一种细小病毒B19核酸定量检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种细小病毒B19核酸定量检测试剂盒。本发明专利技术设计了一组细小病毒B19核酸定量检测引物与探针组合，序列如SEQ ID NO：1‑6所示；并进一步构建了细小病毒B19核酸定量检测试剂盒。该试剂盒具有检测灵敏度高、重复性好、引物和探针保守性高、特异性强、覆盖细小病毒B19不同的亚型或变种、有利于提高B19V检测的准确性和特异性、引入高效的内标系统、解决靶基因和内标同时扩増而导致的相互抑制和干扰等问题、能够高效的监控整个PCR扩増整个过程、避免出现假阴性结果等优点，核酸DMA提取方法简单，核酸纯度高，成本较低，而且操作简便快速、成本低廉，特别适用于B19V精确的定量检测，可广泛的应用于生物医学临床诊断领域中。

A kit for quantitative detection of parvovirus B19 nucleic acid

【技术实现步骤摘要】
一种细小病毒B19核酸定量检测试剂盒
本专利技术属于生物医学及临床诊断
更具体地，涉及一种细小病毒B19(B19V)核酸定量检测试剂盒。
技术介绍
人细小病毒B19(humanparvovirusB19，简称B19V)是一种单链、线性DNA病毒，1977年才首次被发现。在人群中存在普遍的易感性，人群感染率达60％～70％以上，以冬春季常见。主要通过呼吸道、飞沫传播，也可通过血液和胎盘传播。在不同年龄和免疫状态的人群中临床表现不同，能引起感染性红斑胎儿水肿甚至死亡、急性关节炎、慢性贫血症、再生障碍性危象等多种病症。近年来较多的研究表明骨髓中红细胞、白细胞、血小板3系前体细胞均可成为B19V感染的靶细胞，受到病毒攻击导致全血细胞减少。然而，由于机体免疫功能低下，不能中和及消除感染的病毒，而造成病毒持续感染的时间久，影响血液病的治疗效果。镰状细胞贫血症等血液系统疾病患者感染会发生再生障碍性危象而导致急性贫血。因此，对于血液肿瘤及免疫性血液疾病，当出现治疗效果不显著时，建议检测B19V，对有B19V感染患者，加用免疫球蛋白治疗或者抗病毒本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种细小病毒B19核酸定量检测引物与探针组合，其特征在于：包括如下组分：/n用于检测靶基因的探针为：5’-ATTTGTCGGAAGCCCAGTT-’3，其5’端标记为FAM荧光发生基团，3’端标记为MGB；/n用于内标检测的探针为：5’-ATGCCTGCTGACTTGCCTT-’3，其5’端标记为ROX荧光发生基团，3’端标记为MGB；/n用于扩增靶基因的上游引物为：5’-TAGTGAAGACTTACACAAGCC-’3；/n用于扩增靶基因的下游引物为：5’-ATACCTAAAGTCATGAATCCTT-’3；/n用于扩增内标的上游引物为：5-CCCACTGCATTGCCGAA-’3；/n...

【技术特征摘要】
1.一种细小病毒B19核酸定量检测引物与探针组合，其特征在于：包括如下组分：
用于检测靶基因的探针为：5’-ATTTGTCGGAAGCCCAGTT-’3，其5’端标记为FAM荧光发生基团，3’端标记为MGB；
用于内标检测的探针为：5’-ATGCCTGCTGACTTGCCTT-’3，其5’端标记为ROX荧光发生基团，3’端标记为MGB；
用于扩增靶基因的上游引物为：5’-TAGTGAAGACTTACACAAGCC-’3；
用于扩增靶基因的下游引物为：5’-ATACCTAAAGTCATGAATCCTT-’3；
用于扩增内标的上游引物为：5-CCCACTGCATTGCCGAA-’3；
用于扩增内标的下游引物为：5’-GCCCAGGAAGACATCCTT-’3。


2.权利要求1所述引物与探针组合在制备细小病毒B19检测产品方面的应用。


3.一种细小病毒B19核酸定量检测试剂盒，其特征在于：含有权利要求1所述引物与探针组合。


4.根据权利要求3所述试剂盒，其特征在于：用于检测靶基因的探针使用浓度为5-20pmol；所述用于检测内标的探针使用浓度为5-20pmol；所述用于检测靶基因的上下游引物使用浓度为10-30pmol；所述用于检测内标的引物使用浓度为5-20pmol。


5.根据权利要求4所述试剂盒，其特征在于：用于检测靶基因的探针使用浓度为8pmol；所述用于检测内标的探针使用浓度为8pmol；所述用于检测靶基因的上下游引物使用浓度为20pmol；所述用于检测内标的引物使用浓度为20pmol。


6.根据权利要求3-5任一所述试剂盒，其特征在于：还包括B19V-PCR反应液、酶混合液、B19V定量参考品1-4、阴性质控品、临界阳性质控品、强阳性质控品；
所述B19V-PCR反应液包括权利要求1所述引物与探针组合和PCR缓冲液；
所述PCR缓冲液组成为30mol/LpH8.3Tris-HCl，10mmol/L(NH4)2SO4，...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓文奡，葛毅媛，谢龙旭，翁丹容，邱美兰，
申请(专利权)人：广东凯普生物科技股份有限公司，广州凯普医药科技有限公司，潮州凯普生物化学有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44