药物提供依据，避免药物滥用。
[0004]为了解决上述问题，目前市面上已出现较多能够对副流感病毒1型、2型、3型和4型进行分型的试剂盒，如公开号为CN108676913A的中国专利技术专利申请公开的一种人副流感病毒核酸免提取基因分型检测试剂盒；也有少量能够对副流感病毒4a型和4b型进行分型的试剂盒，如公开号为CN108998574A的中国专利技术专利申请公开的一种人副流感病毒4型核酸检测试剂盒。
[0005]上述试剂盒中所采用的引物和探针虽然对副流感病毒4a型和4b型具有优异的检测灵敏度，但特异性仍旧较低，不能有效区分人副流感病毒1型和4型。

技术实现思路

[0006]本专利技术的专利技术目的是提供一种引物探针组合物，该引物探针组合物能够对副流感病毒4a型和4b型进行分型检测，且特异性强、灵敏度高。
[0007]为实现上述专利技术目的，本专利技术的技术方案如下：
[0008]一种引物探针组合物，其特征在于，至少包括用于检测副流感病毒4a型的引物和探针，以及用于检测副流感病毒4b型的引物和探针；
[0009]其中，所述的用于检测副流感病毒4a型的引物和探针包括：具有如SEQ No.10所示核苷酸序列的正向引物、具有如SEQ ID No.11所示核苷酸序列的反向引物以及具有如SEQ ID No.12所示核苷酸序列的探针；
[0010]所述的用于检测副流感病毒4b型的引物和探针包括：具有如SEQ No.13所示核苷酸序列的正向引物、具有如SEQ ID No.14所示核苷酸序列的反向引物以及具有如SEQ ID No.15所示核苷酸序列的探针。
[0011]本专利技术所述的引物探针组合物能够对副流感病毒4a型和4b型进行特异性分型，且
检测灵敏度高，据检测，该引物探针组合物对副流感病毒4a型的最低检出限为4.8
×
101copies/μL，对副流感病毒4b型的最低检出限为5.2
×
101copies/μL，灵敏度高；同时该引物探针组合物能够特异性地对副流感病毒4a型和4b型进行分型，与副流感病毒1型、2型或3型均不存在交叉反应，特异性极强，能够快速、准确地对副流感病毒进行分型检测。
[0012]作为优选，上述的引物探针组合物还包括用于检测副流感病毒1型、2型和3型中至少一种的引物和探针。
[0013]作为优选，在上述的引物探针组合物中，用于检测副流感病毒1型的引物和探针包括：具有如SEQ No.1所示核苷酸序列的正向引物、具有如SEQ ID No.2所示核苷酸序列的反向引物以及具有如SEQ ID No.3所示核苷酸序列的探针。
[0014]作为优选，在上述的引物探针组合物中，引物探针组合物用于检测副流感病毒2型的引物和探针包括：具有如SEQ No.4所示核苷酸序列的正向引物、具有如SEQ ID No.5所示核苷酸序列的反向引物以及具有如SEQ ID No.6所示核苷酸序列的探针。
[0015]作为优选，在上述的引物探针组合物中，引物探针组合物用于检测副流感病毒3型的引物和探针包括：具有如SEQ No.7所示核苷酸序列的正向引物、具有如SEQ ID No.8所示核苷酸序列的反向引物以及具有如SEQ ID No.9所示核苷酸序列的探针。
[0016]本专利技术中，不同组的引物和探针之间均互不干扰，且与非目标病毒之间也不存在交叉反应，特异性强。
[0017]作为优选，在上述的引物探针组合物中，引物探针组合物用于检测副流感病毒1型、2型、3型、4a型和4b型的各探针均具有荧光报告基团和荧光淬灭基团，所述的荧光报告基团为FAM、Cy5、ROX、VIC或TAMRA且各探针所具有的荧光报告基团均不相同；所述的荧光淬灭基团为BHQ
‑
1或BHQ
‑
2。
[0018]以用于检测副流感病毒1型、2型3型、4a型和4b型的探针中的荧光报告基团依次为FAM、Cy5、ROX、VIC和TAMRA为例，在经多重RT
‑
qPCR后，若FAM通道Ct值＜38且扩增曲线呈典型S型，其余荧光信号通道Ct值≥38或显示为Undetermined/No Ct，则样本为副流感病毒1型感染；若Cy5通道Ct值＜38，且扩增曲线呈典型S型，其余荧光信号通道Ct值≥38或显示为Undetermined/No Ct，则样本为副流感病毒2型感染；若ROX通道Ct值＜38，且扩增曲线呈典型S型，其余荧光信号通道Ct值≥38或显示为Undetermined/No Ct，则样本为副流感病毒3型感染；若VIC通道Ct值＜38，且扩增曲线呈典型S型，其余荧光信号通道Ct值≥38或显示为Undetermined/No Ct，则样本为副流感病毒4a型感染；若TAMRA通道Ct值＜38，且扩增曲线呈典型S型，其余荧光信号通道Ct值≥38或显示为Undetermined/No Ct，则样本为副流感病毒4b型感染。
[0019]基于上述引物和探针组合物的特异性和灵敏度，本专利技术还提供了上述的引物探针组合物在制备副流感病毒分型检测试剂盒中的应用；以及，一种副流感病毒4型的实时荧光定量PCR检测试剂盒，该试剂盒中即含有上述的引物探针组合物；该引物探针组合物可以仅包含用于检测副流感病毒4a型和4b型的引物和探针，还可以包含用于检测副流感病毒1型、2型和3型中至少一种的引物和探针。
[0020]作为优选，上述的副流感病毒4型实时荧光定量PCR检测试剂盒还含有PCR反应液和RT
‑
qPCR酶系，所述的PCR反应液包括dNTPs、dUTP、Mg
2+
和缓冲液；所述的RT
‑
qPCR酶系包括UNG酶、逆转录酶和热启动DNA聚合酶。
[0021]本专利技术中，dUTP和UNG酶组成了PCR反应体系中的防污染体系，该dUTP
‑
UNG酶防污染体系能够有效避免气溶胶污染影响PCR结果，从根本上避免假阳性结果的出现。
[0022]与现有技术相比，本专利技术的有益效果体现在：
[0023本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种引物探针组合物，其特征在于，至少包括用于检测副流感病毒4a型的引物和探针，以及用于检测副流感病毒4b型的引物和探针；其中，所述的用于检测副流感病毒4a型的引物和探针包括：具有如SEQ No.10所示核苷酸序列的正向引物、具有如SEQ ID No.11所示核苷酸序列的反向引物以及具有如SEQ ID No.12所示核苷酸序列的探针；所述的用于检测副流感病毒4b型的引物和探针包括：具有如SEQ No.13所示核苷酸序列的正向引物、具有如SEQ ID No.14所示核苷酸序列的反向引物以及具有如SEQ ID No.15所示核苷酸序列的探针。2.如权利要求1所述的引物探针组合物，其特征在于，还包括用于检测副流感病毒1型、2型和3型中至少一种的引物和探针。3.如权利要求2所述的引物探针组合物，其特征在于，用于检测副流感病毒1型的引物和探针包括：具有如SEQ No.1所示核苷酸序列的正向引物、具有如SEQ ID No.2所示核苷酸序列的反向引物以及具有如SEQ ID No.3所示核苷酸序列的探针。4.如权利要求2所述的引物探针组合物，其特征在于，用于检测副流感病毒2型的引物和探针包括：具有如SEQ No.4所示核苷酸序列的正向引物、具有如SEQ ID No.5所示核苷酸序列的反向引物以及具有如SEQ ID No.6所示核苷酸序列的探针。5.如权利要求2所述的引物探针组合物，其特征在于，用于检测副流感病毒3型的引...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵林清，张迪骏，陈冬梅，
申请(专利权)人：宁波海尔施基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：