一种鳜鱼蛙病毒及弹状病毒双重PCR检测试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术涉及一种鳜鱼蛙病毒及弹状病毒双重PCR检测试剂盒及检测方法，属于PCR技术领域。本发明专利技术提供的鳜鱼蛙病毒及弹状病毒双重PCR检测试剂盒，包括引物、EasyTaq PCR SuperMix、阴性对照液和阳性对照液；其中，所述引物包括针鳜鱼蛙病毒的MCP基因保守区设计的的引物，还包括针对鳜鱼弹状病毒的N基因保守区设计的引物。本发明专利技术所述的鳜鱼蛙病毒及弹状病毒双重PCR检测试剂盒及检测方法，可以同时快速、高效、准确的检测鳜鱼蛙病毒和弹状病毒，省时省力，为染病的鳜鱼争取更多的治疗时间，对于后续研究及防控具有重要意义。

A double PCR detection kit and method for mandarin fish frog virus and rhabdovirus

【技术实现步骤摘要】
一种鳜鱼蛙病毒及弹状病毒双重PCR检测试剂盒及检测方法
本专利技术涉及一种鳜鱼蛙病毒及弹状病毒双重PCR检测试剂盒及检测方法，属于PCR

技术介绍
鳜鱼为近年来水产养殖户们青睐的品种，其肉质鲜美，营养价值高，格外受群众欢迎。然而，鳜鱼蛙病毒(Sinipercachuatsiranairidovirus，SCRIV)和鳜鱼弹状病毒(Sinipercachuatsirhabdovirus,SCRV)是近年来引起鳜鱼发病的主要病毒性病原，是对鳜鱼养殖业危害极大的两种病毒，一旦感染发病，鳜鱼存活率极低，且没有有效的治疗方法，给养殖户们带来极大的经济损失。当前，在实验室检测SCRIV和SCRV病毒最常见的方法为聚合酶链式反应检测法。聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction，PCR)又被称为无细胞分子克隆或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术。聚合酶链式反应像是一种生物体外的特殊DNA复制，其最大的特点是能将微量的DNA大幅增加，使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高等特点。近年来的流行病学研究中发现存本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鳜鱼蛙病毒及弹状病毒双重PCR检测试剂盒，其特征在于，包括引物、EasyTaqPCR SuperMix、阴性对照液和阳性对照液；/n其中，所述引物包括针对鳜鱼蛙病毒的MCP基因保守区设计的的引物，还包括针对鳜鱼弹状病毒的N基因保守区设计的引物。/n

【技术特征摘要】
1.一种鳜鱼蛙病毒及弹状病毒双重PCR检测试剂盒，其特征在于，包括引物、EasyTaqPCRSuperMix、阴性对照液和阳性对照液；
其中，所述引物包括针对鳜鱼蛙病毒的MCP基因保守区设计的的引物，还包括针对鳜鱼弹状病毒的N基因保守区设计的引物。


2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述针对鳜鱼蛙病毒的MCP基因保守区设计的的引物为SCRIV-400-F/SCRIV-400-R；所述针对鳜鱼弹状病毒的N基因保守区设计的引物为SCRV-280-F/SCRV-280-R；其中，所述引物序列如下所示：
SCRIV-400-F：AGTACACCATGCCAGAGGCCAAGC；SEQIDNO：1；
SCRIV-400-R：CCATGTCCCTGACTGAGCTGCTC；SEQIDNO：2；
SCRV-280-F：GTGGCAGCAATTGACATGTTCTTC；SEQIDNO：3；
SCRV-280-R：GATACTTTGGACAATCCCATGTC；SEQIDNO：4。


3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述EasyTaqPCRSuperMix为2×EasyTaqPCRSuperMix，所述阴性对照液为无菌ddH2O，所述阳性对照液为a和b；
a：提取鳜鱼蛙病毒的DNA为模板，以SCRIV-MCP-F/SCRIV-MCP-R为引物，进行PCR扩增，将回收纯化的扩增产物与pEASY-T1载体连接，转入大肠杆菌Trans1-T1感受态细胞中培养获得质粒，构建重组质粒P-SCRIV作为阳性对照；
b：以鳜鱼弹状病毒的cDNA为模板，以SCRV-N-F/SCRV-N-R为引物，进行PCR扩增，将回收纯化的扩增产物与pEASY-T1载体连接，转入大肠杆菌Trans1-T1感受态细胞中培养获得质粒，构建重组质粒P-SCRV作为阳性对照；
其中，所述SCRIV-MCP-F/SCRIV-MCP-R和SCRV-N-F/SCRV-N-R引物序列如下所示：
SCRIV-MCP-F：ATGTCTTCTGTTACGGGTTCTGGC；SEQIDNO：5；
SCRIV-MCP-R：TTACAGGATGGGGAAACCCATG；SEQIDNO：6；
SCRV-N-F：ATGGAAAACCAAATCATCAAGAG；SEQIDNO：7；
SCRV-N-R：TCACAAAGCTTGGTGTTTCAGC；SEQIDNO：8。


4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR扩增的反应体系为25μL，包括2×EasyTaqPCRSuperMix12.5μL、引物SCRIV-MCP-F/SCRIV-MCP-R各1μL或SCRV-N-F/SCRV-N-R各1μL、鳜鱼蛙病毒的DNA模板或鳜鱼弹状病毒的cDNA模板1μL、无菌ddH2O补充至...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁红茹，黄瑜聪，李宁求，林强，付小哲，刘礼辉，牛银杰，黄志斌，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院珠江水产研究所，
类型：发明
国别省市：广东;44